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Emotionsregulation bei Kindern mit ND: die Rolle der genomischen Variation, proteomischer Muster und früher Erfahrungen

17. Oktober 2023 aktualisiert von: IRCCS Eugenio Medea

Emotionale Verhaltensregulation bei Kindern mit neurologischen Entwicklungsstörungen: eine explorative Untersuchung der Rolle der genomischen Variation, proteomischer Muster und der Qualität früher Erfahrungen

Kinder mit neurologischen Entwicklungsstörungen (ND) stellen eine heterogene Population dar, die durch ein breites Spektrum klinischer Diagnosen gekennzeichnet ist (z. B. Zerebralparese, sensorische Beeinträchtigung, psychomotorische Retardierung), die mit verschiedenen Defiziten verbunden sind, die früh im Leben des Kindes auftreten. Obwohl allgemein gezeigt wurde, dass Kinder mit ND mehrere Unterschiede in den sozial-emotionalen Fähigkeiten und der emotionalen Verhaltensregulation aufweisen, bleiben die zugrunde liegenden Mechanismen, die mit mehr oder weniger beeinträchtigten Entwicklungsverläufen verbunden sind, noch teilweise unerforscht. Während mehrere Studien die Rolle biologischer und umweltbedingter Faktoren bei der emotionalen Verhaltensregulation von sich normal entwickelnden Kindern oder Kindern mit anderen Risikozuständen als ND (z. Polymorphismen und Umwelterfahrung in der emotionalen Verhaltensregulation von Kindern mit ND in den ersten Lebensjahren. Das Ziel dieses Projekts ist es, biologische (DNA-Methylierung, polymorphe Varianten und Proteomik) und Umweltfaktoren (z. B. schmerzhafte und/oder invasive Pflegeverfahren, Nähe und körperlicher Kontakt) zu untersuchen, die mit der emotionalen Verhaltensregulation von Kindern in Verbindung gebracht werden könnten mit ND.

Studienübersicht

Detaillierte Beschreibung

Hintergrund: Kinder mit neurologischen Entwicklungsstörungen (ND) sind eine heterogene Population, die durch eine Vielzahl von klinischen Diagnosen gekennzeichnet ist, die mit unterschiedlichen Defiziten einhergehen, die im Säuglings- und Kindesalter auftreten. Obwohl der diagnostische Rahmen variieren kann, haben mehrere Studien beobachtet, dass Kinder mit ND reduzierte soziale Beziehungsfähigkeiten aufweisen, die durch geringere interaktive und dyadische Aufmerksamkeitsfähigkeiten und eine verringerte Verwendung von zwischenmenschlichen Kommunikationshinweisen gekennzeichnet sind. Obwohl allgemein gezeigt wurde, dass Kinder mit ND mehrere Unterschiede in den sozial-emotionalen Fähigkeiten und der emotionalen Verhaltensregulation aufweisen, bleiben die zugrunde liegenden Mechanismen, die mit mehr oder weniger beeinträchtigten Trajektorien verbunden sind, teilweise unerforscht.

Primäres Ziel: in einer Stichprobe von Kindern mit ND im Alter von 3 bis 24 Monaten den Beitrag von 1) Methylierung von Kandidatengenen (z. B. OXTR, SLC6A4, BDNF und DRD4), 2) Polymorphismen in der emotionalen Verhaltensregulation und 3 zu untersuchen ) Umwelterfahrung (d. h. negative Erfahrungen und Qualität des elterlichen Verhaltens) in der emotionalen Verhaltensregulation.

Sekundäres Ziel: 1) Untersuchung eines möglichen Zusammenhangs zwischen Proteomik und emotionaler Verhaltensregulation bei einer Stichprobe von Kindern mit ND im Alter zwischen 3 und 24 Monaten; 2) funktionelle und strukturelle Muster von Kandidatengenen zu identifizieren, die mit emotionaler Verhaltensregulation verbunden sind, indem ein computergestützter Ansatz angewendet wird. Es werden auch Genmodule identifiziert, die möglicherweise mit der sozial-emotionalen Entwicklung in Interaktionsnetzwerken und räumlich-zeitlicher Koexpression im Enzephalon assoziiert sind.

Geplante Aktivitäten:

Methoden: Das Projekt umfasst eine klinische Gruppe von Kindern mit ND und ihren Müttern sowie eine Kontrollgruppe von Kindern mit normaler Entwicklung und ihren Müttern. Aufgrund der Art der Gruppen handelt es sich bei der Studie um ein quasi-experimentelles Forschungsdesign.

Die Studie umfasst die folgenden Verfahren:

  • Sammlung von biologischem Material: Speichelsammlung mit nicht-invasiven Modalitäten und dem Oragene OG575-Kit (Genotek-DNA) und Urinsammlung mit nicht-invasiven Modalitäten.
  • Verwaltung von Fragebögen und Tagebuch der Nähe: Die Mutter (sowohl für die klinische Gruppe als auch für die Kontrollgruppe) wird gebeten, einige Fragebögen in Bezug auf ihre Stimmung, ihr gewohntes Verhalten und die Entwicklung des Kindes auszufüllen. Auch wird evaluiert, wie viel und auf welche Weise die Mutter Körperkontakt verbringt (z. Zeit, die damit verbracht wird, das Baby zu streicheln; Zeit, die damit verbracht wird, das Baby zu halten; Zeit, die verbracht wird, während das Baby an der Brust der Mutter angelegt wird). Diese Daten werden durch die Verwendung einer umfunktionierten Version des „Closeness Diary“ von Raiskila et al. abgeleitet, die in einem elektronischen Format in Form einer APP (APP: inContatto) implementiert ist;
  • Videoaufzeichnung der Eltern-Kind-Interaktion in einem halbstrukturierten Kontext in 5 verschiedenen Phasen gemäß dem Still Face-Paradigma (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.

Die Interaktionen werden für die anschließende Verhaltenscodierung mit verschiedenen Codierungswerkzeugen auf Video aufgezeichnet. Die emotionale Verhaltensregulation des Kindes wird unter Verwendung der Codierungssysteme codiert: a) Infant and Caregiver Engagement Phase, b) Infant Regulatory Scoring System und Maternal Regulatory Scoring System by Tronik. Darüber hinaus wird das kindliche und mütterliche Verhalten mit dem Kodierungssystem Global Rating Scale von Murray und das mütterliche Berührungsverhalten mit dem Maternal Touch Coding System von Provenzi kodiert.

Studientyp

Beobachtungs

Einschreibung (Geschätzt)

248

Kontakte und Standorte

Dieser Abschnitt enthält die Kontaktdaten derjenigen, die die Studie durchführen, und Informationen darüber, wo diese Studie durchgeführt wird.

Studienkontakt

Studienorte

Teilnahmekriterien

Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.

Zulassungskriterien

Studienberechtigtes Alter

3 Monate bis 2 Jahre (Kind)

Akzeptiert gesunde Freiwillige

Ja

Probenahmeverfahren

Nicht-Wahrscheinlichkeitsprobe

Studienpopulation

Kinder mit ND und ihre Mütter werden durch konsekutive und praktische Stichproben an der U.O.C. rekrutiert. „Spezialisierte Rehabilitation – Neuropsychiatrische Pathologien des Entwicklungsalters“ und die U.O.C. "Funktionelle Rehabilitation" des Wissenschaftlichen Instituts "E. Medea" (Website Bosisio Parini). Kinder mit typischer Entwicklung und ihre Mütter werden aus Kindergärten in der Provinz Lecco rekrutiert. Nach Sichtung eines Informationsschreibens, in dem die allgemeine Untersuchung beschrieben wird, werden die Mütter telefonisch kontaktiert und zur freiwilligen Teilnahme eingeladen.

Beschreibung

Einschlusskriterien:

Kinder mit ND:

  • Alter zwischen 3 und 24 Monaten (chronologisch bzw. korrigiert bei Frühgeborenen);
  • leichte bis mittelschwere Entwicklungsverzögerung, dokumentiert durch klinische Anzeichen (z. B. Symptome einer Hirnverletzung bei neurologischer Untersuchung oder Neuroimaging) oder durch Entwicklungsskalen (z. B. Griffiths-III-Skalen) im Zusammenhang mit verschiedenen Diagnosen (z. B. Zerebralparese, Frühgeburtlichkeit);
  • Fehlen genetischer Syndrome. Die Griffiths-III-Skala wird verwendet, um den allgemeinen Entwicklungsstand des Kindes zu beurteilen.

Typische Entwicklungskinder:

  • Geburt bis zum Ende;
  • Alter zwischen 3 und 24 Monaten (chronologisch);
  • Fehlen einer peri- oder postnatalen Pathologie.

Einschlusskriterien für Mütter (DN und typische Entwicklung):

  • Alter über 18 Jahre;
  • gute Kenntnisse der italienischen Sprache;
  • Fehlen kognitiver Schwierigkeiten und/oder psychiatrischer Störungen;
  • keine Einnahme von Psychopharmaka;
  • nicht Teil einer Einelternfamilie.

Ausschlusskriterien: siehe Einschlusskriterien.

Studienplan

Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.

Wie ist die Studie aufgebaut?

Designdetails

  • Beobachtungsmodelle: Fallkontrolle
  • Zeitperspektiven: Querschnitt

Kohorten und Interventionen

Gruppe / Kohorte
Intervention / Behandlung
Kinder mit ND
Kinder mit neurologischen Entwicklungsstörungen (ND) im Alter zwischen 3 und 24 Monaten (chronologisch oder korrigiert bei Frühgeborenen).
Genomische DNA wird aus 0,4-ml-Aliquots jeder Speichelprobe unter Verwendung des vom Kit-Hersteller vorgeschlagenen Protokolls extrahiert, mit Qubit 2.0 (Invitrogen) quantifiziert und bei -20 °C gelagert. Aliquots von 250 ng jeder DNA werden für die Methylierungsanalyse mit dem EZ DNA Methylation Lightning Kit (Zymo Research) aufbereitet. Die Amplifikation von Proben und ihre Vorbereitung für die NGS-Sequenzierung wird wie beschrieben durchgeführt. Die Proben werden auf NextSeq 500 (Illumina) sequenziert. Einzelne verarbeitete Sequenzen (PE-Reads) werden unter Verwendung eines parallelen Smith-Waterman-Algorithmus unabhängig an Referenzsequenzen ausgerichtet. Nur Reads, die konsistent an derselben Referenzsequenz ausgerichtet sind, werden beibehalten. An jeder CpG-Stelle in jeder analysierten Sequenz werden die Frequenzen der vier Basen bewertet und tabelliert.
Urinproben werden mit nicht-invasiven Methoden gesammelt und gemäß einem Verfahren vorbereitet, das die quantitative Gewinnung von Exosomen vorbereitet: Nach dem Auftauen und Zentrifugieren bei 17.000 x g für 10 Minuten bei 4 °C werden die gewonnenen Überstände abgetrennt und bei 200.000 x g für 1 zentrifugiert Std. bei 4°C. Exosom-Pellets werden abgetrennt, wiederholt gewaschen und in Puffer (NH4HCO3, 0,1 mM pH = 7,8) resuspendiert. Die Proteinkonzentration wird mit dem SPNTM Protein Assay Kit geschätzt und jede Probe (50 ± 0,5 μg Protein) wird mit Trypsin unter Verwendung eines Enzym/Substrat-Verhältnisses von 1:50 (w/w) bei 37 °C über Nacht (o/w) verdaut. Ein zweiter tryptischer Verdau wird mit einem Enzym:Substrat-Verhältnis von 1:100 (w/w) für 4 h durchgeführt. Aufgeschlossene Proben, zentrifugiert bei 13.000 × g für 10 min, werden gereinigt und mit PepClean C-18-Säulen konzentriert. Die erhaltenen Proben werden durch Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie, gekoppelt mit hochauflösender Massenspektrometrie, analysiert.
Während einer Beobachtungssitzung wird eine kurze Videoaufzeichnung der Mutter-Kind-Interaktion von etwa 10 Minuten in einem halbstrukturierten Setting gemacht, um die emotionale Regulation und das soziale Verhalten des Kindes zu beurteilen. Die Interaktion wird gemäß dem Still Face Paradigma (Tronick et al., 1978) in 5 verschiedene Phasen strukturiert: Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. Spielen: Mütter werden eingeladen, 10 Minuten lang mit ihren Babys zu interagieren; Dennoch: Die Mütter werden gebeten, still zu bleiben, während sie ein nicht reagierendes, ausdrucksloses Gesicht bewahren und das Kind 2 Minuten lang nicht anlächeln, berühren oder mit ihm sprechen (Still#1: 2 Minuten; Still#2: 2 Minuten); Reunion: Die Mütter werden gebeten, die Spielaktivität mit ihren eigenen für weitere 2 Minuten fortzusetzen (Reunion#1: 2 Minuten; Reunion#2: 2 Minuten).
Typisch entwickelte Kinder (TD)
Kinder mit typischem Entwicklungsalter zwischen 3 und 24 Monaten (chronologisch).
Genomische DNA wird aus 0,4-ml-Aliquots jeder Speichelprobe unter Verwendung des vom Kit-Hersteller vorgeschlagenen Protokolls extrahiert, mit Qubit 2.0 (Invitrogen) quantifiziert und bei -20 °C gelagert. Aliquots von 250 ng jeder DNA werden für die Methylierungsanalyse mit dem EZ DNA Methylation Lightning Kit (Zymo Research) aufbereitet. Die Amplifikation von Proben und ihre Vorbereitung für die NGS-Sequenzierung wird wie beschrieben durchgeführt. Die Proben werden auf NextSeq 500 (Illumina) sequenziert. Einzelne verarbeitete Sequenzen (PE-Reads) werden unter Verwendung eines parallelen Smith-Waterman-Algorithmus unabhängig an Referenzsequenzen ausgerichtet. Nur Reads, die konsistent an derselben Referenzsequenz ausgerichtet sind, werden beibehalten. An jeder CpG-Stelle in jeder analysierten Sequenz werden die Frequenzen der vier Basen bewertet und tabelliert.
Urinproben werden mit nicht-invasiven Methoden gesammelt und gemäß einem Verfahren vorbereitet, das die quantitative Gewinnung von Exosomen vorbereitet: Nach dem Auftauen und Zentrifugieren bei 17.000 x g für 10 Minuten bei 4 °C werden die gewonnenen Überstände abgetrennt und bei 200.000 x g für 1 zentrifugiert Std. bei 4°C. Exosom-Pellets werden abgetrennt, wiederholt gewaschen und in Puffer (NH4HCO3, 0,1 mM pH = 7,8) resuspendiert. Die Proteinkonzentration wird mit dem SPNTM Protein Assay Kit geschätzt und jede Probe (50 ± 0,5 μg Protein) wird mit Trypsin unter Verwendung eines Enzym/Substrat-Verhältnisses von 1:50 (w/w) bei 37 °C über Nacht (o/w) verdaut. Ein zweiter tryptischer Verdau wird mit einem Enzym:Substrat-Verhältnis von 1:100 (w/w) für 4 h durchgeführt. Aufgeschlossene Proben, zentrifugiert bei 13.000 × g für 10 min, werden gereinigt und mit PepClean C-18-Säulen konzentriert. Die erhaltenen Proben werden durch Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie, gekoppelt mit hochauflösender Massenspektrometrie, analysiert.
Während einer Beobachtungssitzung wird eine kurze Videoaufzeichnung der Mutter-Kind-Interaktion von etwa 10 Minuten in einem halbstrukturierten Setting gemacht, um die emotionale Regulation und das soziale Verhalten des Kindes zu beurteilen. Die Interaktion wird gemäß dem Still Face Paradigma (Tronick et al., 1978) in 5 verschiedene Phasen strukturiert: Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. Spielen: Mütter werden eingeladen, 10 Minuten lang mit ihren Babys zu interagieren; Dennoch: Die Mütter werden gebeten, still zu bleiben, während sie ein nicht reagierendes, ausdrucksloses Gesicht bewahren und das Kind 2 Minuten lang nicht anlächeln, berühren oder mit ihm sprechen (Still#1: 2 Minuten; Still#2: 2 Minuten); Reunion: Die Mütter werden gebeten, die Spielaktivität mit ihren eigenen für weitere 2 Minuten fortzusetzen (Reunion#1: 2 Minuten; Reunion#2: 2 Minuten).

Was misst die Studie?

Primäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
DNA-Methylierungsstatus von Säuglingen
Zeitfenster: 1 Tag, bei der Rekrutierung
Der DNA-Methylierungsstatus (d. h. Prozentsatz) von Kandidatengenen (z. B. OXTR, SLC6A4, BDNF und DRD4) werden anhand von Speichelproben von Säuglingen bestimmt.
1 Tag, bei der Rekrutierung
Säuglingsverhaltensregulation
Zeitfenster: 1 Tag, bei der Rekrutierung
Die kindliche Verhaltensregulation (d. h. negative Emotionalität) wird mikroanalytisch (d. h. Sekunde für Sekunde) aus Videobändern von Mutter-Kind-Interaktionen kodiert.
1 Tag, bei der Rekrutierung

Sekundäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Infant proteomische Muster
Zeitfenster: 1 Tag, bei der Rekrutierung
Proteomische Muster werden auf die relative Menge und posttranslationale Modifikationen von Kandidatenproteinen untersucht, von denen angenommen wird, dass sie an der Stressreaktion bei Säuglingen beteiligt sind.
1 Tag, bei der Rekrutierung

Mitarbeiter und Ermittler

Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.

Studienaufzeichnungsdaten

Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.

Haupttermine studieren

Studienbeginn (Tatsächlich)

7. April 2021

Primärer Abschluss (Geschätzt)

30. November 2023

Studienabschluss (Geschätzt)

31. Dezember 2023

Studienanmeldedaten

Zuerst eingereicht

30. Juli 2021

Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat

12. August 2021

Zuerst gepostet (Tatsächlich)

13. August 2021

Studienaufzeichnungsaktualisierungen

Letztes Update gepostet (Tatsächlich)

18. Oktober 2023

Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt

17. Oktober 2023

Zuletzt verifiziert

1. Oktober 2023

Mehr Informationen

Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie

Andere Studien-ID-Nummern

  • RC2021_820

Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen

Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt

Nein

Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt

Nein

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