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ND 아동의 정서적 조절: 게놈 변이, 단백질 패턴 및 초기 경험의 역할

2023년 10월 17일 업데이트: IRCCS Eugenio Medea

신경 발달 장애 아동의 정서 행동 조절: 게놈 변이, 단백질 패턴 및 초기 경험의 질의 역할에 대한 탐색적 조사

신경 발달 장애(ND)가 있는 어린이는 광범위한 임상 진단(예: 뇌성마비, 감각 장애, 정신 운동 지체)을 특징으로 하는 이질적인 인구를 나타내며, 어린이의 생애 초기에 나타나는 다양한 결함과 관련이 있습니다. ND 아동이 사회적 정서적 기술과 정서적 행동 조절에서 몇 가지 차이점을 보인다는 것이 광범위하게 입증되었지만 다소 손상된 발달 궤적과 관련된 기본 메커니즘은 여전히 ​​부분적으로 탐구되지 않은 상태로 남아 있습니다. 여러 연구가 일반적으로 발달하는 아동 또는 ND 이외의 위험 조건이 있는 아동(예: 학대의 피해자인 아동)의 정서적 행동 조절에서 생물학적 및 환경적 요인의 역할을 조사한 반면, 메틸화의 역할을 공동으로 조사한 연구는 거의 없습니다. 생후 첫 해 동안 ND 아동의 정서-행동 조절에 대한 다형성 및 환경적 경험. 이 프로젝트의 목적은 아동의 정서적 행동 조절과 관련될 수 있는 생물학적(DNA 메틸화, 다형성 변이체 및 단백질체학) 및 환경적(예: 고통스럽고 침습적인 간호 절차, 근접성 및 신체적 접촉) 요인을 조사하는 것입니다. ND와 함께.

연구 개요

상태

모병

정황

개입 / 치료

상세 설명

배경: 신경 발달 장애(ND)가 있는 어린이는 유아기와 아동기 동안 나타나는 다양한 결함과 관련된 다양한 임상 진단을 특징으로 하는 이질적인 인구입니다. 진단 프레이밍은 다를 수 있지만 여러 연구에서 ND가 있는 어린이는 사회적 관계 기술이 감소했으며, 이는 낮은 상호 작용 및 부부 주의력 기술과 대인 커뮤니케이션 단서의 사용 감소를 특징으로 합니다. ND 아동이 사회적 정서적 기술과 정서적 행동 조절에 몇 가지 차이를 보인다는 것이 광범위하게 입증되었지만 다소 손상된 궤적과 관련된 기본 메커니즘은 부분적으로 탐구되지 않은 상태로 남아 있습니다.

1차 목표: 3~24개월의 ND 아동 표본에서 1) 후보 유전자의 메틸화(예: OXTR, SLC6A4, BDNF 및 DRD4), 2) 감정 행동 조절의 다형성, 3 ) 정서 행동 조절에 있어 환경적 경험(즉, 부모 행동의 불리한 경험과 질).

2차 목표: 1) 생후 3개월에서 24개월 사이의 ND가 있는 어린이 샘플에서 단백질체학과 감정 행동 조절 사이의 가능한 연관성을 탐구합니다. 2) 전산적 접근을 적용하여 정서적 행동 조절과 관련된 후보 유전자의 기능적 및 구조적 패턴을 식별한다. 잠재적으로 상호 작용 네트워크에서 사회적 정서적 발달과 뇌에서 시공간적 동시 표현과 관련된 유전자 모듈도 식별됩니다.

계획된 활동:

방법: 이 프로젝트는 ND를 가진 어린이와 그 어머니의 임상 그룹과 일반적으로 발달하는 어린이와 어머니의 통제 그룹을 포함합니다. 그룹의 특성 때문에 이 연구는 준 실험적 연구 설계입니다.

이 연구에는 다음 절차가 포함됩니다.

  • 생물학적 물질 수집: 비침습적 방식 및 Oragene OG575 키트(Genotek DNA)를 사용한 타액 수집 및 비침습적 방식을 사용한 소변 수집.
  • 설문지 관리 및 근접 일지: 어머니(임상 그룹 및 통제 그룹 모두)는 기분, 습관적 행동 및 아동 발달과 관련된 몇 가지 설문지를 작성하도록 요청받을 것입니다. 또한 산모가 신체 접촉(예: 아기를 애무하는 시간; 아기를 안고 보낸 시간; 아기가 어머니의 가슴에 붙어 있을 때 소요되는 시간). 이 데이터는 앱(APP: inContatto)의 형태로 전자 형식으로 구현된 Raiskila 등의 "친밀감 일기"의 용도 변경 버전을 사용하여 파생됩니다.
  • 정지 얼굴 패러다임(Tronick et al., 1978)에 따라 5가지 다른 단계에서 반구조화된 맥락에서 부모-자녀 상호 작용을 비디오로 녹화합니다: 재생, 정지#1, 재회#1, 정지#2, 재회#2.

상호 작용은 다양한 코딩 도구를 사용하여 후속 행동 코딩을 위해 비디오로 녹화됩니다. 아동의 정서-행동 규제는 다음과 같은 코딩 시스템을 사용하여 코딩됩니다. 또한 유아 및 산모의 행동은 Murray의 Global Rating Scale 코딩 시스템을 사용하여 코딩하고 Provenzi의 Maternal Touch Coding System을 사용하여 산모의 터치 행동을 코딩합니다.

연구 유형

관찰

등록 (추정된)

248

연락처 및 위치

이 섹션에서는 연구를 수행하는 사람들의 연락처 정보와 이 연구가 수행되는 장소에 대한 정보를 제공합니다.

연구 연락처

연구 장소

참여기준

연구원은 적격성 기준이라는 특정 설명에 맞는 사람을 찾습니다. 이러한 기준의 몇 가지 예는 개인의 일반적인 건강 상태 또는 이전 치료입니다.

자격 기준

공부할 수 있는 나이

3개월 (어린이)

건강한 자원 봉사자를 받아들입니다

예

샘플링 방법

비확률 샘플

연구 인구

ND를 가진 어린이와 그 어머니는 U.O.C.에서 연속적이고 편리한 샘플링을 통해 모집됩니다. "전문 재활 - 발달 연령의 신경 정신과 병리학" 및 U.O.C. 과학 연구소 "E. Medea"(Bosisio Parini 사이트). 전형적인 발달을 보이는 아이들과 그들의 어머니는 Lecco 지방의 보육원에서 모집될 것입니다. 일반 연구를 설명하는 정보 편지를 본 후 어머니는 전화로 연락을 받고 자발적으로 참여하도록 초대됩니다.

설명

포함 기준:

ND가 있는 어린이:

  • 3개월에서 24개월 사이의 연령(조산아의 경우 시간순으로 또는 수정됨)
  • 다양한 진단(예: 뇌성마비, 미숙아)과 관련된 임상 징후(예: 신경학적 검사 또는 신경영상에서 뇌 손상의 증상) 또는 발달 척도(즉, Griffiths III 척도)에 의해 기록된 경증 내지 중등도의 발달 지연;
  • 유전 증후군의 부재. Griffiths III 척도는 아동의 전반적인 발달 수준을 평가하는 데 사용됩니다.

전형적인 발달 아동:

  • 만삭까지;
  • 3~24개월 사이의 나이(연대순);
  • 출생 전후 병리학의 부재.

산모에 대한 포함 기준(DN 및 전형적인 발달):

  • 18세 이상
  • 이탈리아어에 대한 좋은 이해;
  • 인지 장애 및/또는 정신 질환의 부재;
  • 향정신성 약물 복용 금지;
  • 편부모 가정의 일부가 아닙니다.

제외 기준: 포함 기준을 참조하십시오.

공부 계획

이 섹션에서는 연구 설계 방법과 연구가 측정하는 내용을 포함하여 연구 계획에 대한 세부 정보를 제공합니다.

연구는 어떻게 설계됩니까?

디자인 세부사항

  • 관찰 모델: 케이스 컨트롤
  • 시간 관점: 단면

코호트 및 개입

그룹/코호트
개입 / 치료
ND 아동
3개월에서 24개월 사이의 신경 발달 장애(ND)가 있는 아동(조산아의 경우 시간순으로 또는 수정됨).
진단 검사: DNA 메틸화 분석
게놈 DNA는 키트 제조업체가 제안한 프로토콜을 사용하여 각 타액 샘플의 0.4ml 분취량에서 추출하고 Qubit 2.0(Invitrogen)으로 정량화하고 -20°C에서 보관합니다. EZ DNA Methylation Lightning 키트(Zymo Research)를 사용하여 메틸화 분석을 위해 각 DNA의 250ng 분취량을 편집합니다. 샘플의 증폭 및 NGS 시퀀싱을 위한 준비는 설명된 대로 수행됩니다. 샘플은 NextSeq 500(Illumina)에서 시퀀싱됩니다. 개별 처리된 시퀀스(PE 읽기)는 병렬 Smith-Waterman 알고리즘을 사용하여 참조 시퀀스에 독립적으로 정렬됩니다. 동일한 참조 시퀀스에 일관되게 정렬된 읽기만 유지됩니다. 분석된 각 서열의 각 CpG 사이트에서 4개 염기의 빈도가 평가되고 표로 작성됩니다.
진단 검사: 프로테오믹스 분석
비침습적 방법을 사용하여 소변 샘플을 수집하고 엑소좀의 정량적 회수를 위한 준비 절차에 따라 준비합니다. 일단 해동하고 4°C에서 10분 동안 17,000 x g에서 원심분리한 다음, 회수된 상청액을 분리하고 200,000 x g에서 1일 동안 원심분리합니다. 4°C에서 시간. 엑소좀 펠렛을 분리하고, 반복적으로 세척하고 완충액(NH4HCO3, 0.1mM ph=7.8)에 재현탁합니다. SPNTM 단백질 분석 키트로 단백질 농도를 추정하고 각 샘플(50 ± 0.5μg 단백질)을 37°C에서 밤새(o/w) 1:50(w/w) 효소/기질 비율을 사용하여 트립신으로 분해합니다. 두 번째 트립신 소화는 4시간 동안 1:100(w/w)의 효소:기질 비율로 수행됩니다. 13,000 x g에서 10분 동안 원심분리한 소화된 샘플을 PepClean C-18 컬럼을 사용하여 정제하고 농축합니다. 얻은 샘플은 고해상도 질량 분석법과 결합된 역상 액체 크로마토그래피로 분석됩니다.
진단 검사: 스틸 페이스 패러다임
관찰 세션 동안 약 10분 동안 엄마와 아이의 상호 작용에 대한 짧은 비디오 녹화가 아이의 감정 조절과 사회적 행동을 평가하기 위해 반구조화된 환경에서 만들어집니다. 상호 작용은 정지된 얼굴 패러다임(Tronick et al., 1978)에 따라 5가지 다른 단계로 구성됩니다: Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. 놀이: 어머니는 10분 동안 아기와 상호 작용하도록 초대됩니다. 스틸(Still): 어머니는 2분 동안 반응하지 않는 무표정한 얼굴을 유지하고 아이를 웃거나 만지거나 말을 걸지 말고 가만히 있으라고 요청합니다(스틸#1: 2분; 스틸#2: 2분). 재회: 어머니는 추가로 2분 동안 놀이 활동을 재개하도록 요청받습니다(재회#1: 2분; 재회#2: 2분).
전형적인 발달 아동(TD)
3개월에서 24개월 사이의 전형적인 발달 연령을 가진 아동(연대순).
진단 검사: DNA 메틸화 분석
게놈 DNA는 키트 제조업체가 제안한 프로토콜을 사용하여 각 타액 샘플의 0.4ml 분취량에서 추출하고 Qubit 2.0(Invitrogen)으로 정량화하고 -20°C에서 보관합니다. EZ DNA Methylation Lightning 키트(Zymo Research)를 사용하여 메틸화 분석을 위해 각 DNA의 250ng 분취량을 편집합니다. 샘플의 증폭 및 NGS 시퀀싱을 위한 준비는 설명된 대로 수행됩니다. 샘플은 NextSeq 500(Illumina)에서 시퀀싱됩니다. 개별 처리된 시퀀스(PE 읽기)는 병렬 Smith-Waterman 알고리즘을 사용하여 참조 시퀀스에 독립적으로 정렬됩니다. 동일한 참조 시퀀스에 일관되게 정렬된 읽기만 유지됩니다. 분석된 각 서열의 각 CpG 사이트에서 4개 염기의 빈도가 평가되고 표로 작성됩니다.
진단 검사: 프로테오믹스 분석
비침습적 방법을 사용하여 소변 샘플을 수집하고 엑소좀의 정량적 회수를 위한 준비 절차에 따라 준비합니다. 일단 해동하고 4°C에서 10분 동안 17,000 x g에서 원심분리한 다음, 회수된 상청액을 분리하고 200,000 x g에서 1일 동안 원심분리합니다. 4°C에서 시간. 엑소좀 펠렛을 분리하고, 반복적으로 세척하고 완충액(NH4HCO3, 0.1mM ph=7.8)에 재현탁합니다. SPNTM 단백질 분석 키트로 단백질 농도를 추정하고 각 샘플(50 ± 0.5μg 단백질)을 37°C에서 밤새(o/w) 1:50(w/w) 효소/기질 비율을 사용하여 트립신으로 분해합니다. 두 번째 트립신 소화는 4시간 동안 1:100(w/w)의 효소:기질 비율로 수행됩니다. 13,000 x g에서 10분 동안 원심분리한 소화된 샘플을 PepClean C-18 컬럼을 사용하여 정제하고 농축합니다. 얻은 샘플은 고해상도 질량 분석법과 결합된 역상 액체 크로마토그래피로 분석됩니다.
진단 검사: 스틸 페이스 패러다임
관찰 세션 동안 약 10분 동안 엄마와 아이의 상호 작용에 대한 짧은 비디오 녹화가 아이의 감정 조절과 사회적 행동을 평가하기 위해 반구조화된 환경에서 만들어집니다. 상호 작용은 정지된 얼굴 패러다임(Tronick et al., 1978)에 따라 5가지 다른 단계로 구성됩니다: Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. 놀이: 어머니는 10분 동안 아기와 상호 작용하도록 초대됩니다. 스틸(Still): 어머니는 2분 동안 반응하지 않는 무표정한 얼굴을 유지하고 아이를 웃거나 만지거나 말을 걸지 말고 가만히 있으라고 요청합니다(스틸#1: 2분; 스틸#2: 2분). 재회: 어머니는 추가로 2분 동안 놀이 활동을 재개하도록 요청받습니다(재회#1: 2분; 재회#2: 2분).

연구는 무엇을 측정합니까?

주요 결과 측정

결과 측정
측정값 설명
기간
유아 DNA 메틸화 상태
기간: 1일 채용공고에서
DNA 메틸화 상태(즉, 후보 유전자(예: OXTR, SLC6A4, BDNF 및 DRD4)의 비율)을 영아에게서 얻은 타액 샘플에서 평가합니다.
1일 채용공고에서
유아 행동 규제
기간: 1일 채용공고에서
영아 행동 조절(즉, 부정적인 감정)은 어머니-영아 상호 작용의 비디오 테이프에서 미세 분석적으로(즉, 초 단위) 코딩됩니다.
1일 채용공고에서

2차 결과 측정

결과 측정
측정값 설명
기간
유아 단백질 패턴
기간: 1일 채용공고에서
Proteomic 패턴은 유아의 스트레스 반응과 관련이 있다고 생각되는 후보 단백질의 상대적인 양과 번역 후 변형에 대해 평가될 것입니다.
1일 채용공고에서

공동 작업자 및 조사자

여기에서 이 연구와 관련된 사람과 조직을 찾을 수 있습니다.

스폰서

IRCCS Eugenio Medea

연구 기록 날짜

이 날짜는 ClinicalTrials.gov에 대한 연구 기록 및 요약 결과 제출의 진행 상황을 추적합니다. 연구 기록 및 보고된 결과는 공개 웹사이트에 게시되기 전에 특정 품질 관리 기준을 충족하는지 확인하기 위해 국립 의학 도서관(NLM)에서 검토합니다.

연구 주요 날짜

연구 시작 (실제)

2021년 4월 7일

기본 완료 (추정된)

2023년 11월 30일

연구 완료 (추정된)

2023년 12월 31일

연구 등록 날짜

최초 제출

2021년 7월 30일

QC 기준을 충족하는 최초 제출

2021년 8월 12일

처음 게시됨 (실제)

2021년 8월 13일

연구 기록 업데이트

마지막 업데이트 게시됨 (실제)

2023년 10월 18일

QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출

2023년 10월 17일

마지막으로 확인됨

2023년 10월 1일

추가 정보

이 연구와 관련된 용어

기타 연구 ID 번호

  • RC2021_820

약물 및 장치 정보, 연구 문서

미국 FDA 규제 의약품 연구

아니

미국 FDA 규제 기기 제품 연구

아니

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