多発性硬化症における神経変性の免疫媒介メカニズムに対するオザニモドの効果 - 前臨床研究

多発性硬化症 (MS) は、炎症性および神経変性損傷の原因となる、いくつかの複雑な病態生理学的メカニズムを伴う多因子性の複雑な疾患です。 炎症経路を標的とした治療法は、再発寛解型 MS の治療に大きな進歩をもたらしました。 残念なことに、神経変性に対するこれらの治療の影響は限定的です。 問題の複雑さに対処するには、併用療法が必要になる場合があります。 しかし、安全性、忍容性、コストの問題により、これまでのところこの選択肢は限られています。 炎症と神経変性を同時に標的とする単一療法は、魅力的な選択肢です。 ただし、その影響を最大化するには、その影響を包括的に理解することが不可欠です。

オザニモドは、炎症と神経変性を同時に標的とする分子です。 後者に対するその影響はあまりよく理解されていません。 この薬は、5 つのスフィンゴシン-1-リン酸 G タンパク質共役受容体サブタイプのうち 2 つ（S1P1 および S1P5）に作用することによって効果を生み出します。 この薬の分子標的は正確に定義されていますが、受容体の調節に伴う多くの生物学的影響については、まだ解明されていないことが多くあります。

MS の複雑な病態生理学に対するオザニモドの効果についての理解を深めるために、協力的かつ統合的なアプローチが提案されています。

研究はMS生物学の重要な側面に焦点を当てます。 具体的には、オザニモドが、MSにおける適応免疫応答の両部門（T細胞とB細胞）およびそれらの次善の制御によって引き起こされる神経変性メカニズムをどのように対比できるかが研究される予定です。 全体として、このプロジェクトは以下を調査することを目的としています。

AIM1: MS キメラ ex-vivo モデルにおいて活動性 MS 患者由来の T 細胞のシナプス毒性効果を調節し、可能性のあるメディエーターを同定するオザニモドの能力 (IRCCS Neuromed-Pozzilli、シナプス免疫病理学研究所との共同研究) システム医学、ローマのトル・ヴェルガータ大学）。 炎症性シナプトパチー、すなわちシナプス喪失およびシナプス機能不全は、MS およびそのマウスモデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎 (EAE) における灰白質病理の重要な特徴として浮上しています。 過去数年間に、MS/EAE脳で検出されるシナプトパシーの顕著な形態であるグルタミン酸媒介性興奮毒性の誘発において、MS患者またはEAEマウス由来のT細胞が直接的な役割を果たしているという証拠が提供されてきた。 特に、グルタミン酸興奮毒性を制限することが MS を治療するための魅力的な治療戦略であることを示す証拠がいくつかあります。

最近、炎症性グルタミン酸媒介性興奮毒性に対するオザニモドの調節効果が調査され、スフィンゴシン受容体サブタイプ (S1P1 および S1P5) のさまざまな関与が EAE モデルで評価されました。 2つの主要な結果が明らかになった。まず、S1P1/S1P5モジュレーターであるオザニモドには、おそらくミクログリア細胞および浸潤リンパ球に対する作用によって媒介される中枢神経保護効果があり、その結果、炎症性シナプトパシーの主要な役割を果たす炎症誘発性サイトカインの放出が減少する。 第二に、選択的S1P1モジュレーターの中枢送達は、EAE臨床スコアと炎症性シナプトパシーの両方の観点から神経保護効果を示し、MSにおいてもオザニモド誘発性の神経保護にこの受容体サブタイプが主に関与していることを示唆している。

本プロジェクトでは、Tor Vergata大学の研究室で最近開発されたMSキメラ体外モデルが使用されます。 活動性の再発寛解型 MS 患者から単離された T 細胞は、非活動性 (naMS) および健常者 (HS) からは分離されず、自発的グルタミン酸作動性電流の増加を誘導しました。これは、EAE T 細胞によって誘導される変化を思い出させます。

このプロジェクトの具体的な目的では、以下の側面が評価される: i) オザニモドが MS キメラ ex-vivo モデルにおいて活動性 MS 患者由来の T dell のシナプス毒性効果を調節できるかどうかを調査すること、および ii) を特定することスフィンゴシン受容体のサブタイプおよび iii) 潜在的に関与する可溶性分子。

T細胞輸送の防止とは独立して、MS脳内を循環するシナプス毒性T細胞によって引き起こされる興奮毒性損傷を軽減するオザニモドの役割が明らかにされることが期待される。

AIM2：サイトカインを介したBBBの分解と、BBBのex vivoモデル（IRCCSポリクリニック病院サンマルティーノ）を介してここで研究された免疫細胞の遊走を減少させるオザニモドの能力。 B リンパ球と T リンパ球、および NK 細胞は MS の発症に関与しています (Lassmann、2019)。 彼らは、S1P1 受容体と S1P5 受容体を区別して使用して、二次リンパ組織を通過する交通を調節し、BBB を通って CNS に進入します (Sallusto et al., 2012)。 さらに、これらの受容体は、BBB の完全性を維持し、機能を回復するのに重要です (Chun 2021)。

S1P1 および S1P5 受容体のモジュレーターは MS の治療に広く使用されていますが、免疫細胞の膜表面と内皮細胞および有足細胞に局在する受容体間の複合相互作用による複雑な下流効果のため、その作用機序は部分的にしかわかっていません。 BBB。 これらの調節特性は、MSに使用されるこのクラスの最初の薬剤であるフィンゴリモドについて主に研究されてきたが、オザニモドの作用機序については詳細な研究が必要である。 実際、この薬剤はフィンゴリモドとは化学構造が異なり、フィンゴリモドのS1P1、S1P3、S1P4、S1P5とは結合がS1P1およびS1P5受容体に限定され、薬物動態が異なり、消失半減期が短い（Chun et al., 2021） ）。

この特定の目的の目的は、トランスウェルベースのシステムおよびオルガノイドを通じて利用されるヒトBBBのex vivoモデルで、以下に対するオザニモドの効果を評価することである。i) サイトカイン媒介バリア破壊の状況におけるBBBの完全性の維持。 ii) BBB を通過する T 細胞および NK 細胞の遊走を阻害する。

MS患者の末梢血単核球（PBMC）を生体外でオザニモドに曝露すると、炎症誘発性サイトカインによって媒介されるBBBの損傷が軽減され、BBBを通過するこれらの免疫細胞の能力が軽減されることが期待されます。 NMOSD 患者の PBMC は、炎症のコントロールとしても使用されます。これは、これらの疾患では、BBB を標的とする AQP-4 抗体とともに、Th17 細胞が主要な病因的役割を担っているためです。

ＡＩＭ３：ＭＳにおけるエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染Ｂ細胞の遊走特性に影響を及ぼすオザニモドの能力（サンタンドレア病院）。

一般集団では、B リンパ球の記憶サブセットが、S1P 受容体モジュレーターによる治療中に減少することが証明されており、潜在的な感染因子として EBV を選択的に保持しているものです。 EBV 遺伝子型に関するいくつかの研究では、特定のエプスタイン・バー核抗原 2 (EBNA2) 遺伝子変異体と MS の関連が実証されました。 EBNA2 は、宿主細胞転写因子との必須相互作用により、ウイルスおよび細胞遺伝子のプロモーター/エンハンサーの両方に対してトランスアクチベーターとして作用します。 EBNA2 と細胞成分の間の複雑な相互作用を考慮すると、EBNA2 変異体が初期感染の過程に影響を及ぼし、MS における調節不全のウイルスと宿主の相互作用に関与している可能性があります。 また、MS 関連の EBNA2 変異体は、胚中心内での B 細胞の遊走と成熟を妨げているようです。 MS 脳における EBV 感染の存在には議論の余地がありますが、いくつかの観察は、MS におけるくも膜下腔内の再活性化とウイルスによる免疫病原性反応の証拠を裏付けています。 この特定の目的の仮説は、MS の状況においてオザニモドが B 細胞および EBV 感染細胞に対して免疫調節効果を有する可能性があるというものです。 すでに述べたように、オザニモドは強力な S1P1R モジュレーターであり、リンパ組織からのリンパ球の流出を阻害します。 B細胞およびリンパ芽球様細胞株[自然増殖(spLCL)、またはEBV実験室株B95.8(95.8LCL)にインビトロ感染]を使用して、EBV感染が遊走能力にどのような影響を与えるか、またこの能力がオザニモドによってどのような影響を受けるかを研究する。

具体的には、次の側面が調査されます。 i) MS 患者および年齢および性別が一致した健康なドナー (HD) からの B 細胞、spLCL、および B95.8LCL の遊走特性。 ii) オザニモドが患者および HD からの上記細胞の遊走特性を調節できるかどうか。

この研究により、B細胞およびEBV感染B細胞のリンパ器官および脳内での遊走に対するオザニモドの影響に関する知識が重要に改善されるであろう。

AIM4：自己免疫応答の制御において重要な役割を果たすリンパ球集団である制御性T細胞（Treg）の数および/または機能を調節するオザニモドの能力（ナポリ「フェデリコ2世」大学、ナポリ、Treg細胞研究所）イタリア、ニューロメッド病院とサンタンドレア病院から血液サンプルを受け入れているが、ユニットは募集していない)。 細胞内代謝経路は、さまざまな免疫細胞サブセットの誘導と機能を制御することができ、実際、解糖は Tconv 細胞からヒト iTreg 細胞を生成するために不可欠です。 さらに、MSおよびT1D患者におけるTconv細胞の活性化中の解糖異常は、これらの患者におけるiTreg細胞の誘導および抑制機能の低下と関連しており、自己免疫中のiTreg細胞の機能欠陥が示唆されている。 T リンパ球および iTreg 細胞の細胞代謝プロファイルに対するオザニモドの影響が調査されます。 特に、この特定の目的は、i) T 細胞および iTreg 細胞の機能/活性 (活性化、増殖、抑制、Foxp3 誘導) に影響を与えるオザニモドの能力、および ii) 循環 T 細胞集団の代謝資産 (すなわち、 解糖および酸化的リン酸化の測定）健康な対象および MS 患者から精製された。

オザニモドは、RRMS 患者の Tconv 細胞および iTreg 細胞の免疫代謝を制御できると期待されています。 この目的では、オザニモドが健康な対照およびRRMS患者におけるiTreg細胞の誘導を変更できるかどうかも評価します。