北ベナンの子供たちのマラリアに対する免疫に対する季節性マラリア化学予防の影響 (ISAMIMA)

研究の場所と人口 この研究は、ベナン北部に位置する Cobly と Tchaourou の保健地区の 2 つの異なる場所で並行して実施されます。 これら 2 つの地区は、SMC の実施に関する保健省のプログラムに基づいて選択されました。 2 つのサイトは、マラリア感染の特徴と疫学の点で非常に似ていますが、SMC は Cobly に実装されていますが、Tchaourou にはまだ実装されていないという違いがあります。 Cobly 保健地区の子供たちから収集されたサンプルは介入グループとして含まれますが、Tchaourou の子供たちから収集されたサンプルは、特に抗体反応の進化に関してコントロールとして機能します。 参加者は、SMC の重要性について十分にカウンセリングを受け、各子供の親または保護者から書面によるインフォームド コンセントを取得します。 参加は完全に任意です。

研究のデザインと手順 これは、SMC を受けていない対照群とともに、SMC を受ける 6 か月から 59 か月の子供の 12 か月にわたる追跡調査に焦点を当てた研究です。 この研究は、ベナンの国家マラリア対策プログラム (NMCP) と共同で実施されます。 NMCP によって提供される人口統計データにより、無作為の世帯から子供を無作為に選択することができます。 介入サイトと対照サイトの両方で、同じ数の子供が含まれます。 研究チームは、選択された各世帯を訪問して、世帯の構成員に研究について通知し、コミュニティの医療従事者との毎月の会議を開催します。 同意した両親または保護者の子供が募集され、両親/保護者は、研究者またはアシスタント（臨床医）が管理するアンケートに回答します。 1mlの末梢静脈血を採取チューブに採取し、各サンプルから血液塗抹標本を作製するパラクー大学の疫学および公衆衛生における専門知識および強化研究センター(CEEREPH)に移す。 50 マイクロリットルの血液を Whatman 3MM ろ紙に移し、DNA 抽出のために室温で保存します。 その後、残りの全血を遠心分離し、血漿と赤血球を分注します。 サンプルは、12か月のフォローアップ期間中に、両方のグループの各子供（6〜59か月のSMCまたはSMCを受けていない子供）から4回収集されます。 最初のサンプルはSMCの開始時に収集されます（子供がSMCを受け取る前、2回目はSMCの3回目の投与の日に、3回目はSMCの最後の投与の3か月後、4回目は最後の投与の6か月後） SMCの用量）。

マラリアの有病率 厚い血液塗抹標本と薄い血液塗抹標本は、常にすべてのサンプルから作成されます。 薄い塗抹標本はメタノールで固定されます。 すべてのスライドを風乾し、ギムザ染色 3% を使用して 45 ～ 60 分間染色します。 乾燥したら、染色された厚い血液膜と薄い血液膜を、通常の手順を使用して顕微鏡で調べます。 寄生虫密度は、平均白血球数が血液１μｌ当たり８，０００であると仮定して、血液１μｌ当たりの寄生虫の数として記録される。 ろ紙サンプル上の乾燥した血液スポットは風乾し、乾燥剤を入れた小さな Ziploc バッグに個別に保存します。 Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐの検出は、Ｑｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ機器を日常的に使用するリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）を使用して実施される。

抗 PfEMP1 抗体応答 熱帯熱マラリア原虫がコードするバリアント表面抗原 (VSA) は、感染した赤血球 (IE) の表面に発現し、さまざまな内皮細胞受容体への結合を仲介します。 最も特徴的な VSA は、2 つのエクソン ユニットの var 遺伝子にコードされた熱帯熱マラリア原虫赤血球膜タンパク質 1 (PfEMP1) ファミリーです。 エクソン I は、タンパク質の細胞外および可変部分、ならびに膜貫通領域をコードし、エクソン II は、細胞内および比較的保存された酸性末端セグメント (ATS) をコードします。 タンパク質の最も変化しやすい部分には、N 末端セグメントが含まれ、その後に 3 つのドメイン タイプで構成されるセグメントが続きます。 Duffy 結合様ドメイン (DBL ドメイン): システインが豊富なドメイン間領域 (CIDR) および C2。 この研究では、Luminex プラットフォームを使用して、28 種類の熱帯熱マラリア原虫由来抗原と破傷風トキソイドを含むマイクロスフェア ビーズ結合タンパク質を使用して、血漿 IgG のパネルを定量化します。 このパネルには、VAR2CSA (胎盤マラリアに関連する VSA) と、PfEMP1 の 3 つの主なグループすべてを表す 25 の HIS タグ付き CIDR タンパク質が含まれています。 さらに、タンパク質アレイには、メロゾイト表面タンパク質 1 (MSP1) および頂端膜抗原 1 (AMA1) が含まれます。