Impacto da quimioprevenção sazonal da malária na imunidade contra a malária entre crianças no norte de Benin (ISAMIMA)

Local do estudo e população O estudo será realizado em paralelo em dois locais diferentes, os distritos de saúde de Cobly e Tchaourou localizados no norte de Benin. Esses dois distritos foram escolhidos com base na programação do Ministério da Saúde para implantação do SMC. Os dois locais são muito semelhantes em termos de características de transmissão da malária e epidemiologia, com a diferença que o SMC está implementado em Cobly mas ainda não em Tchaourou. As amostras recolhidas de crianças no distrito sanitário de Cobly serão incluídas como grupo de intervenção, enquanto as amostras recolhidas de crianças em Tchaourou servirão assim de controlo, em particular no que diz respeito à evolução das respostas de anticorpos. Os participantes serão totalmente aconselhados sobre a importância do SMC e o consentimento informado por escrito será obtido dos pais ou responsáveis ​​de cada criança. A participação será totalmente voluntária.

Desenho do estudo e procedimentos Este é um estudo que se concentra no acompanhamento de 12 meses de crianças de 6 a 59 meses que recebem SMC, juntamente com um grupo controle que não recebe SMC. O estudo será realizado em colaboração com o Programa Nacional de Controle da Malária (NMCP) de Benin. Os dados demográficos fornecidos pelo NMCP permitirão uma seleção aleatória de crianças de famílias aleatórias. Nos locais de intervenção e controle, serão incluídos números iguais de crianças. A equipe do estudo visitará cada domicílio selecionado para informar os membros do domicílio sobre o estudo e realizará reuniões mensais com os agentes comunitários de saúde. Filhos de pais ou responsáveis ​​consentidos serão recrutados e os pais/responsáveis ​​serão avaliados por meio de questionário aplicado pelo pesquisador ou por um auxiliar (médico). 1 ml de sangue venoso periférico será coletado em tubos de coleta e transferido para o Centro de Especialização e Melhoria da Pesquisa em Epidemiologia e Saúde Pública (CEEREPH) da Universidade de Parakou, onde será preparado um esfregaço de sangue de cada amostra. Cinqüenta microlitros de sangue serão transferidos para papel filtro Whatman 3MM e armazenados em temperatura ambiente para extração do DNA. O sangue total restante será então centrifugado, o plasma e os glóbulos vermelhos serão aliquotados. Amostras serão coletadas 4 vezes de cada criança em ambos os grupos (crianças de 6 a 59 meses recebendo ou não SMC) durante o período de acompanhamento de 12 meses. As primeiras amostras serão coletadas no início do SMC (antes das crianças receberem o SMC, a segunda no dia da terceira dose do SMC, a terceira três meses após a última dose do SMC e a quarta, seis meses após a última dose de SMC).

Prevalência da malária Esfregaços de sangue grossos e finos serão sempre preparados a partir de todas as amostras. Esfregaços finos serão fixados em metanol. Todas as lâminas serão secas ao ar e coradas com corante Giemsa 3% por 45-60 min. Depois de secos, os esfregaços de sangue grossos e finos corados serão examinados microscopicamente usando um procedimento de rotina. As densidades parasitárias serão registradas como o número de parasitas/μl de sangue, assumindo uma contagem média de leucócitos de 8.000/μl de sangue. Manchas de sangue secas em amostras de papel de filtro serão secas ao ar e armazenadas individualmente em pequenos sacos Ziploc com um dessecante. A detecção de Plasmodium spp será realizada usando uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) em uso rotineiro com um instrumento Quantstudio.

Resposta do anticorpo anti-PfEMP1 Os antígenos de superfície variantes codificados por Plasmodium falciparum (VSA) são expressos na superfície de eritrócitos infectados (IE) e medeiam a ligação a uma variedade de receptores de células endoteliais. Os VSA melhor caracterizados são a família da proteína 1 da membrana eritrocitária de P. falciparum codificada pelo gene var (PfEMP1) em duas unidades de exon. O Exon I codifica a parte extracelular e variável da proteína, bem como uma região transmembranar, e o Exon II codifica o segmento terminal ácido (ATS) intracelular e relativamente conservado. A parte mais variável da proteína contém um segmento N-terminal seguido por segmentos compostos por três tipos de domínio; Domínios do tipo ligação Duffy (domínios DBL): regiões interdomínios ricas em cisteína (CIDRs) e C2. Neste estudo, um painel de IgG plasmática será quantificado usando proteínas acopladas a esferas de microesferas compreendendo 28 antígenos derivados de P. falciparum e toxóide tetânico, usando a plataforma Luminex. O painel inclui VAR2CSA (o VSA associado à malária placentária) e 25 proteínas CIDR marcadas com HIS representando todos os três grupos principais de PfEMP1. Além disso, a matriz de proteínas inclui proteína de superfície merozoíta 1 (MSP1) e antígeno de membrana apical 1 (AMA1).