Innvirkning av sesongbasert malaria kjemoprevensjon på immunitet mot malaria blant barn i Nord-Benin (ISAMIMA)

Studiested og befolkning Studien vil bli utført parallelt på to forskjellige steder, helsedistriktene Cobly og Tchaourou som ligger i Nord-Benin. Disse to distriktene er valgt ut fra Helsedepartementets programmering for implementering av SMC. De to stedene er veldig like når det gjelder malariaoverføringsegenskaper og epidemiologi, med den forskjellen at SMC er implementert i Cobly, men ennå ikke i Tchaourou. Prøver samlet inn fra barn i Cobly helsedistrikt vil bli inkludert som intervensjonsgruppe, mens prøver samlet inn fra barn i Tchaourou vil dermed tjene som kontroller, spesielt med hensyn til utviklingen av antistoffresponser. Deltakerne vil få full veiledning om viktigheten av SMC, og skriftlig informert samtykke vil bli innhentet fra foreldrene eller foresatte til hvert barn. Deltakelse vil være helt frivillig.

Studiedesign og prosedyrer Dette er en studie som fokuserer på oppfølging over 12 måneder av barn i alderen 6 til 59 måneder som får SMC, sammen med en kontrollgruppe som ikke får SMC. Studien vil bli utført i samarbeid med National Malaria Control Program (NMCP) i Benin. Demografiske data levert av NMCP vil tillate et tilfeldig utvalg av barn fra tilfeldige husholdninger. Både på intervensjons- og kontrollsteder vil like mange barn inkluderes. Studieteamet vil besøke hver utvalgte husstand for å informere husstandsmedlemmer om studien og vil holde månedlige møter med helsearbeidere i samfunnet. Barn av samtykkende foreldre eller foresatte vil bli rekruttert og foreldre/foresatte vil bli tatt gjennom et spørreskjema administrert av forskeren eller en assistent (kliniker). 1 ml perifert veneblod vil samles inn i oppsamlingsrør og overføres til Center for Expertise and Enhancing Research in Epidemiology and Public Health (CEEREPH) ved Universitetet i Parakou hvor et blodutstryk vil bli utarbeidet fra hver prøve. Femti mikroliter blod vil bli overført til Whatman 3MM filterpapir og lagret ved romtemperatur for DNA-ekstraksjon. Det gjenværende fullblodet vil deretter bli sentrifugert, plasmaet og de røde blodcellene vil bli delt i alikvoter. Prøver vil bli samlet inn 4 ganger fra hvert barn i begge grupper (barn i alderen 6 til 59 måneder som mottar eller/ikke SMC) i løpet av den 12 måneder lange oppfølgingsperioden. De første prøvene vil bli tatt i begynnelsen av SMC (før barn får SMC, den andre på dagen for den tredje dosen av SMC, den tredje tre måneder etter siste dose av SMC og den fjerde, seks måneder etter den siste dose SMC).

Malariaprevalens Tykke og tynne blodutstryk vil til enhver tid bli tilberedt fra alle prøver. Tynne utstryk vil bli fikset i metanol. Alle objektglass vil lufttørkes og farges med Giemsa-farge 3 % i 45-60 min. Når de er tørket, vil de fargede tykke og tynne blodfilmene bli undersøkt mikroskopisk ved hjelp av en rutineprosedyre. Parasitttettheter vil bli registrert som antall parasitter/μl blod forutsatt et gjennomsnittlig leukocyttantall på 8000/μl blod. Tørkede blodflekker på filterpapirprøver vil lufttørkes og oppbevares enkeltvis i små Ziploc-poser med tørkemiddel. Plasmodium spp-deteksjon vil bli utført ved hjelp av en sanntids polymerasekjedereaksjon (qPCR) i rutinemessig bruk med et Quantstudio-instrument.

Anti-PfEMP1 antistoffrespons Plasmodium falciparum-kodede variantoverflateantigener (VSA) uttrykkes på overflaten av infiserte erytrocytter (IE) og medierer binding til en rekke endotelcellereseptorer. De best karakteriserte VSA er den var-genkodede P. falciparum erytrocyttmembranprotein 1 (PfEMP1)-familien i to eksonenheter. Exon I koder for den ekstracellulære og variable delen av proteinet samt en transmembranregion og Exon II koder for det intracellulære og relativt konserverte sure terminale segmentet (ATS). Den mest variable delen av proteinet inneholder et N-terminalt segment etterfulgt av segmenter som består av tre domenetyper; Duffy bindingslignende domener (DBL-domener): Cysteinrike inter-domene regioner (CIDRs) og C2. I denne studien vil et panel av plasma IgG kvantifiseres ved bruk av mikrosfærekulekoblede proteiner som omfatter 28 P. falciparum-avledede antigener og tetanustoksoid, ved bruk av Luminex-plattformen. Panelet inkluderer VAR2CSA (VSA assosiert med placental malaria) og 25 HIS-merkede CIDR-proteiner som representerer alle de tre hovedgruppene av PfEMP1. I tillegg inkluderer proteinarrayen merozoittoverflateprotein 1 (MSP1) og apikalt membranantigen 1 (AMA1).