Влияние химиопрофилактики сезонной малярии на иммунитет против малярии среди детей в северном Бенине (ISAMIMA)

Место исследования и популяция Исследование будет проводиться параллельно в двух разных местах, медицинских округах Кобли и Чауру, расположенных на севере Бенина. Эти два района были выбраны на основе программы Министерства здравоохранения по внедрению SMC. Эти два места очень похожи с точки зрения характеристик передачи малярии и эпидемиологии, с той разницей, что SMC реализован в Кобли, но еще не в Чауру. Образцы, взятые у детей в медицинском округе Кобли, будут включены в группу вмешательства, в то время как образцы, взятые у детей в Чауру, таким образом, будут служить в качестве контроля, в частности, в отношении эволюции ответов антител. Участники будут полностью проинформированы о важности SMC, и письменное информированное согласие будет получено от родителей или опекунов каждого ребенка. Участие будет полностью добровольным.

Дизайн и процедуры исследования Это исследование, в котором основное внимание уделяется последующему наблюдению в течение 12 месяцев за детьми в возрасте от 6 до 59 месяцев, получающими СМК, а также с контрольной группой, не получающей СМК. Исследование будет проводиться в сотрудничестве с Национальной программой борьбы с малярией (NMCP) Бенина. Демографические данные, предоставленные NMCP, позволят случайным образом отобрать детей из случайных домохозяйств. Как в интервенционных, так и в контрольных центрах будет включено одинаковое количество детей. Исследовательская группа посетит каждое выбранное домохозяйство, чтобы проинформировать членов домохозяйства об исследовании, и будет проводить ежемесячные встречи с местными работниками здравоохранения. Дети родителей или опекунов, давших согласие, будут набраны, а родители/опекуны будут опрошены с помощью анкеты, проводимой исследователем или ассистентом (клиницистом). 1 мл периферической венозной крови будет собрано в пробирки для сбора и передано в Центр экспертизы и углубления исследований в области эпидемиологии и общественного здравоохранения (CEEREPH) Университета Параку, где из каждого образца будет приготовлен мазок крови. Пятьдесят микролитров крови будут перенесены на фильтровальную бумагу Whatman 3MM и сохранены при комнатной температуре для выделения ДНК. Оставшуюся цельную кровь затем центрифугируют, плазму и эритроциты делят на аликвоты. Образцы будут собираться 4 раза у каждого ребенка в обеих группах (дети в возрасте от 6 до 59 месяцев, получающие или не получающие SMC) в течение 12-месячного периода наблюдения. Первые образцы будут собраны в начале SMC (до того, как дети получат SMC, вторые — в день третьей дозы SMC, третьи — через три месяца после последней дозы SMC и четвертые — через шесть месяцев после последней дозы). дозы ГМК).

Распространенность малярии Толстые и тонкие мазки крови будут готовиться из всех образцов в любое время. Думаю, мазки будут фиксироваться в метаноле. Все слайды будут высушены на воздухе и окрашены красителем Гимза 3% в течение 45-60 мин. После высыхания окрашенные толстые и тонкие мазки крови будут исследованы под микроскопом с использованием обычной процедуры. Плотность паразитов будет регистрироваться как количество паразитов/мкл крови при среднем количестве лейкоцитов 8000/мкл крови. Сухие пятна крови на образцах фильтровальной бумаги будут высушены на воздухе и храниться индивидуально в небольших пакетах Ziploc с осушителем. Обнаружение Plasmodium spp будет выполняться с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (qPCR) в обычном режиме на приборе Quantstudio.

Реакция антител против PfEMP1 Кодируемые Plasmodium falciparum вариантные поверхностные антигены (VSA) экспрессируются на поверхности инфицированных эритроцитов (IE) и опосредуют связывание с рядом рецепторов эндотелиальных клеток. Наиболее охарактеризованными VSA являются кодируемые геном var белки мембраны эритроцитов P. falciparum 1 (PfEMP1) в двух экзонных единицах. Экзон I кодирует внеклеточную и вариабельную часть белка, а также трансмембранную область, а экзон II кодирует внутриклеточный и относительно консервативный концевой кислый сегмент (ATS). Наиболее вариабельная часть белка содержит N-концевой сегмент, за которым следуют сегменты, состоящие из трех типов доменов; Домены, подобные связыванию Даффи (DBL-домены): богатые цистеином междоменные области (CIDR) и C2. В этом исследовании панель IgG плазмы будет количественно определена с использованием связанных с микросферами белков, содержащих 28 антигенов, полученных из P. falciparum, и столбнячного анатоксина, с использованием платформы Luminex. Панель включает VAR2CSA (VSA, связанный с плацентарной малярией) и 25 HIS-меченых белков CIDR, представляющих все три основные группы PfEMP1. Кроме того, набор белков включает поверхностный белок 1 мерозоитов (MSP1) и антиген 1 апикальной мембраны (AMA1).