Wpływ sezonowej chemoprewencji malarii na odporność przeciwko malarii wśród dzieci w północnym Beninie (ISAMIMA)

Lokalizacja badania i populacja Badanie zostanie przeprowadzone równolegle w dwóch różnych miejscach, okręgach zdrowotnych Cobly i Tchaourou, położonych w północnym Beninie. Te dwa powiaty zostały wybrane na podstawie programów Ministerstwa Zdrowia do realizacji SMC. Te dwa miejsca są bardzo podobne pod względem charakterystyki przenoszenia malarii i epidemiologii, z tą różnicą, że SMC jest wdrożone w Cobly, ale jeszcze nie w Tchaourou. Próbki pobrane od dzieci w Cobly Health District zostaną włączone jako grupa interwencyjna, podczas gdy próbki pobrane od dzieci w Tchaourou będą zatem służyć jako kontrole, w szczególności w odniesieniu do ewolucji odpowiedzi przeciwciał. Uczestnicy zostaną w pełni poinformowani o znaczeniu SMC, a pisemna świadoma zgoda zostanie zebrana od rodzica lub opiekuna każdego dziecka. Udział będzie całkowicie dobrowolny.

Projekt badania i procedury To badanie koncentruje się na obserwacji trwającej 12 miesięcy dzieci w wieku od 6 do 59 miesięcy, które otrzymały SMC, wraz z grupą kontrolną nieotrzymującą SMC. Badanie zostanie przeprowadzone we współpracy z Narodowym Programem Kontroli Malarii (NMCP) w Beninie. Dane demograficzne dostarczone przez KPKM pozwolą na losowy dobór dzieci z losowych gospodarstw domowych. Zarówno w ośrodkach interwencyjnych, jak i kontrolnych uwzględniona zostanie taka sama liczba dzieci. Zespół badawczy odwiedzi każde wybrane gospodarstwo domowe w celu poinformowania członków gospodarstwa domowego o badaniu i będzie odbywał comiesięczne spotkania z lokalnymi pracownikami służby zdrowia. Dzieci wyrażających zgodę rodziców lub opiekunów zostaną zrekrutowane, a rodzice/opiekunowie zostaną poddani badaniu za pomocą kwestionariusza przeprowadzonego przez badacza lub asystenta (klinicystę). 1 ml krwi z żył obwodowych zostanie pobrany do probówek i przesłany do Centrum Ekspertyz i Udoskonalenia Badań Epidemiologii i Zdrowia Publicznego (CEEREPH) na Uniwersytecie Parakou, gdzie z każdej próbki zostanie przygotowany rozmaz krwi. Pięćdziesiąt mikrolitrów krwi zostanie przeniesionych na bibułę filtracyjną Whatman 3MM i będzie przechowywana w temperaturze pokojowej do ekstrakcji DNA. Pozostała krew pełna zostanie następnie odwirowana, a osocze i krwinki czerwone zostaną podzielone na porcje. Próbki będą pobierane 4 razy od każdego dziecka w obu grupach (dzieci w wieku od 6 do 59 miesięcy otrzymujące SMC lub/i nie otrzymujące SMC) podczas 12-miesięcznego okresu obserwacji. Pierwsze próbki zostaną pobrane na początku SMC (przed podaniem dzieciom SMC, drugie w dniu trzeciej dawki SMC, trzecie po trzech miesiącach od ostatniej dawki SMC i czwarte po sześciu miesiącach od ostatniej dawki). dawka SMC).

Częstość występowania malarii Grube i cienkie rozmazy krwi będą zawsze przygotowywane ze wszystkich próbek. Cienkie rozmazy zostaną utrwalone w metanolu. Wszystkie szkiełka zostaną wysuszone na powietrzu i wybarwione 3% barwnikiem Giemsa przez 45-60 min. Po wyschnięciu zabarwione grube i cienkie rozmazy krwi zostaną zbadane mikroskopowo przy użyciu rutynowej procedury. Gęstość pasożytów będzie rejestrowana jako liczba pasożytów/μl krwi przy założeniu, że średnia liczba leukocytów wynosi 8000/μl krwi. Wysuszone plamki krwi na próbkach bibuły filtracyjnej będą suszone na powietrzu i przechowywane pojedynczo w małych torebkach Ziploc ze środkiem osuszającym. Wykrywanie Plasmodium spp zostanie przeprowadzone przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR) w rutynowym użyciu z instrumentem Quantstudio.

Odpowiedź przeciwciał anty-PfEMP1 Odmienne antygeny powierzchniowe (VSA) kodowane przez Plasmodium falciparum ulegają ekspresji na powierzchni zakażonych erytrocytów (IE) i pośredniczą w wiązaniu z szeregiem receptorów komórek śródbłonka. Najlepiej scharakteryzowane VSA to kodowane przez gen var białko błony erytrocytów P. falciparum 1 (PfEMP1) w dwóch jednostkach eksonów. Ekson I koduje zewnątrzkomórkową i zmienną część białka, jak również region transbłonowy, a ekson II koduje wewnątrzkomórkowy i względnie konserwowany kwasowy segment końcowy (ATS). Najbardziej zmienna część białka zawiera segment N-końcowy, po którym następują segmenty złożone z trzech typów domen; Domeny podobne do wiązania Duffy'ego (domeny DBL): regiony międzydomenowe bogate w cysteinę (CIDR) i C2. W tym badaniu panel IgG w osoczu będzie oznaczany ilościowo przy użyciu białek sprzężonych z mikrosferami zawierającymi 28 antygenów pochodzących z P. falciparum i toksoid tężcowy, przy użyciu platformy Luminex. Panel obejmuje VAR2CSA (VSA związany z malarią łożyskową) i 25 białek CIDR znakowanych HIS reprezentujących wszystkie trzy główne grupy PfEMP1. Ponadto macierz białkowa obejmuje merozoitowe białko powierzchniowe 1 (MSP1) i antygen błony wierzchołkowej 1 (AMA1).