Impatto della chemioprevenzione stagionale contro la malaria sull'immunità contro la malaria tra i bambini nel nord del Benin (ISAMIMA)

Luogo e popolazione dello studio Lo studio sarà condotto in parallelo in due diversi siti, i distretti sanitari di Cobly e Tchaourou situati nel nord del Benin. Questi due distretti sono stati scelti sulla base della programmazione del Ministero della Salute per l'attuazione del SMC. I due siti sono molto simili in termini di caratteristiche di trasmissione della malaria ed epidemiologia, con la differenza che SMC è implementato a Cobly ma non ancora a Tchaourou. I campioni raccolti dai bambini nel distretto sanitario di Cobly saranno inclusi come gruppo di intervento, mentre i campioni raccolti dai bambini a Tchaourou serviranno quindi come controlli, in particolare per quanto riguarda l'evoluzione delle risposte anticorpali. I partecipanti saranno pienamente consigliati sull'importanza di SMC e il consenso informato scritto sarà raccolto dal genitore o dal tutore di ogni bambino. La partecipazione sarà del tutto volontaria.

Disegno e procedure dello studio Questo è uno studio che si concentra sul follow-up per 12 mesi di bambini di età compresa tra 6 e 59 mesi che ricevono SMC, insieme a un gruppo di controllo che non riceve SMC. Lo studio sarà condotto in collaborazione con il National Malaria Control Program (NMCP) del Benin. I dati demografici forniti dall'NMCP consentiranno una selezione casuale di bambini provenienti da famiglie casuali. Sia nei siti di intervento che in quelli di controllo, sarà incluso un numero uguale di bambini. Il gruppo di studio visiterà ogni famiglia selezionata per informare i membri della famiglia dello studio e terrà riunioni mensili con gli operatori sanitari della comunità. I bambini di genitori o tutori consenzienti saranno reclutati e i genitori/tutori saranno presi attraverso un questionario somministrato dal ricercatore o da un assistente (clinico). 1 ml di sangue venoso periferico verrà raccolto in provette di raccolta e trasferito al Center for Expertise and Enhancing Research in Epidemiology and Public Health (CEEREPH) presso l'Università di Parakou, dove verrà preparato uno striscio di sangue da ciascun campione. Cinquanta microlitri di sangue verranno trasferiti su carta da filtro Whatman 3MM e conservati a temperatura ambiente per l'estrazione del DNA. Il sangue intero rimanente verrà quindi centrifugato, il plasma e i globuli rossi verranno aliquotati. I campioni verranno raccolti 4 volte da ciascun bambino in entrambi i gruppi (bambini di età compresa tra 6 e 59 mesi che ricevono o/non SMC) durante il periodo di follow-up di 12 mesi. I primi campioni saranno raccolti all'inizio del SMC (prima che i bambini ricevano il SMC, il secondo il giorno della terza dose di SMC, il terzo tre mesi dopo l'ultima dose di SMC e il quarto, sei mesi dopo l'ultima dose di SMC).

Prevalenza della malaria Da tutti i campioni verranno sempre preparati strisci di sangue spessi e sottili. Strisci sottili saranno fissati in metanolo. Tutti i vetrini saranno asciugati all'aria e colorati usando il colorante Giemsa 3% per 45-60 min. Una volta asciutti, gli strisci di sangue spessi e sottili colorati verranno esaminati al microscopio utilizzando una procedura di routine. Le densità dei parassiti saranno registrate come numero di parassiti/μl di sangue assumendo una conta leucocitaria media di 8.000/μl di sangue. Macchie di sangue essiccato su campioni di carta da filtro verranno essiccate all'aria e conservate singolarmente in piccoli sacchetti Ziploc con un essiccante. Il rilevamento di Plasmodium spp sarà eseguito utilizzando una reazione a catena della polimerasi in tempo reale (qPCR) in uso routinario con uno strumento Quantstudio.

Risposta anticorpale anti-PfEMP1 Gli antigeni di superficie varianti codificati da Plasmodium falciparum (VSA) sono espressi sulla superficie degli eritrociti infetti (IE) e mediano il legame con una gamma di recettori delle cellule endoteliali. I VSA meglio caratterizzati sono la famiglia della proteina 1 della membrana eritrocitaria P. falciparum codificata dal gene var (PfEMP1) in due unità di esoni. L'esone I codifica per la parte extracellulare e variabile della proteina, nonché per una regione transmembrana, mentre l'esone II codifica per il segmento terminale acido (ATS) intracellulare e relativamente conservato. La parte più variabile della proteina contiene un segmento N-terminale seguito da segmenti composti da tre tipi di dominio; Duffy binding-like domains (DBL-domains): Regioni inter-dominio ricche di cisteina (CIDR) e C2. In questo studio, un pannello di IgG plasmatiche sarà quantificato utilizzando proteine ​​accoppiate a microsfere comprendenti 28 antigeni derivati ​​da P. falciparum e tossoide del tetano, utilizzando la piattaforma Luminex. Il pannello include VAR2CSA (il VSA associato alla malaria placentare) e 25 proteine ​​CIDR marcate con HIS che rappresentano tutti e tre i gruppi principali di PfEMP1. Inoltre, l'array proteico comprende la proteina di superficie del merozoite 1 (MSP1) e l'antigene di membrana apicale 1 (AMA1).