Kausiluonteisen malarian kemoprevention vaikutus lasten immuniteettiin malariaa vastaan ​​Pohjois-Beninissä (ISAMIMA)

Tutkimuspaikka ja väestö Tutkimus suoritetaan rinnakkain kahdessa eri paikassa, Coblyn ja Tchaouroun terveysalueilla Pohjois-Beninissä. Nämä kaksi piiriä on valittu terveysministeriön SMC:n toteuttamista koskevan ohjelmoinnin perusteella. Nämä kaksi paikkaa ovat hyvin samankaltaisia ​​malarian leviämisominaisuuksien ja epidemiologian suhteen sillä erolla, että SMC on otettu käyttöön Coblyssa, mutta ei vielä Tchaouroussa. Coblyn terveyspiirin lapsilta kerätyt näytteet otetaan mukaan interventioryhmään, kun taas Tchaouroun lapsilta kerätyt näytteet toimivat siten kontrollina erityisesti vasta-ainevasteiden kehityksen suhteen. Osallistujia neuvotaan täysin SMC:n tärkeydestä, ja jokaisen lapsen vanhemmalta tai huoltajalta kerätään kirjallinen tietoinen suostumus. Osallistuminen tulee olemaan täysin vapaaehtoista.

Tutkimuksen suunnittelu ja menettelyt Tämä on tutkimus, joka keskittyy SMC:tä saaneiden 6–59 kuukauden ikäisten lasten seurantaan yli 12 kuukauden ajan sekä kontrolliryhmän, joka ei saa SMC:tä. Tutkimus tehdään yhteistyössä Beninin kansallisen malariavalvontaohjelman (NMCP) kanssa. NMCP:n toimittamat väestötiedot mahdollistavat lasten satunnaisen valinnan satunnaisista kotitalouksista. Sekä interventio- että kontrollipaikoilla otetaan mukaan yhtä monta lasta. Tutkimusryhmä vierailee jokaisessa valitussa kotitaloudessa tiedottaakseen kotitalouden jäsenille tutkimuksesta ja pitää kuukausittain tapaamisia yhteisön terveydenhuoltoalan työntekijöiden kanssa. Suostuvien vanhempien tai huoltajien lapset rekrytoidaan ja vanhemmat/huoltajat otetaan tutkijan tai avustajan (kliinikon) suorittamalla kyselylomakkeella. 1 ml ääreislaskimoverta kerätään keräysputkiin ja siirretään Parakoun yliopiston Epidemiologian ja kansanterveyden asiantuntijakeskukseen (CEEREPH), jossa jokaisesta näytteestä valmistetaan verikoe. Viisikymmentä mikrolitraa verta siirretään Whatman 3MM -suodatinpaperille ja säilytetään huoneenlämpötilassa DNA-uuttoa varten. Jäljelle jäänyt kokoveri sentrifugoidaan sitten, plasma ja punasolut jaetaan eriin. Näytteet kerätään 4 kertaa jokaiselta molemmissa ryhmissä (6–59 kuukauden ikäiset lapset, jotka saavat tai/ei SMC:tä) 12 kuukauden seurantajakson aikana. Ensimmäiset näytteet otetaan SMC:n alussa (ennen kuin lapset saavat SMC:n, toinen SMC:n kolmannen annoksen päivänä, kolmas kolmen kuukauden kuluttua viimeisestä SMC-annoksesta ja neljäs kuusi kuukautta viimeisen SMC-annoksen jälkeen annos SMC:tä).

Malarian levinneisyys Kaikista näytteistä valmistetaan aina paksuja ja ohuita verikokeita. Ohut tahrat kiinnitetään metanoliin. Kaikki objektilasit ilmakuivataan ja värjätään Giemsa 3 % petsillä 45-60 minuutin ajan. Kun värjätyt paksut ja ohuet verikalvot ovat kuivuneet, ne tutkitaan mikroskooppisesti rutiinimenettelyllä. Loisten tiheydet kirjataan loisten lukumääränä/μl verta olettaen, että leukosyyttien keskimääräinen määrä on 8 000/μl verta. Suodatinpaperinäytteiden kuivuneet veripisteet ilmakuivataan ja varastoidaan yksittäin pieniin Ziploc-pusseihin, joissa on kuivausainetta. Plasmodium spp:n havaitseminen suoritetaan käyttämällä reaaliaikaista polymeraasiketjureaktiota (qPCR) rutiinikäytössä Quantstudio-laitteella.

Anti-PfEMP1-vasta-ainevaste Plasmodium falciparumin koodaamat pinta-antigeenimuunnelmat (VSA) ilmentyvät infektoituneiden erytrosyyttien (IE) pinnalla ja välittävät sitoutumista useisiin endoteelisolureseptoreihin. Parhaiten karakterisoitu VSA on var-geenin koodaama P. falciparumin erytrosyyttikalvoproteiini 1 (PfEMP1) -perhe kahdessa eksoniyksikössä. Eksoni I koodaa proteiinin ekstrasellulaarista ja vaihtelevaa osaa sekä transmembraanista aluetta ja eksoni II koodaa solunsisäistä ja suhteellisen konservoitunutta happamaa terminaalista segmenttiä (ATS). Proteiinin vaihtelevin osa sisältää N-terminaalisen segmentin, jota seuraa segmentit, jotka koostuvat kolmesta domeenityypistä; Duffy-sitoutumiskaltaiset domeenit (DBL-domeenit): Kysteiinirikkaat inter-domeenialueet (CIDR) ja C2. Tässä tutkimuksessa plasman IgG-paneeli kvantifioidaan käyttämällä mikropallohelmiin kytkettyjä proteiineja, jotka sisältävät 28 P. falciparum -peräistä antigeeniä ja tetanustoksoidia, käyttäen Luminex-alustaa. Paneeli sisältää VAR2CSA:n (istukan malariaan liittyvä VSA) ja 25 HIS-merkittyä CIDR-proteiinia, jotka edustavat kaikkia kolmea PfEMP1:n pääryhmää. Lisäksi proteiinisarja sisältää merotsoiitin pintaproteiinin 1 (MSP1) ja apikaalisen kalvoantigeenin 1 (AMA1).