북부 베냉 어린이의 말라리아에 대한 면역에 대한 계절성 말라리아 화학 예방의 영향 (ISAMIMA)

연구 위치 및 인구 이 연구는 베냉 북부에 위치한 Cobly 및 Tchaourou의 보건 지구인 두 개의 다른 장소에서 병렬로 수행될 것입니다. 이 두 구역은 SMC 구현을 위한 보건부의 프로그램에 따라 선택되었습니다. 두 사이트는 말라리아 전파 특성 및 역학 측면에서 매우 유사하며, Cobly에서는 SMC가 구현되고 Tchaourou에서는 아직 구현되지 않는다는 차이점이 있습니다. Cobly 건강 구역의 어린이들로부터 수집된 샘플은 개입 그룹으로 포함되며, Tchaourou의 어린이들로부터 수집된 샘플은 특히 항체 반응의 진화와 관련하여 통제 역할을 할 것입니다. 참가자는 SMC의 중요성에 대해 충분히 상담하고 각 어린이의 부모 또는 보호자로부터 서면 동의서를 수집합니다. 참여는 전적으로 자발적입니다.

연구 설계 및 절차 이것은 SMC를 받지 않은 대조군과 함께 SMC를 받은 6-59개월 어린이의 12개월에 걸친 추적 조사에 초점을 맞춘 연구입니다. 이 연구는 베냉의 국립 말라리아 통제 프로그램(NMCP)과 공동으로 수행될 예정입니다. NMCP에서 제공하는 인구통계학적 데이터를 통해 임의의 가정에서 무작위로 자녀를 선택할 수 있습니다. 개입 및 통제 사이트 모두에서 동일한 수의 어린이가 포함됩니다. 조사팀은 선정된 ​​각 가정을 방문하여 가구 구성원들에게 연구 결과를 알리고 지역사회 보건 종사자들과 매월 회의를 가질 예정이다. 동의한 부모 또는 보호자의 자녀를 모집하고 부모/보호자는 연구자 또는 보조자(임상의)가 관리하는 설문지를 통해 채점합니다. 1ml의 말초 정맥 혈액을 수집 튜브에 수집하고 Parakou 대학의 역학 및 공중 보건 전문 연구 및 강화 연구 센터(CEEREPH)로 전송하여 각 샘플에서 혈액 도말을 준비합니다. 50마이크로리터의 혈액을 Whatman 3MM 여과지로 옮기고 DNA 추출을 위해 실온에 보관합니다. 나머지 전혈은 원심분리되고 혈장과 적혈구는 분주됩니다. 샘플은 12개월 추적 기간 동안 두 그룹(SMC를 받거나 받지 않는 6~59개월 아동)의 각 아동으로부터 4회 수집됩니다. 첫 번째 샘플은 SMC 시작 시(소아가 SMC를 받기 전, 두 번째는 SMC의 세 번째 접종일에, 세 번째는 SMC 마지막 접종 후 3개월에, 네 번째는 마지막 SMC를 6개월 후) 채취합니다. SMC의 복용량).

말라리아 유행 두껍고 얇은 혈액 도말은 항상 모든 샘플에서 준비됩니다. Thinck 얼룩은 메탄올에서 수정됩니다. 모든 슬라이드는 45-60분 동안 Giemsa 염색 3%를 사용하여 공기 건조 및 염색됩니다. 일단 건조되면 염색된 두꺼운 혈액막과 얇은 혈액막을 일상적인 절차를 사용하여 현미경으로 검사합니다. 기생충 밀도는 8,000/혈액 μl의 평균 백혈구 수를 가정하여 기생충/혈액 μl의 수로 기록됩니다. 여과지 샘플의 마른 혈반은 공기 건조되고 건조제가 들어 있는 작은 Ziploc 백에 개별적으로 보관됩니다. Plasmodium spp 검출은 Quantstudio 기기와 함께 일상적으로 사용하는 실시간 중합효소 연쇄 반응(qPCR)을 사용하여 수행됩니다.

항-PfEMP1 항체 반응 Plasmodium falciparum-encoded variant surface antigens(VSA)은 감염된 적혈구(IE)의 표면에서 발현되며 다양한 내피 세포 수용체에 대한 결합을 매개합니다. 가장 특징적인 VSA는 2개의 엑손 단위에 있는 var 유전자 인코딩 P. falciparum 적혈구 막 단백질 1(PfEMP1) 계열입니다. 엑손 I은 단백질의 세포외 및 가변 부분뿐만 아니라 막관통 영역을 암호화하고 엑손 II는 세포내 및 상대적으로 보존된 산성 말단 분절(ATS)을 암호화합니다. 단백질의 가장 가변적인 부분은 세 가지 도메인 유형으로 구성된 세그먼트가 뒤따르는 N-말단 세그먼트를 포함합니다. 더피 결합 유사 도메인(DBL-도메인): 시스테인이 풍부한 도메인 간 영역(CIDR) 및 C2. 이 연구에서는 Luminex 플랫폼을 사용하여 P. falciparum 유래 항원 28개와 파상풍 톡소이드를 포함하는 미소구체 비드 결합 단백질을 사용하여 혈장 IgG 패널을 정량화합니다. 이 패널에는 VAR2CSA(태반 말라리아와 관련된 VSA) 및 PfEMP1의 세 가지 주요 그룹을 모두 나타내는 25개의 HIS 태그 CIDR 단백질이 포함됩니다. 또한 단백질 어레이에는 merozoite surface protein 1(MSP1) 및 apical membrane antigen 1(AMA1)이 포함됩니다.