Impacto de la quimioprevención de la malaria estacional en la inmunidad contra la malaria entre los niños en el norte de Benin (ISAMIMA)

Ubicación y población del estudio El estudio se llevará a cabo en paralelo en dos sitios diferentes, los distritos de salud de Cobly y Tchaourou ubicados en el norte de Benin. Estos dos distritos han sido elegidos en base a la programación del Ministerio de Salud para la implementación del SMC. Los dos sitios son muy similares en términos de características de transmisión de malaria y epidemiología, con la diferencia de que SMC se implementa en Cobly pero aún no en Tchaourou. Las muestras recolectadas de niños en el distrito de salud de Cobly se incluirán como grupo de intervención, mientras que las muestras recolectadas de niños en Tchaourou servirán como controles, en particular con respecto a la evolución de las respuestas de anticuerpos. Los participantes recibirán asesoramiento completo sobre la importancia de SMC y se obtendrá el consentimiento informado por escrito de los padres o tutores de cada niño. La participación será totalmente voluntaria.

Diseño y procedimientos del estudio Este es un estudio que se centra en el seguimiento durante 12 meses de niños de 6 a 59 meses que reciben SMC, junto con un grupo de control que no recibe SMC. El estudio se llevará a cabo en colaboración con el Programa Nacional de Control de la Malaria (NMCP) de Benin. Los datos demográficos proporcionados por el NMCP permitirán una selección aleatoria de niños de hogares aleatorios. Tanto en los sitios de intervención como en los de control, se incluirá un número igual de niños. El equipo de estudio visitará cada hogar seleccionado para informar a los miembros del hogar sobre el estudio y realizará reuniones mensuales con los trabajadores de salud de la comunidad. Se reclutarán hijos de padres o tutores que consientan y los padres/tutores serán tomados a través de un cuestionario administrado por el investigador o un asistente (médico). Se recolectará 1 ml de sangre venosa periférica en tubos de recolección y se transferirá al Centro de Experiencia y Mejora de la Investigación en Epidemiología y Salud Pública (CEEREPH) de la Universidad de Parakou, donde se preparará un frotis de sangre de cada muestra. Cincuenta microlitros de sangre se transferirán a papel de filtro Whatman 3MM y se almacenarán a temperatura ambiente para la extracción de ADN. A continuación, se centrifugará la sangre total restante, se dividirán en alícuotas el plasma y los glóbulos rojos. Las muestras se recolectarán 4 veces de cada niño en ambos grupos (niños de 6 a 59 meses que reciben o no SMC) durante el período de seguimiento de 12 meses. Las primeras muestras se recogerán al inicio del SMC (antes de que los niños reciban el SMC), la segunda el día de la tercera dosis de SMC, la tercera a los tres meses de la última dosis de SMC y la cuarta, a los seis meses de la última dosis de SMC).

Prevalencia de la malaria Se prepararán frotis de sangre gruesos y delgados a partir de todas las muestras en todo momento. Los frotis de Thinck se fijarán en metanol. Todos los portaobjetos se secarán al aire y se teñirán con tinción de Giemsa al 3 % durante 45-60 min. Una vez secos, los frotis de sangre gruesos y delgados teñidos se examinarán microscópicamente mediante un procedimiento de rutina. Las densidades de parásitos se registrarán como el número de parásitos/μl de sangre, suponiendo un recuento promedio de leucocitos de 8000/μl de sangre. Las gotas de sangre seca en las muestras de papel de filtro se secarán al aire y se almacenarán individualmente en pequeñas bolsas Ziploc con un desecante. La detección de Plasmodium spp se realizará utilizando una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) en uso rutinario con un instrumento Quantstudio.

Respuesta de anticuerpos anti-PfEMP1 Los antígenos de superficie variante (VSA) codificados por Plasmodium falciparum se expresan en la superficie de los eritrocitos infectados (IE) y median la unión a una variedad de receptores de células endoteliales. Los VSA mejor caracterizados son la familia de proteínas 1 de membrana de eritrocitos de P. falciparum codificada por el gen var (PfEMP1) en dos unidades de exón. El exón I codifica la parte extracelular y variable de la proteína, así como una región transmembrana, y el exón II codifica el segmento terminal ácido (ATS) intracelular y relativamente conservado. La parte más variable de la proteína contiene un segmento N-terminal seguido de segmentos compuestos por tres tipos de dominio; Dominios similares a la unión Duffy (dominios DBL): regiones interdominio ricas en cisteína (CIDR) y C2. En este estudio, se cuantificará un panel de IgG en plasma utilizando proteínas acopladas a microesferas que comprenden 28 antígenos derivados de P. falciparum y toxoide tetánico, utilizando la plataforma Luminex. El panel incluye VAR2CSA (el VSA asociado a la malaria placentaria) y 25 proteínas CIDR marcadas con HIS que representan los tres grupos principales de PfEMP1. Además, la matriz de proteínas incluye la proteína de superficie de merozoito 1 (MSP1) y el antígeno de membrana apical 1 (AMA1).