Inverkan av säsongsbetonad malaria kemoprevention på immunitet mot malaria bland barn i norra Benin (ISAMIMA)

Studieplats och befolkning Studien kommer att genomföras parallellt på två olika platser, hälsodistrikten Cobly och Tchaourou belägna i norra Benin. Dessa två distrikt har valts ut utifrån hälsoministeriets programmering för implementering av SMC. De två platserna är mycket lika när det gäller malariaöverföringsegenskaper och epidemiologi, med skillnaden att SMC är implementerat i Cobly men ännu inte i Tchaourou. Prover som samlats in från barn i Coblys hälsodistrikt kommer att inkluderas som interventionsgrupp, medan prover från barn i Tchaourou kommer att fungera som kontroller, särskilt med avseende på utvecklingen av antikroppssvar. Deltagarna kommer att få fullständiga råd om vikten av SMC och skriftligt informerat samtycke kommer att samlas in från föräldern eller vårdnadshavaren till varje barn. Deltagande kommer att vara helt frivilligt.

Studiedesign och procedurer Detta är en studie som fokuserar på uppföljning under 12 månader av barn i åldern 6 till 59 månader som får SMC, tillsammans med en kontrollgrupp som inte får SMC. Studien kommer att genomföras i samarbete med National Malaria Control Program (NMCP) i Benin. Demografisk data som tillhandahålls av NMCP kommer att möjliggöra ett slumpmässigt urval av barn från slumpmässiga hushåll. På både interventions- och kontrollplatser kommer lika många barn att inkluderas. Studieteamet kommer att besöka varje utvalt hushåll för att informera hushållsmedlemmar om studien och kommer att hålla månatliga möten med vårdpersonalen. Barn till samtyckande föräldrar eller vårdnadshavare kommer att rekryteras och föräldrar/vårdnadshavare kommer att tas genom ett frågeformulär som administreras av forskaren eller en assistent (läkare). 1 ml perifert venöst blod kommer att samlas in i uppsamlingsrör och överföras till Center for Expertise and Enhancing Research in Epidemiology and Public Health (CEEREPH) vid University of Parakou där ett blodutstryk kommer att förberedas från varje prov. Femtio mikroliter blod kommer att överföras till Whatman 3MM filterpapper och förvaras vid rumstemperatur för DNA-extraktion. Det återstående helblodet kommer sedan att centrifugeras, plasma och röda blodkroppar kommer att alikvoteras i alikvoter. Prover kommer att samlas in vid 4 gånger från varje barn i båda grupperna (barn i åldern 6 till 59 månader som får eller/inte får SMC) under den 12 månader långa uppföljningsperioden. De första proverna kommer att tas i början av SMC (innan barn får SMC, det andra på dagen för den tredje dosen av SMC, det tredje tre månader efter den sista dosen av SMC och det fjärde, sex månader efter den sista dos av SMC).

Malariaprevalens Tjocka och tunna blodutstryk kommer alltid att förberedas från alla prover. Tunna utstryk fixeras i metanol. Alla objektglas kommer att lufttorkas och färgas med Giemsa-färgning 3 % i 45-60 min. När de har torkat kommer de färgade tjocka och tunna blodfilmerna att undersökas mikroskopiskt med hjälp av en rutinprocedur. Parasitdensiteter kommer att registreras som antalet parasiter/μl blod under antagande av ett genomsnittligt antal leukocyter på 8 000/μl blod. Torkade blodfläckar på filterpappersprover kommer att lufttorkas och förvaras individuellt i små Ziploc-påsar med ett torkmedel. Plasmodium spp-detektion kommer att utföras med en realtidspolymeraskedjereaktion (qPCR) i rutinmässig användning med ett Quantstudio-instrument.

Anti-PfEMP1-antikroppssvar Plasmodium falciparum-kodade variantytantigener (VSA) uttrycks på ytan av infekterade erytrocyter (IE) och förmedlar bindning till en rad endotelcellsreceptorer. De bäst karakteriserade VSA är den var-genkodade P. falciparum erytrocytmembranprotein 1 (PfEMP1) familjen i två exonenheter. Exon I kodar för den extracellulära och variabla delen av proteinet såväl som en transmembranregion och Exon II kodar för det intracellulära och relativt konserverade sura terminala segmentet (ATS). Den mest variabla delen av proteinet innehåller ett N-terminalt segment följt av segment som består av tre domäntyper; Duffy bindningsliknande domäner (DBL-domäner): Cysteinrika interdomänregioner (CIDR) och C2. I denna studie kommer en panel av plasma-IgG att kvantifieras med hjälp av mikrosfär-pärlkopplade proteiner som omfattar 28 P. falciparum-härledda antigener och stelkrampstoxoid, med hjälp av Luminex-plattformen. Panelen inkluderar VAR2CSA (VSA associerad med placental malaria) och 25 HIS-märkta CIDR-proteiner som representerar alla tre huvudgrupperna av PfEMP1. Dessutom inkluderar proteinmatrisen merozoit ytprotein 1 (MSP1) och apikalt membranantigen 1 (AMA1).