糖尿病性足症候群（PTA-DFS）における早期の経皮経管血管形成術 (PTA-DFS)

計画された研究は、単一中心の無作為化対照臨床試験です。 研究参加者は、1:1の比率で早期PTA（48時間以内の「即時PTA」）を行うグループと選択的PTA（標準治療）を行うグループにランダムに割り付けられます。 ベースライン検査とすべてのフォローアップ検査は、PTA を除き、両方のグループで同様に実行されます。 この研究は患者と医師に対して盲検化されていません。つまり、研究者は PTA に対する統制介入を計画していません。 ただし、その後のすべての臨床検査、特に炎症のバイオマーカーの測定は盲検化されるように設計されています。すなわち、PTA に関する情報を研究室に渡さない。 ベースライン検査とフォローアップ検査では、足潰瘍の重症度と治癒過程に焦点を当てます。 待機アームの患者が創傷治癒の大幅な悪化を経験した場合、患者は「即時」アームに移されます。 したがって、私たちの各患者について、pAVD の治療はガイドラインに従って行われます。このガイドラインは、臨床進行管理および研究中の訪問の専門家によって管理および文書化されています。 訪問中、研究者は糖尿病性足潰瘍だけに注意を払うのではなく、各患者を全体像の中の重症患者として見ます。 そこで、研究者はまず心機能を考慮し、十分な水分補給により腎貯留パラメータを改善することを試みた。 重度の腎不全の場合、腎臓に影響を与えないCO2血管造影を用いたPTAスタンバイでのガイドラインに基づく選択的血管造影が可能です。

ベースラインの特徴付け 患者の完全な病歴と現在および以前の投薬は、最初の臨床評価中に取得されます。 医療記録に加えて、ライフスタイル（喫煙、アルコール）および社会的地位（婚姻状況、学歴/社会的地位）に関する質問も聞き出されます。

身体検査が行われ、これには潰瘍の虚血性病因に加えて、静脈または神経障害性誘発因子を考慮する必要があるかどうかを判断することが含まれます。 慢性静脈不全（CVI）の証拠を得るために、研究者は末梢脚静脈の二重超音波検査を実行します。 慢性静脈不全の証拠がある場合、重症度は臨床 (C)、病因 (E)、解剖学的 (A)、および病態生理学的 (P) (CEAP) 分類を使用して評価されます。 定期的な臨床化学検査も血液サンプルを使用して実行されます。 さらに、糖尿病の期間も記録されます。

創傷の記録 創傷の記録は、既存の潰瘍を記録するために実行されます。 影響を受けた領域、その深さ、体積が記録されます。 この写真記録は、可能な限り同じ角度、同じ位置、同じ距離、同じ照明条件で常に実行する必要があります。 創傷は、現在の学際的なガイドラインで推奨されている WIfI および Wagner (Armstrong) 分類基準に従って評価されます。

灌流測定

次の検査が行われます。

• ドップラー周波数分析と足首-上腕部およびつま先-足首の指数測定を備えた脚動脈のデュプレックス/ドップラー超音波検査。 続く二重超音波検査では、末梢動脈の解剖学的構造が定義されます。 コースの後半で、これらの検査により、血行再建された血管セグメントの開存性、ピーク流速の測定による狭窄の程度、および内膜過形成が判定されます。 さらに、大腿動脈の流れに依存した拡張も二重超音波検査を使用して検査されます。
• 足の酸素飽和度は分光カメラを使用して分析されます。その制御測定は手を測定することによって行われます。
• セグメントパルソシログラフィー
• 閉塞プレチスモグラフィーを使用した安静時の動脈灌流と灌流予備力の測定。
• 血行動態（血圧と心拍数）
• 安静時の痛み。 マギル氏による現在の臨床症状と痛みのアンケートの記録。
• 末梢神経障害は研究の範囲内になります。参加患者は、国家医療ガイドライン（NVL）「成人期の糖尿病における神経障害」に基づいて末梢多発神経障害の検査も行われます。 末梢神経機能検査には、糖尿病性感覚運動性多発神経障害（DSNP）を診断するための臨床神経障害スコア調査が含まれます。 詳細には、神経障害症状スコア (NSS) と神経障害欠損スコア (NDS) が記録されます。

綿棒による傷 標本の収集は、市販の植毛綿棒 (FLOQSwab®、COPAN Diagnostics Inc、Murrieta USA) を使用して「Levine」法に従って実行されます。 このプロジェクトでは、マイクロバイオームと対応するレジストグラムを決定するための材料を取得するために、同時に各患者から合計 3 本の綿棒が採取されます (下流プロセスに応じて特定の輸送媒体が使用されます)。 スワブは徹底的な創傷洗浄後に採取されます。最初のスワブは最初の創傷ケア後に、2 回目は 4 週間後、3 回目は 8 週間後、4 回目は 12 週間後、5 回目は 24 週間後、そして最後のスワブは 48 週間後に採取されます。

ベースライン時の創傷サンプルに基づく系統学的組成の測定により、デュッセルドルフのハインリッヒ・ハイネ大学の医療微生物学および病院衛生研究所と協力して全ゲノム配列決定を使用して、創傷サンプル中のさまざまな細菌種が決定されます。 マイクロバイオームの構成は、いくつかの利点があるナノポア技術を使用して研究されています。 データはカスタムのバイオインフォマティクス スクリプトを使用して分析されます。

採血は朝の空腹時に行います。 採血は腹腔内で行われます。 PTA 前および DFS のフォローアップ訪問中の臨床ルーチンでのデータであり、研究関連のコレクションではありません。 この際、研究関連の穿刺を追加することなく、追加の血液サンプルを採取できます。 血液は、無細胞 (cf)DNA を検査するために、いわゆるストレッチタブに収集されます。 時点には、検査初日（V0）、1日目（V1）、1か月（V2）、2か月（V3）、3か月（V4）、6か月（V5）、 PTAから12ヶ月後(V6)。 研究期間中、患者ごとに採血する血液の量は 500 ml 未満でなければなりません。

cfDNA の検査 血管再生組織からの微生物成分の取り込みを評価するために、研究者は微生物の cfDNA の量を測定したいと考えています。 十分な量の収集物質が最長 3 年間分析されます。

統計分析 創傷マイクロバイオームの全ゲノム配列データの分類学的プロファイリングは、前述したように、HHU アルゴリズム生物情報学部の生物情報学スクリプトを使用して実行されます。 オックスフォード ナノポア プラットフォームで生成された創傷マイクロバイオームの全ゲノム配列データは、Kraken2 と原虫、真菌、ウイルス、植物配列の包括的なカスタム データベースによる分類学的プロファイリングに使用されます。 カスタム スクリプトを使用して、さまざまな分類レベルでのメタゲノム構成の比較を可能にする視覚化が生成されます。 サンプルのクラスタリングを評価するために、研究者らはブレイ-カーティス距離に基づいて主座標分析を実行しました。 Conda バージョン管理システムを使用すると、ワークフロー全体が再現可能な Snakemake ワークフローとして提供されます。 創傷マイクロバイオーム組成と代謝表現型の関連付けは、オムニバス、ブロックごと、および形質ごとの統計モデルを使用して実行されます。 変数は、Wilcoxon 対応ペア符号付き順位検定、対応のない両側 Student t 検定、および両側 Mann-Whitney U 検定を使用して比較され、経時的およびグループ間の差異が検出されます。 名目変数は、必要に応じてカイ二乗検定とフィッシャーの直接確率検定を使用して比較されます。 変数間の関係（例えば、マイクロバイオーム組成の変化と創傷治癒または合併症との間の関連）は、部分ピアソン相関係数を使用して評価されます（交絡因子の調整およびボンフェローニ法を使用した多重検定の有無にかかわらず）。 ＰＴＡ後の創傷マイクロバイオーム変化の平均値および平均値の標準誤差の予備推定値が文献から入手できないため、標準化平均差（コーエンのｄ）を検出力分析に使用した。 すべての統計分析は、SPSS for Windows 23.0 (SPSS Inc.、米国イリノイ州シカゴ) を使用して実行されます。 すべてのグラフは、GraphPad Prism バージョン 7.01 (GraphPad Software, Inc.、米国カリフォルニア州ラホーヤ) を使用して生成されています。