糖尿病足综合征早期经皮腔内血管成形术 (PTA-DFS) (PTA-DFS)

计划的研究是一项单中心、随机和对照临床试验。 研究参与者将以 1:1 的比例随机分为早期 PTA（“立即 PTA”，48 小时内）组和选择性 PTA（标准护理）组。 除 PTA 外，两组的基线检查和所有后续检查均相同。 这项研究对患者和医生来说是不盲的，即。即，研究人员没有计划对 PTA 进行控制干预。 然而，所有后续的实验室测试，尤其是炎症生物标志物的测量，都被设计为盲法，即。即，不将 PTA 信息传递给实验室。 基线和后续检查将重点关注足部溃疡的严重程度和愈合过程。 如果选择性组的患者伤口愈合明显恶化，他们就会被转移到“立即”组。 因此，对于我们的每位患者，pAVD 的治疗都遵循指南，这些指南由临床进展控制和研究期间访问的专家进行控制和记录。 在探访过程中，调查人员不仅关注糖尿病足溃疡，更将每位患者视为危重患者。 因此，考虑到心脏功能，研究人员首先尝试通过充足的水合作用来改善肾潴留参数。 在严重肾功能不全的情况下，可以使用 CO2 血管造影在 PTA 备用条件下进行基于指南的选择性血管造影，这不会影响肾脏。

基线特征 在初始临床评估期间获得患者的完整病史以及当前和以前的药物治疗。 除了病历之外，还会引出生活方式问题（吸烟、饮酒）和社会地位（婚姻状况、教育程度/社会地位）。

进行体检，包括确定除了溃疡的缺血性病因之外是否还应考虑静脉或神经性触发因素。 为了获得慢性静脉功能不全 (CVI) 的证据，研究人员将对腿部外周静脉进行双重超声检查。 如果有慢性静脉功能不全的证据，将使用临床 (C)、病因学 (E)、解剖学 (A) 和病理生理学 (P) (CEAP) 分类来评估严重程度。 还将使用血液样本进行常规实验室化学测试。 此外，还将记录糖尿病持续时间。

伤口记录 进行伤口记录是为了记录现有的溃疡。 受影响的区域、深度和体积将被记录。 该照片记录应始终以相同的角度、相同的位置和距离以及尽可能在相同的照明条件下进行。 伤口根据当前跨学科指南推荐的 WIfI 和瓦格纳（阿姆斯特朗）分类标准进行评估。

灌注测量

进行以下检查：

• 腿部动脉的双重/多普勒超声，具有多普勒频率分析和踝臂和趾踝指数测量。 在随后的双功能超声检查中，定义了外周动脉的解剖结构。 在课程后期，这些检查可确定血运重建血管段的通畅性、通过峰值流速测定的狭窄程度和内膜增生。 此外，还使用双功超声检查检查股动脉的血流依赖性扩张。
• 将使用光谱相机分析足部的氧饱和度；它的控制测量是通过测量指针来完成的。
• 节段性脉搏描记法
• 使用闭塞体积描记法测量静息时的动脉灌注和灌注储备。
• 血流动力学（血压和心率）
• 休息时疼痛。 根据麦吉尔记录当前临床症状和疼痛问卷。
• 周围神经病变将属于研究范围；参与的患者还将根据国家医疗保健指南（NVL）“成人糖尿病神经病”接受周围性多发性神经病检查。 周围神经功能测试包括临床神经病变评分调查，以诊断糖尿病感觉运动性多发性神经病（DSNP）。 详细地，记录神经病症状评分(NSS)和神经病缺陷评分(NDS)。

拭子伤口标本采集是根据“Levine”方法使用市售植绒拭子（FLOQSwab®，COPAN Diagnostics Inc，Murrieta USA）进行的。 该项目将同时从每位患者身上采集3个拭子，以获得用于确定微生物组和相应电阻图的材料（将根据下游工艺使用特定的传输介质）。 彻底清洁伤口后收集拭子，第一次是在初始伤口护理后收集，第二次是在 4 周时收集，第三次是在 8 周时收集，第四次是在 12 周时收集，第五次是在 24 周时收集，最后一次是在 48 周时收集。

与杜塞尔多夫海因里希·海涅大学医学微生物学和医院卫生研究所合作，通过全基因组测序，基于基线伤口样本的系统发育组成测量，确定伤口样本中的不同细菌种类。 使用纳米孔技术研究微生物组的组成，该技术具有多种优点。 使用自定义生物信息学脚本分析数据。

采血将在早上空腹进行。 血液采集是通过 i.d. 进行的。在 PTA 之前和 DFS 随访期间的临床常规中，并不代表与研究相关的收集。 在这种情况下，可以采集额外的血液样本，而无需进行额外的与研究相关的穿刺。 血液将被收集在所谓的拉伸桶中，用于检测游离 (cf)DNA。 时间点包括常规随访检查第一天（V0）、第1天（V1）、一个月（V2）、两个月（V3）、三个月（V4）、六个月（V5）、 PTA 后 12 个月 (V6)。 在研究期间，每位患者应抽取少于 500 毫升的血液。

cfDNA 检查 为了评估血运重建组织中微生物成分的掺入情况，研究人员希望确定微生物 cfDNA 的量。 将对收集到的足够数量的材料进行最长三年的分析。

统计分析 如前所述，使用 HHU 算法生物信息学系的生物信息学脚本对伤口微生物组的全基因组测序数据进行分类分析。 使用 Oxford Nanopore 平台生成的伤口微生物组的全基因组测序数据将用于 Kraken2 的分类学分析以及原生动物、真菌、病毒和植物序列的综合定制数据库。 使用自定义脚本生成允许比较不同分类水平的宏基因组组成的可视化。 为了评估样本的聚类情况，研究人员根据布雷-柯蒂斯距离进行了主坐标分析。 使用 Conda 版本管理系统，整个工作流程作为可复制的 Snakemake 工作流程提供。 将使用综合、分块和性状统计模型来进行伤口微生物组组成与代谢表型的关联。 将使用 Wilcoxon 配对符号秩检验、不配对的两侧学生 t 检验和两侧 Mann-Whitney U 检验来比较变量，以检测随时间变化和组间差异。 酌情使用卡方检验和费舍尔精确检验来比较名义变量。 将使用部分 Pearson 相关系数（使用或不使用 Bonferroni 方法调整混杂因素和多重测试）来评估变量之间的关系（例如，微生物组组成的变化与伤口愈合或并发症之间的关联）。 使用标准化平均差（Cohen's d）进行功效分析，因为文献中没有对 PTA 后伤口微生物组变化平均值和平均值标准误差的初步估计。 所有统计分析均使用 SPSS for Windows 23.0（SPSS Inc.，芝加哥，伊利诺斯州，美国）进行。 所有图表均使用 GraphPad Prism 7.01 版（GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA）生成。