オルガノイド薬剤感受性検査と消化管腫瘍の正確な治療の相関関係に関する研究

この試験は単群、多施設、非盲検、前向き臨床研究です。

1. サンプルサイズ この研究は臨床探索的研究であり、サンプルサイズを推定するものではありません。 対象には、食道がん、胃がん、結腸直腸がんが各16人、消化管間質腫瘍が20人を含む消化管腫瘍患者68人が含まれると予想されている。

1.1参加センター 全国で約10～15の研究センターが参加しています。 2.案件の選定 2.1選定基準

選ばれるには、次の条件をすべて満たす必要があります。

1. 年齢は18歳から75歳まで、性別は問いません。
2. 組織病理学/細胞学によって確認された食道がん、胃がん、結腸直腸がん、および消化管間質腫瘍の患者。

3. 被験者の状態は次のいずれかの条件を満たします。

   食道がん：臨床病期分類はステージ II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) またはステージ III (cT3-4aN1-3MO) です。胃がん：臨床病期分類はステージ II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) またはステージ III (cT3-4aN1-3MO) です。結腸直腸がん: 臨床病期分類はステージ II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) またはステージ III (cT3-4aN1-3MO) 消化管間質腫瘍: 局所進行リスク分類 (腫瘍の自然破裂、腫瘍直径) を持つ原発性間質腫瘍>10cm; 有糸分裂像>10/5mm) ²;腫瘍直径>5cm、有糸分裂数>5/5mm ²; 5cm ≤ 腫瘍直径 > 2cm および有糸分裂像 > 5/5mm ² 非胃原発。 10cm ≤ 腫瘍直径 > 5cm および有糸分裂像 ≤ 5/5mm ² (非原発性胃間質腫瘍) または再発性転移性/切除不能な消化管間質腫瘍。

4. 患者または法定代理人は自発的にこの研究に参加し、2.2 除外基準に署名します。

次の状況のいずれかがこのトライアルに含まれることはできません。

1. 全身性炎症性疾患および/または凝固障害を患っている。
2. 重篤な肝臓疾患、腎臓疾患、心血管疾患、呼吸器疾患、またはコントロール不良の糖尿病がある。
3. 他のシステムの悪性腫瘍に苦しんでいる。
4. 精神疾患を患っており、研究の完了に協力できない患者。
5. 潜在的な化学療法薬または外科的禁忌に対する既知のアレルギー。
6. 状態が回復できない、または瀕死の状態にある患者。
7. オルガノイド培養および組織学的分析のための生検手術では十分な腫瘍組織を取得できない。
8. 妊娠中または授乳中、または今後 6 か月以内に妊孕性計画を計画している。
9. 健康状態が悪い、KPS スコア < 70 ポイント、または ECOG スコア ≥ 3 ポイント。
10. 4週間以内に他の抗がん剤治療、生物学的療法、放射線療法、または免疫抑制療法を受けている。 3.研究方法 3.1 腫瘍臓器サンプルの収集 新鮮な組織、適切かつ十分なサンプルサイズ、干渉を減らすために正常組織を完全に除去するように努めます。

内視鏡生検：合計量 0.5g 以上を鉗子で 3 個以上採取し、がん細胞が豊富に存在する領域を採取します。穿刺生検：全長 3cm 以上（各片 1cm 以上、合計 3 片）で、がん細胞が豊富に存在する領域を採取します。腹水穿刺/排液: 不純物を避け、腫瘍細胞の存在を確実にするため、総量は 250ml を超えます。

3.2 コールドチェーン輸送 採取した腫瘍サンプルは氷上で 2 ～ 8℃で 24 時間保管し、研究室に配送する必要があります。

3.3 臓器モデルの薬剤感受性試験

1. オルガノイド培養 I 細胞懸濁液の取得

   ①腫瘍細胞懸濁液：検体から壊死組織、脂肪組織、線維組織を除去した後、有効検体を直径1mmの腫瘍組織片に切断し、組織解離液を用いて組織片を消化する。 70 ～ 100 μM の滅菌フィルターを使用して消化組織を濾過し、濾液を 5 分間遠心分離してから上清を廃棄します。 赤血球ライサーゼを使用して懸濁液中の赤血球を溶解し、遠心分離し、PBS を使用して沈殿を懸濁します。

   • 悪性流体細胞懸濁液：70～100μM滅菌フィルターを使用して、悪性流体を濾過し、固体懸濁液を除去し、遠心分離し、PBSを使用して沈殿を懸濁する。

   II 細胞生存率の検証: トリパンブルー染色法を使用して細胞生存率を観察し、生細胞の割合が 80% 以上であることを確認します。

2. オルガノイドの確立 腫瘍生細胞の混合マトリックスゲルをあらかじめ用意した培養プレート上に均一に広げ、適切な細胞培養培地を加え、37 ℃、5% CO 2 インキュベーターに静置して培養します。
3. 器官形成率の検証 培養に成功したオルガノイドのサンプルに対して病理学的、遺伝子検査、および免疫組織化学的検証が行われ、腫瘍オルガノイドの構築が成功したことを確認します。 検証が正常組織に対するものである場合、サンプルは不合格となり、タイムリーなフィードバックが臨床サンプリング医師に提供されます。
4. オルガノイド薬物の感度検証 培養が成功した後、オルガノイドを次の 4 つのグループに分けました。ネガティブコントロール（オルガノイド+薬物溶媒）。ポジティブコントロール（オルガノイド+アストロスポリン）。薬剤感受性検査グループ（オルガノイド＋検査薬）；各グループには 3 つのウェルがあり、薬剤感受性検査で選択される薬剤は、研究者の推奨事項と中国臨床腫瘍学会の診断および治療ガイドラインに基づいています。 臨床用量を基準として、高・中・低の3つの濃度を3倍の勾配で設定しています。
5. 細胞生存率試験 細胞生存率は、ATP 生物蛍光薬剤感受性検出技術 (ATP-TCA) を使用して測定されました。 蛍光色素と蛍光酵素の複合体は、ATP の関与により化学反応を起こして蛍光を発します。 発せられる蛍光強度は ATP の含有量を反映し、ATP の含有量は生細胞の数を反映します。 ATP生物蛍光薬剤感受性検出技術は、細胞活動を測定するためのエンドポイントとして細胞内ATP含量を使用し、異なる薬剤と異なる濃度の同じ薬剤間の差異を測定できます。
6. 薬剤感受性指標の取得 臓器様増殖阻害率：オルガノイド上のさまざまな薬剤濃度の阻害率（IR）。

薬剤感受性評価：臨床作用濃度での薬剤のオルガノイドに対する増殖阻害率は、薬剤に対する腫瘍オルガノイドの感受性指標として使用されます。 20 未満の阻害率はオルガノイドが薬剤に対して耐性であることを示し、20 ～ 40 の阻害率は軽度の感受性を示し、40 ～ 70 の阻害率は中等度の感受性を示し、70 を超える阻害率はオルガノイドの感受性が高いことを示します。薬に。

上記の技術サポートは、サードパーティの専門技術プラットフォームによって提供されます。上海バイオマス医薬品評価/蘆州健康製品試験センター。薬剤感受性の結果が出るまでに約 2 週間かかります。 消化管間質腫瘍の薬剤感受性検査は、三次元培養法の探索結果に基づいて実施し、プロジェクト本体と合意する。

3.4 投薬計画の作成 生検標本に基づいて腫瘍オルガノイドモデルを構築し、診断および治療のガイドライン/専門家の合意、研究者の臨床経験と組み合わせたオルガノイドの薬剤感受性の結果に基づいて治療計画を作成します。

すべての被験者の全体的な治療計画は、サブセンターの研究者によって症状に基づいて策定されます。

4.研究の手順 本研究は、スクリーニング期間、計画期間、治療観察期間、経過観察期間の4つに分かれています。

5. 有効性の評価 治療後、同じカテゴリーの腫瘍を評価および比較します。 5.1有効性評価指標

• オルガノイド薬剤感受性の結果と、ガイドライン/コンセンサスに基づいた推奨治療計画との違いを比較します。 ② 3 薬物サイクル治療後のベースラインと比較した標的病変の変化: 胸部および腹部 CT、MRI、または PET-CT。

  • 再発率;患者の追跡情報に基づく。 ④ 患者の無増悪生存期間中央値と生存期間中央値：患者の追跡調査中に各腫瘍の周期情報と組み合わせます。

5.2 有効性の判断基準

有効性は、固形腫瘍に関する世界保健機関 (WHO) の基準に従って評価されます。

• 完全奏効 (CR): すべての標的病変が消失し、すべての病理学的リンパ節の短軸値が 10 mm 未満である。

  • 部分応答 (PR): すべての標的病変半径の合計の最小 30% の減少を伴う、臨界半径の合計を指します。 ③ 安定病変（SD）：観察された対象病変の合計の最小値を指し、進行基準を満たさず、寛解基準も満たさない。 ④ 進行性疾患（PD）：観察された標的病変の合計の最小値、すべての標的病変の合計半径の最小増加20％、および標的病変の半径の合計増加の絶対値＞5mm。 計算：治療後の有効率=(CR+PR)/総症例数×100.0%。 客観的奏効率（OR）には、少なくとも 4 週間離れて確認された CR+PR が含まれます。疾患制御率（DCR）には、確認された腫瘍寛解（CR+PR）と、少なくとも4週間の薬物使用後にSDと記録された患者が含まれます。 CR+PR+SD。

    • 腫瘍再発：治療後の画像検査で、部分寛解後6ヵ月後に腫瘍が再び拡大し、原発巣の別の部位や離れた領域に新たな腫瘍が再発することが判明した。 6か月の完全寛解後、画像検査により腫瘍の再発（局所再発、局所再発、遠隔再発を含む）が発見されました。