Výzkum korelace mezi testováním citlivosti na organické látky a přesnou léčbou gastrointestinálních nádorů

Tato studie je jednoramenná, multicentrická, otevřená, prospektivní klinická studie.

1. Velikost vzorku Tato studie je klinickou průzkumnou studií a neodhaduje velikost vzorku. Očekává se, že bude zahrnovat 68 pacientů s nádory trávicího traktu, včetně 16 případů rakoviny jícnu, rakoviny žaludku a kolorektálního karcinomu a 20 případů gastrointestinálních stromálních nádorů.

1.1Participační centrum Celostátně je zapojeno přibližně 10-15 výzkumných center. 2. Výběr případu 2.1 Kritéria výběru

Pro výběr musí být splněny všechny následující podmínky:

1. Věkové rozmezí od 18 do 75 let bez ohledu na pohlaví;
2. Pacienti s rakovinou jícnu, rakovinou žaludku, kolorektálním karcinomem a gastrointestinálními stromálními tumory potvrzenými histopatologií/cytologií;

3. Podmínka subjektu splňuje jednu z následujících podmínek:

   Karcinom jícnu: klinický staging je stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) nebo stadium III (cT3-4aN1-3MO); Rakovina žaludku: Klinický staging je stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) nebo stadium III (cT3-4aN1-3MO); Kolorektální karcinom: klinické stadium je stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) nebo stadium III (cT3-4aN1-3MO) Gastrointestinální stromální tumory: Primární stromální tumory s lokálně pokročilou klasifikací rizika (spontánní ruptura tumoru; průměr tumoru >10cm; mitotický obraz >10/5mm) ²; Průměr nádoru > 5 cm a počet mitotických buněk > 5/5 mm²; 5 cm ≤ průměr tumoru > 2 cm a mitotický obraz > 5/5 mm ² Nežaludeční primární; 10 cm ≤ průměr tumoru > 5 cm a mitotický obraz ≤ 5/5 mm ² (neprimární žaludeční stromální tumor) nebo recidivující metastatický/neresekovatelný gastrointestinální stromální tumor.

4. Pacient nebo zákonný zástupce se dobrovolně účastní této studie a podepisuje 2.2 Vylučovací kritéria

Do této zkoušky nelze zahrnout jednu z následujících situací:

1. Trpící systémovými zánětlivými onemocněními a/nebo poruchami koagulace;
2. Existují závažná onemocnění jater a ledvin, kardiovaskulární onemocnění, onemocnění dýchacích cest nebo nekontrolovaná cukrovka;
3. Trpící jinými zhoubnými nádory systému;
4. Pacienti s duševním onemocněním, kteří nejsou schopni spolupracovat při dokončení studie;
5. Známé alergie na potenciální chemoterapeutika nebo chirurgické kontraindikace;
6. Pacienti, jejichž stav nelze zvrátit nebo jsou ve stavu umírání;
7. Nelze získat dostatečné množství nádorové tkáně biopsií pro kultivaci organoidů a histologickou analýzu;
8. Těhotenství nebo kojení nebo plánování plánu plodnosti během příštích 6 měsíců;
9. Špatný zdravotní stav, skóre KPS<70 bodů nebo skóre ECOG ≥ 3 body;
10. přijetí jakékoli jiné protirakovinné léčby, biologické terapie, radiační terapie nebo imunosupresivní terapie během 4 týdnů; 3. Metoda výzkumu 3.1 Odběr vzorků nádorových orgánů Čerstvá tkáň o vhodné a dostatečné velikosti vzorku se pokuste zcela odstranit normální tkáň, aby se snížila interference.

Endoskopická biopsie: Odeberte 3 nebo více kusů pomocí kleští v celkovém množství ≥ 0,5 g a odeberte bohaté oblasti rakovinných buněk; Punkční biopsie: s celkovou délkou ≥ 3 cm (každý kus je 1 cm nebo více, celkem 3 kusy), shromážděte bohaté oblasti rakovinných buněk; Punkce/drenáž ascitu: Celkový objem nad 250 ml, aby se zabránilo nečistotám a zajistila se přítomnost nádorových buněk.

3.2 Přeprava chladným řetězcem Odebrané vzorky nádoru by měly být skladovány na ledu při 2-8 °C po dobu 24 hodin a doručeny do laboratoře.

3.3 Testování orgánové modelové citlivosti na léky

1. Organoidní kultura I Získání buněčné suspenze

   ① Suspenze nádorových buněk: Po odstranění nekrotické tkáně, tukové tkáně a vazivové tkáně ze vzorku je účinný vzorek rozřezán na fragmenty nádorové tkáně o průměru 1 mm a poté jsou fragmenty tkáně štěpeny pomocí roztoku pro disociaci tkáně. Použijte 70-100 μM sterilní filtr, který filtruje natrávenou tkáň a filtrát se 5 minut centrifuguje, než se odstraní supernatant. Použijte lyzázu červených krvinek k lýze červených krvinek v suspenzi, centrifugujte a suspendujte sraženinu pomocí PBS.

   • Suspenze buněk maligní tekutiny: pomocí 70-100 μM sterilního filtru se odfiltruje maligní tekutina, odstraní se pevná suspenze, odstředí se a sraženina se suspenduje pomocí PBS.

   II Ověření životaschopnosti buněk: Použijte metodu barvení trypanovou modří k pozorování životaschopnosti buněk a ujistěte se, že podíl živých buněk je větší než 80 %.

2. Ustavení organoidů Na předem připravenou kultivační plotnu rovnoměrně rozprostřete smíchaný matricový gel nádorových živých buněk, přidejte vhodné buněčné kultivační médium a poté jej umístěte do inkubátoru při 37 °C, 5 % CO 2 pro statickou kultivaci.
3. Ověření rychlosti organogeneze Patologické, genetické testování a imunohistochemická validace se provádí na vzorcích úspěšně kultivovaných organoidů, aby se potvrdila úspěšná konstrukce nádorových organoidů. Pokud je validace pro normální tkáň, vzorek selže a klinickému odběrovému lékaři je poskytnuta včasná zpětná vazba.
4. Ověření citlivosti organoidních léčiv Po úspěšné kultivaci byly organoidy rozděleny do následujících čtyř skupin: nulovací skupina (s výjimkou organoidů, obsahující pouze buněčné kultivační médium); Negativní kontrola (organoid + rozpouštědlo léčiva); Pozitivní kontrola (organoid+astrosporin); Skupina testování citlivosti na léčivo (organoid+testované léčivo); Každá skupina má tři jamky a vybraný lék pro testování citlivosti na léky je založen na doporučeních výzkumníků a diagnostických a léčebných pokynech Čínské společnosti klinické onkologie. Jako základ se používá klinická dávka a tři koncentrace vysoká, střední a nízká jsou nastaveny s 3násobným gradientem.
5. Testování životaschopnosti buněk Životaschopnost buněk byla měřena pomocí technologie detekce biofluorescenční citlivosti na léčivo (ATP-TCA). Komplex fluorescenčního pigmentu a fluorescenčního enzymu může podstoupit chemickou reakci za účasti ATP za vzniku fluorescence. Intenzita emitované fluorescence odráží obsah ATP, který zase odráží počet živých buněk. Technologie detekce biofluorescenční lékové citlivosti ATP využívá intracelulární obsah ATP jako koncový bod pro měření buněčné aktivity, který může měřit rozdíly mezi různými léky a stejným lékem v různých koncentracích.
6. Získání indikátorů citlivosti na léčivo Rychlost inhibice růstu podobného orgánu: Rychlost inhibice (IR) různých koncentrací léčiva na organoidech.

Hodnocení citlivosti na léčivo: Míra inhibice růstu léčiva na organoidech při koncentraci klinického účinku se používá jako indikátor citlivosti nádorových organoidů na léčiva. Míra inhibice nižší než 20 znamená, že organoidy jsou rezistentní vůči léku, míra inhibice 20–40 znamená mírnou citlivost, míra inhibice 40–70 znamená střední citlivost a míra inhibice vyšší než 70 znamená, že organoidy jsou vysoce citlivé. k droze.

Výše uvedenou technickou podporu poskytuje profesionální technická platforma třetí strany: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Doba pro vystavení výsledků lékové citlivosti je asi 2 týdny. Testování lékové citlivosti gastrointestinálních stromálních tumorů bude provedeno na základě výsledků průzkumu metodou 3D kultivace a dohodnuto s hlavním pracovištěm projektu.

3.4 Vypracování léčebných plánů Sestavte model nádorových organoidů založený na bioptických vzorcích a vypracujte plán léčby založený na výsledcích citlivosti na organoidní léčiva v kombinaci s diagnostickými a léčebnými pokyny/odborným konsensem a klinickými zkušenostmi výzkumníků.

Celkový léčebný plán pro všechny subjekty formulují výzkumníci subcentra na základě jejich stavu.

4. Postupy výzkumu Tato studie je rozdělena do čtyř částí: období screeningu, období plánování, období pozorování léčby a období sledování progrese.

5. Hodnocení účinnosti Po léčbě zhodnoťte a porovnejte nádory stejné kategorie. 5.1Ukazatele hodnocení účinnosti

• Porovnejte rozdíly mezi výsledky citlivosti na organoidy a doporučenými léčebnými plány založenými na pokynech/konsensu; ② Změny v cílových lézích ve srovnání s výchozí hodnotou po 3 léčebných cyklech: CT hrudníku a břicha nebo MRI nebo PET-CT;

  • Míra opakování; Na základě informací o sledování pacienta; ④ Střední doba přežití bez progrese a střední doba přežití pacientů: v kombinaci s informacemi o cyklu každého nádoru během sledování pacienta.

5.2 Kritéria pro stanovení účinnosti

Účinnost se hodnotí podle kritérií Světové zdravotnické organizace (WHO) pro solidní nádory:

• Kompletní odpověď (CR): Všechny cílové léze zmizí a hodnoty na krátké ose všech patologických lymfatických uzlin jsou menší než 10 mm;

  • Částečná odezva (PR): odkazuje na součet kritického poloměru s minimálním snížením o 30 % v součtu všech poloměrů cílové léze; ③ Stabilní onemocnění (SD): odkazuje na minimální hodnotu celkových pozorovaných cílových lézí, které nesplňují kritéria progrese a také nesplňují kritéria remise; ④ Progresivní onemocnění (PD): Minimální hodnota celkových pozorovaných cílových lézí, minimální nárůst o 20 % v celkovém poloměru všech cílových lézí a absolutní hodnota celkového nárůstu v poloměru cílových lézí > 5 mm. Výpočet: Efektivní míra po léčbě = (CR+PR)/celkový počet případů x 100,0 %; Míra objektivní odpovědi (OR) zahrnuje CR+PR potvrzenou s odstupem alespoň 4 týdnů; Míra kontroly onemocnění (DCR) zahrnuje potvrzenou remisi tumoru (CR+PR) a pacienty, kteří byli zaznamenáni jako SD po alespoň 4 týdnech užívání drogy, tzn. ČR+PR+SD.

    • Recidiva tumoru: Při zobrazovacím vyšetření po léčbě bylo zjištěno, že tumor 6 měsíců po parciální remisi opět expandoval a byly zjištěny recidivy nových tumorů v jiných částech nebo vzdálených oblastech primární léze; Po 6 měsících kompletní remise byla zobrazovacím vyšetřením objevena recidiva tumoru (včetně lokální recidivy, regionální recidivy a vzdálené recidivy).