오가노이드 약물 감수성 검사와 위장관 종양의 정밀한 치료 사이의 상관관계에 관한 연구

이 시험은 단일군, 다기관, 공개 라벨, 전향적 임상 연구입니다.

1. 표본 크기 본 연구는 임상 탐색 연구이며 표본 크기를 추정하지 않습니다. 식도암, 위암, 대장암 각 16례, 위장관기질종양 20례 등 소화기 종양 환자 68명이 포함될 것으로 예상된다.

1.1참여센터 전국적으로 약 10~15개 연구센터가 참여하고 있다. 2.사례선정 2.1선정기준

선정되려면 다음 조건을 모두 충족해야 합니다.

1. 연령은 성별에 관계없이 18세부터 75세까지입니다.
2. 조직병리학/세포학으로 확인된 식도암, 위암, 대장암, 위장관기질종양 환자

3. 대상의 조건은 다음 조건 중 하나를 충족합니다.

   식도암: 임상 병기는 II기(cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) 또는 III기(cT3-4aN1-3MO)입니다. 위암: 임상 병기는 II기(cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) 또는 III기(cT3-4aN1-3MO)입니다. 대장암: 임상 병기는 II기(cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) 또는 III기(cT3-4aN1-3MO)입니다. 위장 간질 종양: 국소적으로 진행된 위험 분류가 있는 원발성 간질 종양(종양의 자연 파열, 종양 직경) >10cm, 유사분열 이미지>10/5mm) ²; 종양 직경>5cm 및 유사분열 수>5/5mm²; 5cm ≤ 종양 직경>2cm 및 유사분열 영상>5/5mm ² 위 원발성 아님; 10cm ≤ 종양 직경 >5cm 및 유사분열 영상 ≤ 5/5mm²(비원발성 위 간질 종양) 또는 재발성 전이성/절제 불가능한 위장 간질 종양.

4. 환자 또는 법적 대리인은 본 연구에 자발적으로 참여하고 2.2 제외 기준에 서명합니다.

다음 상황 중 하나는 본 임상시험에 포함될 수 없습니다.

1. 전신 염증성 질환 및/또는 응고 장애를 앓고 있는 경우
2. 심각한 간 및 신장 질환, 심혈관 질환, 호흡기 질환 또는 조절되지 않는 당뇨병이 있습니다.
3. 시스템의 다른 악성 종양으로 고통받습니다.
4. 연구 완료에 협조할 수 없는 정신 질환 환자
5. 잠재적인 화학요법 약물 또는 수술 금기사항에 대한 알려진 알레르기;
6. 상태가 호전되지 않거나 임종상태에 있는 환자
7. 오가노이드 배양 및 조직학적 분석을 위한 생검 수술을 통해 충분한 종양 조직을 얻을 수 없습니다.
8. 임신 또는 수유 중이거나 향후 6개월 이내에 출산 계획을 세울 계획인 경우
9. 건강 상태가 좋지 않거나 KPS 점수가 70점 미만이거나 ECOG 점수가 3점 이상인 경우
10. 4주 이내에 다른 항암제 치료, 생물학적 치료, 방사선치료, 면역억제치료를 받은 경우 3. 연구 방법 3.1 종양 장기 샘플 수집 신선한 조직, 적절하고 충분한 샘플 크기, 간섭을 줄이기 위해 정상 조직을 완전히 제거하십시오.

내시경 생검: 총량이 0.5g 이상인 3개 이상의 조각을 겸자로 채취하여 암세포가 풍부한 부위를 채취합니다. 천자 생검: 총 길이 ≥ 3cm(각 조각은 1cm 이상, 총 3개 조각)로 암세포가 풍부한 부위를 수집합니다. 복수 천자/배액: 불순물을 방지하고 종양 세포의 존재를 보장하기 위해 총 부피가 250ml 이상입니다.

3.2 저온 유통 운송 수집된 종양 샘플은 24시간 동안 2~8℃의 얼음 위에 보관된 후 실험실로 전달되어야 합니다.

3.3 장기모델 약물 감수성 시험

1. 오가노이드 배양 I 세포 현탁액 얻기

   ① 종양세포현탁액 : 검체로부터 괴사조직, 지방조직, 섬유조직을 제거한 후 유효검체를 직경 1mm의 종양조직 단편으로 절단한 후 조직해리액을 이용하여 소화시킨다. 70-100μM의 멸균필터를 사용하여 소화된 조직을 여과하고, 여액을 5분간 원심분리한 후 상층액을 버린다. 적혈구 용해효소를 사용하여 현탁액의 적혈구를 용해시키고 원심분리한 후 PBS를 사용하여 침전물을 현탁시킵니다.

   • 악성 유체 세포 현탁액: 70-100 μM 멸균 필터를 사용하여 악성 유체를 여과하고 고체 현탁액을 제거한 후 원심분리하고 PBS를 사용하여 침전물을 현탁시킵니다.

   II 세포 생존율 검증: 트리판 블루 염색법을 사용하여 세포 생존율을 관찰하고 살아있는 세포의 비율이 80% 이상인지 확인합니다.

2. 오가노이드 확립 미리 준비된 배양 플레이트에 종양 생세포의 혼합 매트릭스 젤을 고르게 펴고 적합한 세포 배양 배지를 첨가한 후 37℃, 5% CO 2 인큐베이터에 넣어 정치 배양합니다.
3. 기관형성 속도 검증 종양 유기체의 성공적인 구성을 확인하기 위해 성공적으로 배양된 유기체의 샘플에 대해 병리학적, 유전자 검사 및 면역조직화학적 검증을 수행합니다. 검증이 정상 조직에 대한 것이라면 검체는 실패하고 임상 검체 의사에게 적시에 피드백이 제공됩니다.
4. 오가노이드 약물의 민감성 검증 성공적인 배양 후, 오가노이드는 다음과 같은 4개 그룹으로 나뉘었습니다: 제로화 그룹(오가노이드 제외, 세포 배양 배지만 포함); 음성 대조군(유기노이드+약물 용매); 양성 대조군(오가노이드+아스트로스포린); 약물감수성검사군(오가노이드+시험약물) 각 그룹에는 3개의 웰이 있으며, 약물 감수성 테스트를 위해 선택된 약물은 연구원의 권장 사항과 중국 임상 종양 학회의 진단 및 치료 지침을 기반으로 합니다. 임상용량을 기준으로 하며, 3배 기울기로 고, 중, 저 3가지 농도를 설정합니다.
5. 세포 생존율 테스트 세포 생존율은 ATP 생체형광 약물 민감도 검출 기술(ATP-TCA)을 사용하여 측정되었습니다. 형광 색소와 형광 효소의 복합체는 ATP의 참여로 화학 반응을 거쳐 형광을 생성할 수 있습니다. 방출되는 형광 강도는 ATP의 함량을 반영하며 이는 다시 살아있는 세포의 수를 반영합니다. ATP 생체형광 약물 민감도 검출 기술은 세포 내 ATP 함량을 세포 활성 측정의 종점으로 사용하며, 이를 통해 서로 다른 농도에서 서로 다른 약물과 동일한 약물 간의 차이를 측정할 수 있습니다.
6. 약물 민감성 지표 획득 장기 유사 성장 억제율: 오가노이드의 다양한 약물 농도에 대한 억제율(IR)입니다.

약물 민감성 평가: 임상 작용 농도에서 오가노이드에 대한 약물의 성장 억제율은 약물에 대한 종양 오가노이드의 민감도 지표로 사용됩니다. 억제율이 20 미만이면 오가노이드가 약물에 내성이 있음을 나타내고, 억제율이 20~40이면 약한 민감도를 나타내고, 억제율이 40~70이면 중간 정도의 민감도를 나타내며, 억제율이 70보다 크면 오가노이드가 매우 민감함을 나타냅니다. 약에.

위의 기술 지원은 제3자 전문 기술 플랫폼에서 제공됩니다: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; 약물감수성 결과가 나오는 데 걸리는 시간은 약 2주 정도이다. 위장관기질종양에 대한 약물 감수성 검사는 3차원 배양법 탐색 결과를 바탕으로 사업 주체와 협의해 진행된다.

3.4 약물 치료 계획 개발 생검 표본을 기반으로 종양 오가노이드 모델을 구축하고, 오가노이드 약물 민감도 결과를 바탕으로 진단 및 치료 지침/전문가 합의, 연구자의 임상 경험을 결합하여 치료 계획을 개발합니다.

모든 피험자에 대한 전반적인 치료 계획은 부센터 연구진이 환자의 상태에 따라 수립됩니다.

4. 연구 절차 본 연구는 스크리닝 기간, 계획 기간, 치료 관찰 기간, 진행 추적 기간의 네 부분으로 구분됩니다.

5. 유효성 평가 치료 후 동일한 카테고리의 종양을 평가하고 비교합니다. 5.1유효성 평가지표

• 가이드라인/합의에 따라 오가노이드 약물 민감도 결과와 권장 치료 계획 간의 차이를 비교합니다. ② 3회 약물 치료 주기 후 기준선과 비교한 표적 병변의 변화: 흉부 및 복부 CT 또는 MRI 또는 ​​PET-CT;

  • 재발률; 환자 추적 정보를 기반으로 합니다. ④ 환자의 무진행 생존기간 중앙값 및 생존기간 중앙값: 환자 추적 관찰 중 각 종양의 주기 정보와 결합.

5.2 유효성 결정 기준

효능은 고형 종양에 대한 세계보건기구(WHO) 기준에 따라 평가됩니다.

• 완전 반응(CR): 모든 표적 병변이 사라지고 모든 병리학적 림프절의 단축 값이 10mm 미만입니다.

  • 부분 반응(PR): 모든 표적 병변 반경의 합에서 최소 30% 감소와 함께 임계 반경의 합을 나타냅니다. ③ 안정질환(SD): 관찰된 전체 표적 병변의 최소값을 말하며, 진행 기준도 충족하지 않고 관해 기준도 충족하지 않는다. ④ 진행성 질환(PD): 관찰된 총 표적 병변의 최소값, 모든 표적 병변의 총 반경의 20% 증가의 최소값, 표적 병변의 총 반경 증가의 절대값>5mm. 계산: 치료 후 유효율=(CR+PR)/총 사례수 x 100.0%; 객관적 반응률(OR)에는 최소 4주 간격으로 확인된 CR+PR이 포함됩니다. 질병 통제율(DCR)에는 확인된 종양 관해(CR+PR)와 최소 4주간의 약물 사용 후 SD로 기록된 환자가 포함됩니다. CR+홍보+SD.

    • 종양재발 : 치료 후 영상검사에서 부분 관해 후 6개월이 지나서 종양이 다시 확대된 것으로 나타났으며, 원발병변의 다른 부위나 먼 부위에 새로운 종양이 재발하는 것이 발견되었다. 완전 관해 6개월 후 영상검사를 통해 종양의 재발(국소 재발, 국소 재발, 원격 재발 포함)이 발견되었습니다.