Recherche sur la corrélation entre les tests de sensibilité aux médicaments organoïdes et le traitement précis des tumeurs gastro-intestinales

Cet essai est une étude clinique prospective à un seul bras, multicentrique, ouverte.

1. Taille de l'échantillon Cette étude est une étude clinique exploratoire et n'estime pas la taille de l'échantillon. Il devrait inclure 68 patients atteints de tumeurs du tube digestif, dont 16 cas chacun de cancer de l'œsophage, de cancer gastrique et de cancer colorectal, et 20 cas de tumeurs stromales gastro-intestinales.

1.1 Centre de participation Environ 10 à 15 centres de recherche sont impliqués dans tout le pays. 2.Sélection des cas 2.1Critères de sélection

Pour être sélectionné, toutes les conditions suivantes doivent être remplies :

1. Tranche d'âge de 18 à 75 ans, quel que soit le sexe ;
2. Patients atteints d'un cancer de l'œsophage, d'un cancer gastrique, d'un cancer colorectal et de tumeurs stromales gastro-intestinales confirmées par histopathologie/cytologie ;

3. L'état du sujet répond à l'une des conditions suivantes :

   Cancer de l'œsophage : le stade clinique est le stade II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) ou le stade III (cT3-4aN1-3MO) ; Cancer gastrique : le stade clinique est le stade II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) ou le stade III (cT3-4aN1-3MO) ; Cancer colorectal : le stade clinique est de stade II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) ou de stade III (cT3-4aN1-3MO) Tumeurs stromales gastro-intestinales : Tumeurs stromales primitives avec classification de risque localement avancée (rupture spontanée de la tumeur ; diamètre de la tumeur >10 cm ; image mitotique >10/5 mm)² ; Diamètre de la tumeur>5cm et nombre de mitotiques>5/5mm² ; 5 cm ≤ diamètre de la tumeur > 2 cm et image mitotique > 5/5 mm² Primaire non gastrique ; 10 cm ≤ diamètre de la tumeur > 5 cm et image mitotique ≤ 5/5 mm² (tumeur stromale gastrique non primaire) ou tumeur stromale gastro-intestinale métastatique/non résécable récurrente.

4. Le patient ou son représentant légal participe volontairement à cette étude et signe 2.2 Critères d'exclusion

L’une des situations suivantes ne peut être incluse dans cet essai :

1. Souffrant de maladies inflammatoires systémiques et/ou de troubles de la coagulation ;
2. Il existe des maladies graves du foie et des reins, des maladies cardiovasculaires, des maladies respiratoires ou encore un diabète incontrôlé ;
3. Souffrant d'autres tumeurs malignes du système ;
4. Patients atteints de maladie mentale qui ne sont pas en mesure de coopérer pour mener à bien l'étude ;
5. Allergies connues à des médicaments de chimiothérapie potentiels ou à des contre-indications chirurgicales ;
6. Patients dont l’état ne peut être inversé ou qui sont en train de mourir ;
7. Incapable d'obtenir suffisamment de tissu tumoral par biopsie pour la culture organoïde et l'analyse histologique ;
8. Grossesse ou allaitement, ou projet d'avoir un plan de fertilité dans les 6 prochains mois ;
9. Mauvais état de santé, score KPS <70 points ou score ECOG ≥ 3 points ;
10. Recevoir tout autre traitement médicamenteux anticancéreux, thérapie biologique, radiothérapie ou thérapie immunosuppressive dans les 4 semaines ; 3.Méthode de recherche 3.1Collecte d'échantillons d'organes tumoraux Tissu frais, taille d'échantillon appropriée et suffisante, essayer d'éliminer complètement les tissus normaux pour réduire les interférences.

Biopsie endoscopique : prélever 3 morceaux ou plus avec une pince, d'une quantité totale ≥ 0,5 g, et collecter des zones riches en cellules cancéreuses ; Biopsie par ponction : d'une longueur totale ≥ 3 cm (chaque pièce mesure 1 cm ou plus, un total de 3 pièces), collectez des zones riches en cellules cancéreuses ; Ponction/drainage ascite : Volume total supérieur à 250 ml, pour éviter les impuretés et assurer la présence de cellules tumorales.

3.2 Transport sous chaîne du froid Les échantillons de tumeurs collectés doivent être conservés sur de la glace à 2-8 ℃ pendant 24 heures et livrés au laboratoire.

3.3 Tests de sensibilité aux médicaments sur des modèles d’organes

1. Culture organoïde I Obtention d'une suspension cellulaire

   ① Suspension de cellules tumorales : après avoir retiré le tissu nécrotique, le tissu adipeux et le tissu fibreux de l'échantillon, l'échantillon efficace est coupé en fragments de tissu tumoral d'un diamètre de 1 mm, puis les fragments de tissu sont digérés à l'aide d'une solution de dissociation tissulaire. Utilisez un filtre stérile de 70 à 100 µM pour filtrer les tissus digérés et le filtrat est centrifugé pendant 5 minutes avant de jeter le surnageant. Utilisez la lysase des globules rouges pour lyser les globules rouges dans la suspension, centrifugez et suspendez le précipité à l’aide de PBS.

   • Suspension cellulaire de liquide malin : un filtre stérile de 70 à 100 μM est utilisé pour filtrer le liquide malin, éliminer la suspension solide, centrifuger et suspendre le précipité à l'aide de PBS.

   II Vérification de la viabilité cellulaire : utilisez la méthode de coloration au bleu trypan pour observer la viabilité cellulaire et garantir que la proportion de cellules vivantes est supérieure à 80 %.

2. Établissement d'organoïdes Étalez uniformément le gel matriciel mixte de cellules vivantes tumorales sur la plaque de culture pré-préparée, ajoutez un milieu de culture cellulaire approprié, puis placez-le dans un incubateur à 37 ℃, 5 % de CO₂ pour une culture statique.
3. Vérification du taux d'organogenèse Des tests pathologiques, génétiques et une validation immunohistochimique sont effectués sur des échantillons d'organoïdes cultivés avec succès pour confirmer la construction réussie d'organoïdes tumoraux. Si la validation concerne des tissus normaux, l'échantillon échoue et un retour d'informations en temps opportun est fourni au médecin clinicien chargé de l'échantillonnage.
4. Vérification de la sensibilité des médicaments organoïdes Après une culture réussie, les organoïdes ont été divisés en quatre groupes suivants : groupe de mise à zéro (à l'exclusion des organoïdes, contenant uniquement un milieu de culture cellulaire) ; Contrôle négatif (organoïde + solvant médicamenteux) ; Contrôle positif (organoïde + astrosporine) ; Groupe de tests de sensibilité aux médicaments (organoïde + médicament testé) ; Chaque groupe dispose de trois puits et le médicament sélectionné pour les tests de sensibilité aux médicaments est basé sur les recommandations des chercheurs et les directives de diagnostic et de traitement de la Société chinoise d'oncologie clinique. La dose clinique est utilisée comme base et trois concentrations élevée, moyenne et faible sont définies avec un gradient de 3 fois.
5. Tests de viabilité cellulaire La viabilité cellulaire a été mesurée à l'aide de la technologie de détection de sensibilité aux médicaments par biofluorescence ATP (ATP-TCA). Le complexe de pigment fluorescent et d'enzyme fluorescente peut subir une réaction chimique avec la participation de l'ATP pour produire une fluorescence. L'intensité de la fluorescence émise reflète la teneur en ATP, qui à son tour reflète le nombre de cellules vivantes. La technologie de détection de la sensibilité aux médicaments par biofluorescence ATP utilise la teneur en ATP intracellulaire comme point final pour mesurer l'activité cellulaire, qui peut mesurer les différences entre différents médicaments et le même médicament à différentes concentrations.
6. Acquisition d'indicateurs de sensibilité aux médicaments Taux d'inhibition de la croissance d'un organe : taux d'inhibition (IR) de différentes concentrations de médicaments sur les organoïdes.

Évaluation de la sensibilité du médicament : le taux d'inhibition de la croissance du médicament sur les organoïdes à la concentration d'action clinique est utilisé comme indicateur de sensibilité des organoïdes tumoraux aux médicaments. Un taux d'inhibition inférieur à 20 indique que les organoïdes sont résistants au médicament, un taux d'inhibition de 20 à 40 indique une sensibilité légère, un taux d'inhibition de 40 à 70 indique une sensibilité modérée et un taux d'inhibition supérieur à 70 indique que les organoïdes sont très sensibles. à la drogue.

Le support technique ci-dessus est fourni par une plateforme technique professionnelle tierce : Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center ; Le délai de délivrance des résultats de sensibilité aux médicaments est d’environ 2 semaines. Les tests de sensibilité aux médicaments des tumeurs stromales gastro-intestinales seront effectués sur la base des résultats d'exploration de la méthode de culture 3D et convenus avec l'unité principale du projet.

3.4 Élaborer des plans de traitement médicamenteux Construire un modèle organoïde de tumeur basé sur des échantillons de biopsie et développer un plan de traitement basé sur les résultats de sensibilité aux médicaments organoïdes, combiné aux lignes directrices de diagnostic et de traitement/consensus d'experts et à l'expérience clinique des chercheurs.

Le plan de traitement global pour tous les sujets est formulé par les chercheurs du sous-centre en fonction de leur état.

4. Procédures de recherche Cette étude est divisée en quatre parties : période de dépistage, période de planification, période d'observation du traitement et période de suivi de la progression.

5. Évaluation de l'efficacité Après le traitement, évaluer et comparer les tumeurs de la même catégorie. 5.1Indicateurs d'évaluation de l'efficacité

• Comparer les différences entre les résultats de sensibilité aux médicaments organoïdes et les plans de traitement recommandés sur la base de lignes directrices/consensus ; ② Modifications des lésions cibles par rapport à la valeur initiale après 3 cycles de traitement médicamenteux : tomodensitométrie thoracique et abdominale ou IRM ou TEP-CT ;

  • Taux de récidive ; Basé sur les informations de suivi des patients ; ④ Temps de survie médian sans progression et temps de survie médian des patients : combinés aux informations sur le cycle de chaque tumeur lors du suivi des patients.

5.2 Critères de détermination de l'efficacité

L'efficacité est évaluée selon les critères de l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) pour les tumeurs solides :

• Réponse complète (CR) : toutes les lésions cibles disparaissent et les valeurs de l'axe court de tous les ganglions lymphatiques pathologiques sont inférieures à 10 mm ;

  • Réponse partielle (PR) : désigne la somme des rayons critiques, avec une réduction minimale de 30 % de la somme de tous les rayons de lésions cibles ; ③ Maladie stable (SD) : fait référence à la valeur minimale du total des lésions cibles observées, qui ne répond pas aux critères de progression et ne répond pas non plus aux critères de rémission ; ④ Maladie évolutive (PD) : la valeur minimale du total des lésions cibles observées, l'augmentation minimale de 20 % du rayon total de toutes les lésions cibles et la valeur absolue de l'augmentation totale du rayon des lésions cibles > 5 mm. Calcul : Taux effectif après traitement = (CR+PR)/nombre total de cas x 100,0 % ; Le taux de réponse objective (OR) comprend CR+PR confirmés à au moins 4 semaines d'intervalle ; Le taux de contrôle de la maladie (DCR) comprend la rémission tumorale confirmée (CR+PR) et les patients qui ont été enregistrés comme SD après au moins 4 semaines de consommation de médicament, c'est-à-dire CR+PR+SD.

    • Récidive de la tumeur : lors de l'examen d'imagerie après le traitement, il a été constaté que la tumeur s'étendait à nouveau 6 mois après une rémission partielle et que de nouvelles tumeurs récidivaient dans d'autres parties ou zones éloignées de la lésion primaire ; Après 6 mois de rémission complète, une récidive tumorale (y compris une récidive locale, une récidive régionale et une récidive à distance) a été découverte par examen d'imagerie.