Organoidisten lääkkeiden herkkyystestauksen ja maha-suolikanavan kasvaimien tarkan hoidon välistä korrelaatiota koskeva tutkimus

Tämä tutkimus on yksihaarainen, monikeskus, avoin, prospektiivinen kliininen tutkimus.

1. Otoskoko Tämä tutkimus on kliininen tutkiva tutkimus, eikä siinä arvioida otoskokoa. Sen odotetaan sisältävän 68 potilasta, joilla on ruoansulatuskanavan kasvaimia, mukaan lukien 16 ruokatorven syöpää, mahasyöpää ja paksusuolensyöpää sekä 20 ruoansulatuskanavan stroomakasvaimia.

1.1 Osallistumiskeskus Mukana on noin 10-15 tutkimuskeskusta valtakunnallisesti. 2. Tapauksen valinta 2.1 Valintakriteerit

Valinta edellyttää, että kaikki seuraavat ehdot täyttyvät:

1. Ikähaitari on 18-75 vuotta sukupuolesta riippumatta;
2. Potilaat, joilla on ruokatorven syöpä, mahasyöpä, paksusuolen syöpä ja maha-suolikanavan stroomakasvaimia, jotka on vahvistettu histopatologialla/sytologialla;

3. Kohteen kunto täyttää yhden seuraavista ehdoista:

   Ruokatorven syöpä: kliininen vaihe on vaihe II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) tai vaihe III (cT3-4aN1-3MO); Mahasyöpä: Kliininen vaihe on vaihe II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) tai vaihe III (cT3-4aN1-3MO); Kolorektaalisyöpä: kliininen asteikko on vaihe II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) tai vaihe III (cT3-4aN1-3MO) Ruoansulatuskanavan stroomakasvaimet: Primaariset stroomakasvaimet, joilla on paikallisesti edennyt riskiluokitus (kasvaimen spontaani repeämä; kasvaimen halkaisija > 10 cm; mitoottinen kuva > 10/5 mm) ²; Kasvaimen halkaisija > 5 cm ja mitoosiluku > 5/5 mm²; 5 cm ≤ kasvaimen halkaisija > 2 cm ja mitoottinen kuva > 5/5 mm ² Ei mahalaukun primaarinen; 10 cm ≤ kasvaimen halkaisija > 5 cm ja mitoottinen kuva ≤ 5/5 mm ² (ei-primaarinen mahalaukun stroomakasvain) tai uusiutuva metastaattinen/leikkaamaton maha-suolikanavan stroomakasvain.

4. Potilas tai laillinen edustaja osallistuu vapaaehtoisesti tähän tutkimukseen ja allekirjoittaa 2.2 poissulkemiskriteerit

Yhtä seuraavista tilanteista ei voida sisällyttää tähän kokeiluun:

1. Kärsivät systeemisistä tulehdussairauksista ja/tai hyytymishäiriöistä;
2. On olemassa vakavia maksa- ja munuaissairauksia, sydän- ja verisuonitauteja, hengityselinsairauksia tai hallitsematon diabetes;
3. Kärsivät muista järjestelmän pahanlaatuisista kasvaimista;
4. Mielenterveysongelmista kärsivät potilaat, jotka eivät pysty tekemään yhteistyötä tutkimuksen loppuun saattamisessa;
5. Tunnetut allergiat mahdollisille kemoterapialääkkeille tai kirurgiset vasta-aiheet;
6. Potilaat, joiden tilaa ei voida muuttaa tai jotka ovat kuolemassa;
7. Ei voida saada riittävästi kasvainkudosta biopsialeikkauksella organoidiviljelyä ja histologista analyysiä varten;
8. Raskaus tai imetys tai aiot tehdä hedelmällisyyssuunnitelman seuraavan 6 kuukauden aikana;
9. Huono terveydentila, KPS-pisteet <70 pistettä tai ECOG-pisteet ≥ 3 pistettä;
10. minkä tahansa muun syöpälääkehoidon, biologisen hoidon, sädehoidon tai immunosuppressiivisen hoidon saaminen 4 viikon sisällä; 3.Tutkimusmenetelmä 3.1Kasvain-elinten näytteiden kerääminen Tuore kudos, sopiva ja riittävä näytekoko, yritä poistaa normaali kudos kokonaan häiriöiden vähentämiseksi.

Endoskooppinen biopsia: Ota pihdeillä vähintään 3 palaa, joiden kokonaismäärä on ≥ 0,5 g, ja kerää runsaasti syöpäsoluja; Punktibiopsia: kokonaispituus ≥ 3 cm (jokainen kappale on 1 cm tai enemmän, yhteensä 3 kappaletta), kerää runsaasti syöpäsoluja; Askites-punktio/tyhjennys: Kokonaistilavuus yli 250 ml, jotta vältetään epäpuhtaudet ja varmistetaan kasvainsolujen läsnäolo.

3.2 Kylmäketjukuljetus Kerätyt kasvainnäytteet tulee säilyttää jäällä 2-8 ℃ 24 tuntia ja toimittaa laboratorioon.

3.3 Elinmallin lääkeherkkyystestaus

1. Organoidiviljelmä I Solususpension saaminen

   ① Kasvainsolususpensio: Kun nekroottinen kudos, rasvakudos ja kuitukudos on poistettu näytteestä, tehokas näyte leikataan kasvainkudosfragmenteiksi, joiden halkaisija on 1 mm, ja sitten kudosfragmentit pilkotaan käyttämällä kudosdissosiaatioliuosta. Käytä 70-100 μM:n steriiliä suodatinta, joka suodattaa pilkotun kudoksen, ja suodosta sentrifugoidaan 5 minuuttia ennen supernatantin hävittämistä. Käytä punasolulysaasia lyysaamaan punasolut suspensiossa, sentrifugoi ja suspendoi sakka käyttämällä PBS:ää.

   • Pahanlaatuinen nestesolususpensio: 70-100 μM steriiliä suodatinta käytetään pahanlaatuisen nesteen suodattamiseen, kiinteän suspension poistamiseen, sentrifugoimiseen ja sakka suspendoimiseen PBS:llä.

   II Solujen elinkelpoisuuden todentaminen: Käytä trypaanisinistä värjäysmenetelmää solujen elinkelpoisuuden tarkkailemiseksi ja varmista, että elävien solujen osuus on yli 80 %.

2. Organoidien muodostaminen Levitä elävien kasvainsolujen sekamatriisigeeli tasaisesti esivalmistetulle viljelylevylle, lisää sopiva soluviljelyväliaine ja aseta se sitten 37 ℃:n, 5 % CO 2 -inkubaattoriin staattista viljelyä varten.
3. Organogeneesinopeuden tarkistaminen Patologinen, geneettinen testaus ja immunohistokemiallinen validointi suoritetaan näytteille onnistuneesti viljellyistä organoideista, jotta varmistetaan kasvainorganoidien onnistunut rakentaminen. Jos validointi koskee normaalia kudosta, näyte epäonnistuu ja kliiniselle näytteenottolääkärille annetaan oikea-aikainen palaute.
4. Organoidilääkkeiden herkkyyden todentaminen Onnistuneen viljelyn jälkeen organoidit jaettiin seuraaviin neljään ryhmään: nollausryhmä (pois lukien organoidit, jotka sisältävät vain soluviljelyalustaa); Negatiivinen kontrolli (organoidi+lääkkeen liuotin); Positiivinen kontrolli (organoidi+astrosporiini); Lääkeherkkyystestausryhmä (organoidi+testilääke); Jokaisessa ryhmässä on kolme kuoppaa, ja lääkeherkkyystestaukseen valittu lääke perustuu tutkijoiden suosituksiin sekä Kiinan kliinisen onkologian seuran diagnoosi- ja hoitosuosituksiin. Kliinistä annosta käytetään perustana, ja kolme korkean, keskitason ja matalan pitoisuutta asetetaan kolminkertaisella gradientilla.
5. Solujen elinkelpoisuuden testaus Solujen elinkelpoisuus mitattiin käyttämällä ATP-biofluoresenssilääkeherkkyyden havaitsemistekniikkaa (ATP-TCA). Fluoresoivan pigmentin ja fluoresoivan entsyymin kompleksi voi käydä läpi kemiallisen reaktion ATP:n kanssa fluoresenssin tuottamiseksi. Säteilevä fluoresenssin intensiteetti heijastaa ATP:n pitoisuutta, joka puolestaan ​​heijastaa elävien solujen määrää. ATP-biofluoresenssilääkeherkkyyden tunnistustekniikka käyttää solunsisäistä ATP-pitoisuutta päätepisteenä solujen aktiivisuuden mittaamisessa, mikä voi mitata eroja eri lääkkeiden ja saman lääkkeen välillä eri pitoisuuksilla.
6. Lääkeherkkyysindikaattoreiden hankinta Elinmäinen kasvun estonopeus: Organoidien eri lääkepitoisuuksien estonopeus (IR).

Lääkeherkkyyden arviointi: Lääkkeen kasvun estonopeutta organoideilla kliinisen vaikutuksen pitoisuudessa käytetään kasvainorganoidien herkkyysindikaattorina lääkkeille. Estoaste alle 20 osoittaa, että organoidit ovat resistenttejä lääkkeelle, estoaste 20-40 tarkoittaa lievää herkkyyttä, estoaste 40-70 tarkoittaa kohtalaista herkkyyttä ja suurempi kuin 70 tarkoittaa, että organoidit ovat erittäin herkkiä lääkkeelle.

Yllä olevan teknisen tuen tarjoaa kolmannen osapuolen ammattimainen tekninen alusta: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Lääkeherkkyystulosten antamisen aika on noin 2 viikkoa. Ruoansulatuskanavan stroomakasvaimien lääkeherkkyystestaus tehdään 3D-viljelymenetelmän tutkimustulosten perusteella ja sovitaan hankkeen pääyksikön kanssa.

3.4 Lääkityssuunnitelmien kehittäminen Rakenna kasvaimen organoidimalli biopsianäytteiden perusteella ja kehitä hoitosuunnitelma organoidilääkkeiden herkkyystuloksiin yhdistettynä diagnostisiin ja hoitosuosituksiin/asiantuntijoiden konsensukseen sekä tutkijoiden kliiniseen kokemukseen.

Alakeskuksen tutkijat laativat yleisen hoitosuunnitelman kaikille koehenkilöille heidän kunnonsa perusteella.

4. Tutkimusmenettelyt Tämä tutkimus on jaettu neljään osaan: seulontajakso, suunnittelujakso, hoidon seurantajakso ja etenemisen seurantajakso.

5. Tehon arviointi Hoidon jälkeen arvioi ja vertaa saman luokan kasvaimia. 5.1Tehokkuuden arviointiindikaattorit

• Vertaa eroja organoidisten lääkeherkkyystulosten ja suositeltujen hoitosuunnitelmien välillä ohjeiden/konsensuksen perusteella; ② Muutokset kohdeleesioissa verrattuna lähtötilanteeseen 3 hoitojakson jälkeen: rintakehän ja vatsan TT tai MRI tai PET-CT;

  • Toistumisen määrä; Potilaan seurantatietojen perusteella; ④ Mediaani etenemisvapaa eloonjäämisaika ja mediaani eloonjäämisaika potilailla: yhdistettynä kunkin kasvaimen syklitietoihin potilaan seurannan aikana.

5.2 Tehon määrityskriteerit

Teho on arvioitu Maailman terveysjärjestön (WHO) kiinteitä kasvaimia koskevien kriteerien mukaisesti:

• Täydellinen vaste (CR): Kaikki kohdevauriot katoavat ja kaikkien patologisten imusolmukkeiden lyhyen akselin arvot ovat alle 10 mm;

  • Osittainen vaste (PR): viittaa kriittisen säteen summaan siten, että kaikkien kohdevauriosäteiden summa on vähintään 30 %; ③ Stabiili sairaus (SD): viittaa havaittujen kohdevaurioiden kokonaismäärän minimiarvoon, joka ei täytä etenemiskriteerejä eikä myöskään täytä remissiokriteerejä; ④ Progressiivinen sairaus (PD): Havaittujen kohdevaurioiden kokonaismäärän vähimmäisarvo, 20 %:n vähimmäislisäys kaikkien kohdeleesioiden kokonaissäteessä ja kohdevaurioiden säteen kokonaislisäyksen absoluuttinen arvo > 5 mm. Laskenta: Tehokas määrä hoidon jälkeen = (CR+PR)/tapausten kokonaismäärä x 100,0 %; Objektiivinen vasteprosentti (OR) sisältää CR+PR:n, joka on vahvistettu vähintään 4 viikon välein; Taudinhallintaprosentti (DCR) sisältää vahvistetun tuumorin remission (CR+PR) ja potilaat, jotka on rekisteröity SD:ksi vähintään 4 viikon huumekäytön jälkeen, ts. CR+PR+SD.

    • Kasvaimen uusiutuminen: Hoidon jälkeisen kuvantamistutkimuksen aikana havaittiin, että kasvain laajeni uudelleen 6 kuukautta osittaisen remission jälkeen, ja uusia kasvaimia havaittiin uusiutuvan primaarisen leesion muissa osissa tai kaukaisilla alueilla; 6 kuukauden täydellisen remission jälkeen kasvaimen uusiutuminen (mukaan lukien paikallinen uusiutuminen, alueellinen uusiutuminen ja etäinen uusiutuminen) havaittiin kuvantamistutkimuksella.