Investigación sobre la correlación entre las pruebas de sensibilidad a fármacos organoides y el tratamiento preciso de tumores gastrointestinales

Este ensayo es un estudio clínico prospectivo, abierto, multicéntrico y de un solo brazo.

1. Tamaño de la muestra Este estudio es un estudio clínico exploratorio y no estima el tamaño de la muestra. Se espera incluir a 68 pacientes con tumores del tracto digestivo, incluidos 16 casos de cáncer de esófago, cáncer gástrico y cáncer colorrectal, y 20 casos de tumores del estroma gastrointestinal.

1.1 Centro de participación Aproximadamente entre 10 y 15 centros de investigación participan en todo el país. 2.Selección de casos 2.1Criterios de selección

Para ser seleccionado, se deben cumplir todas las siguientes condiciones:

1. Rango de edad de 18 a 75 años, independientemente del sexo;
2. Pacientes con cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer colorrectal y tumores del estroma gastrointestinal confirmados por histopatología/citología;

3. La condición del sujeto cumple una de las siguientes condiciones:

   Cáncer de esófago: la estadificación clínica es la etapa II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) o la etapa III (cT3-4aN1-3MO); Cáncer gástrico: la estadificación clínica es la etapa II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) o la etapa III (cT3-4aN1-3MO); Cáncer colorrectal: la estadificación clínica es estadio II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) o estadio III (cT3-4aN1-3MO) Tumores del estroma gastrointestinal: tumores del estroma primario con clasificación de riesgo localmente avanzado (ruptura espontánea del tumor; diámetro del tumor >10cm; imagen mitótica >10/5mm)²; Diámetro tumoral >5cm y recuento de mitosis >5/5mm²; 5cm ≤ diámetro tumoral >2cm e imagen mitótica >5/5mm² Primario no gástrico; 10 cm ≤ diámetro del tumor> 5 cm e imagen mitótica ≤ 5/5 mm² (tumor del estroma gástrico no primario) o tumor del estroma gastrointestinal metastásico/irresecable recurrente.

4. El paciente o representante legal participa voluntariamente en este estudio y firma 2.2 Criterios de exclusión

No se puede incluir en este ensayo alguna de las siguientes situaciones:

1. Padecer enfermedades inflamatorias sistémicas y/o trastornos de la coagulación;
2. Existen enfermedades graves de hígado y riñón, enfermedades cardiovasculares, enfermedades respiratorias o diabetes no controlada;
3. Sufre de otros tumores malignos del sistema;
4. Pacientes con enfermedades mentales que no puedan cooperar para completar el estudio;
5. Alergias conocidas a posibles medicamentos de quimioterapia o contraindicaciones quirúrgicas;
6. Pacientes cuya condición no se puede revertir o en estado de agonía;
7. No se puede obtener suficiente tejido tumoral mediante cirugía de biopsia para cultivo de organoides y análisis histológico;
8. Embarazo o lactancia, o planificación de tener un plan de fertilidad dentro de los próximos 6 meses;
9. Mal estado de salud, puntuación KPS <70 puntos o puntuación ECOG ≥ 3 puntos;
10. Recibir cualquier otro tratamiento con medicamentos contra el cáncer, terapia biológica, radioterapia o terapia inmunosupresora dentro de las 4 semanas; 3.Método de investigación 3.1Recolección de muestras de órganos tumorales Tejido fresco, tamaño de muestra adecuado y suficiente, intente eliminar por completo el tejido normal para reducir la interferencia.

Biopsia endoscópica: tome 3 o más piezas con pinzas, con una cantidad total de ≥ 0,5 gy recolecte áreas ricas en células cancerosas; Biopsia por punción: con una longitud total de ≥ 3 cm (cada pieza mide 1 cm o más, un total de 3 piezas), recolecte áreas ricas en células cancerosas; Punción/drenaje de ascitis: Volumen total superior a 250ml, para evitar impurezas y asegurar la presencia de células tumorales.

3.2 Transporte en cadena de frío Las muestras de tumores recolectadas deben almacenarse en hielo a 2-8 ℃ durante 24 horas y entregarse al laboratorio.

3.3 Pruebas de sensibilidad a fármacos en modelos de órganos

1. Cultivo de organoides I Obtención de suspensión celular

   ① Suspensión de células tumorales: después de eliminar el tejido necrótico, el tejido adiposo y el tejido fibroso de la muestra, la muestra eficaz se corta en fragmentos de tejido tumoral con un diámetro de 1 mm y luego los fragmentos de tejido se digieren utilizando una solución de disociación de tejido. Utilice un filtro estéril de 70-100 μ M para filtrar el tejido digerido y el filtrado se centrifuga durante 5 minutos antes de desechar el sobrenadante. Utilice lisasa de glóbulos rojos para lisar los glóbulos rojos en la suspensión, centrifugue y suspenda el precipitado con PBS.

   • Suspensión de células de líquido maligno: se utiliza un filtro estéril de 70-100 μ M para filtrar el líquido maligno, eliminar la suspensión sólida, centrifugar y suspender el precipitado usando PBS.

   II Verificación de la viabilidad celular: utilice el método de tinción con azul tripano para observar la viabilidad celular y garantizar que la proporción de células vivas sea superior al 80%.

2. Establecimiento de organoides Extienda el gel de matriz mixta de células vivas tumorales de manera uniforme en la placa de cultivo preparada previamente, agregue un medio de cultivo celular adecuado y luego colóquelo en una incubadora de CO ₂ al 5% a 37 ℃ para cultivo estático.
3. Verificación de la tasa de organogénesis Se realizan pruebas patológicas, genéticas y validación inmunohistoquímica en muestras de organoides cultivados con éxito para confirmar la construcción exitosa de organoides tumorales. Si la validación es para tejido normal, la muestra falla y se proporciona información oportuna al médico clínico que toma la muestra.
4. Verificación de sensibilidad de los fármacos organoides Después del cultivo exitoso, los organoides se dividieron en los siguientes cuatro grupos: grupo de puesta a cero (excluidos los organoides, que solo contienen medio de cultivo celular); Control negativo (organoide+solvente del fármaco); Control positivo (organoide+astrosporina); Grupo de prueba de sensibilidad a los medicamentos (organoide + fármaco de prueba); Cada grupo tiene tres pocillos y el fármaco seleccionado para las pruebas de sensibilidad se basa en las recomendaciones de los investigadores y las directrices de diagnóstico y tratamiento de la Sociedad China de Oncología Clínica. La dosis clínica se utiliza como base y se establecen tres concentraciones: alta, media y baja con un gradiente de 3 veces.
5. Prueba de viabilidad celular La viabilidad celular se midió utilizando la tecnología de detección de sensibilidad a fármacos por biofluorescencia de ATP (ATP-TCA). El complejo de pigmento fluorescente y enzima fluorescente puede sufrir una reacción química con la participación de ATP para producir fluorescencia. La intensidad de la fluorescencia emitida refleja el contenido de ATP, que a su vez refleja el número de células vivas. La tecnología de detección de sensibilidad a fármacos por biofluorescencia de ATP utiliza el contenido de ATP intracelular como criterio de valoración para medir la actividad celular, que puede medir las diferencias entre diferentes fármacos y el mismo fármaco en diferentes concentraciones.
6. Adquisición de indicadores de sensibilidad a fármacos Tasa de inhibición del crecimiento similar a un órgano: La tasa de inhibición (IR) de diferentes concentraciones de fármacos en organoides.

Evaluación de la sensibilidad a los fármacos: la tasa de inhibición del crecimiento del fármaco en organoides en una concentración de acción clínica se utiliza como indicador de sensibilidad de los organoides tumorales a los fármacos. Una tasa de inhibición inferior a 20 indica que los organoides son resistentes al fármaco, una tasa de inhibición de 20 a 40 indica una sensibilidad leve, una tasa de inhibición de 40 a 70 indica una sensibilidad moderada y una tasa de inhibición superior a 70 indica que los organoides son muy sensibles. a la droga.

El soporte técnico anterior es proporcionado por una plataforma técnica profesional de terceros: Evaluación de medicamentos de biomasa de Shanghai/Centro de pruebas de productos sanitarios de Luzhou; El tiempo para emitir los resultados de sensibilidad a los medicamentos es de aproximadamente 2 semanas. Las pruebas de sensibilidad a los medicamentos de los tumores del estroma gastrointestinal se llevarán a cabo en función de los resultados de la exploración del método de cultivo 3D y se acordarán con la unidad principal del proyecto.

3.4 Desarrollo de planes de medicación Construir un modelo organoide tumoral basado en muestras de biopsia y desarrollar un plan de tratamiento basado en los resultados de sensibilidad a los fármacos organoides, combinado con pautas de diagnóstico y tratamiento/consenso de expertos y experiencia clínica de los investigadores.

El plan de tratamiento general para todos los sujetos lo formulan los investigadores del subcentro en función de su afección.

4.Procedimientos de investigación Este estudio se divide en cuatro partes: período de selección, período de planificación, período de observación del tratamiento y período de seguimiento de la progresión.

5. Evaluación de la eficacia Después del tratamiento, evaluar y comparar tumores de la misma categoría. 5.1Indicadores de evaluación de la eficacia

• Comparar las diferencias entre los resultados de sensibilidad a los fármacos organoides y los planes de tratamiento recomendados según las pautas/consenso; ② Cambios en las lesiones diana en comparación con el valor inicial después de 3 ciclos de tratamiento con fármacos: TC o RM de tórax y abdomen o PET-CT;

  • Tasa de recurrencia; Basado en información de seguimiento del paciente; ④ Tiempo medio de supervivencia libre de progresión y tiempo medio de supervivencia de los pacientes: combinado con la información del ciclo de cada tumor durante el seguimiento del paciente.

5.2 Criterios para determinar la eficacia

La eficacia se evalúa según los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para tumores sólidos:

• Respuesta completa (CR): todas las lesiones diana desaparecen y los valores del eje corto de todos los ganglios linfáticos patológicos son inferiores a 10 mm;

  • Respuesta parcial (RP): se refiere a la suma de los radios críticos, con una reducción mínima del 30% en la suma de todos los radios de la lesión diana; ③ Enfermedad estable (SD): se refiere al valor mínimo del total de lesiones diana observadas, que no cumple con los criterios de progresión y tampoco cumple con los criterios de remisión; ④ Enfermedad progresiva (EP): el valor mínimo del total de lesiones diana observadas, el aumento mínimo del 20% en el radio total de todas las lesiones diana y el valor absoluto del aumento total en el radio de las lesiones diana> 5 mm. Cálculo: Tasa efectiva después del tratamiento=(CR+PR)/número total de casos x 100,0%; La tasa de respuesta objetiva (OR) incluye CR+PR confirmada con al menos 4 semanas de diferencia; La tasa de control de la enfermedad (DCR) incluye la remisión tumoral confirmada (CR+PR) y los pacientes que han sido registrados como SD después de al menos 4 semanas de uso de drogas, es decir. CR+PR+SD.

    • Recurrencia del tumor: durante el examen por imágenes después del tratamiento, se encontró que el tumor se expandió nuevamente 6 meses después de la remisión parcial y se encontró que nuevos tumores reaparecían en otras partes o áreas distantes de la lesión primaria; Después de 6 meses de remisión completa, se descubrió la recurrencia del tumor (incluida la recurrencia local, la recurrencia regional y la recurrencia a distancia) mediante un examen de imágenes.