Forskning om sambandet mellan testning av organoid läkemedelskänslighet och exakt behandling av gastrointestinala tumörer

Denna studie är en enarms, multicenter, öppen, prospektiv klinisk studie.

1. Provstorlek Denna studie är en klinisk explorativ studie och uppskattar inte provstorleken. Det förväntas inkludera 68 patienter med tumörer i matsmältningskanalen, inklusive 16 fall vardera av matstrupscancer, magcancer och kolorektal cancer, och 20 fall av gastrointestinala stromala tumörer.

1.1Medverkanscentrum Cirka 10-15 forskningscentra är involverade i hela landet. 2.Val av fall 2.1Urvalskriterier

För att väljas måste alla följande villkor vara uppfyllda:

1. Åldersintervall från 18 till 75 år, oavsett kön;
2. Patienter med esofaguscancer, magcancer, kolorektal cancer och gastrointestinala stromala tumörer bekräftade av histopatologi/cytologi;

3. Försökspersonens tillstånd uppfyller ett av följande villkor:

   Matstrupscancer: klinisk stadieindelning är stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO); Magcancer: Klinisk stadieindelning är stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO); Kolorektal cancer: klinisk stadieindelning är stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO) Gastrointestinala stromala tumörer: Primära stromala tumörer med lokalt avancerad riskklassificering (spontan tumörruptur; tumördiameter >10 cm; mitotisk bild>10/5 mm) ²; Tumördiameter > 5 cm och mitotiskt antal > 5/5 mm ²; 5 cm ≤ tumördiameter>2 cm och mitotisk bild>5/5 mm ² Icke primär gastrisk; 10 cm ≤ tumördiameter > 5 cm och mitotisk bild ≤ 5/5 mm ² (icke-primär gastrisk stromal tumör) eller återkommande metastaserande/icke-opererbar gastrointestinal stromal tumör.

4. Patienten eller juridiskt ombud deltar frivilligt i denna studie och skriver under 2.2 Exklusionskriterier

En av följande situationer kan inte inkluderas i denna test:

1. Lider av systemiska inflammatoriska sjukdomar och/eller koagulationsrubbningar;
2. Det finns allvarliga lever- och njursjukdomar, hjärt-kärlsjukdomar, luftvägssjukdomar eller okontrollerad diabetes;
3. Lider av andra maligna tumörer i systemet;
4. Patienter med psykisk ohälsa som inte kan samarbeta för att genomföra studien;
5. Kända allergier mot potentiella kemoterapiläkemedel eller kirurgiska kontraindikationer;
6. Patienter vars tillstånd inte kan vändas eller i ett döende tillstånd;
7. Kan inte erhålla tillräcklig tumörvävnad genom biopsikirurgi för organoidodling och histologisk analys;
8. Graviditet eller amning, eller planerar att ha en fertilitetsplan inom de närmaste 6 månaderna;
9. Dåligt hälsotillstånd, KPS-poäng <70 poäng eller ECOG-poäng ≥ 3 poäng;
10. Får någon annan läkemedelsbehandling mot cancer, biologisk terapi, strålbehandling eller immunsuppressiv terapi inom 4 veckor; 3. Forskningsmetod 3.1 Insamling av tumörorganprov Färsk vävnad, lämplig och tillräcklig provstorlek, försök att helt avlägsna normal vävnad för att minska interferensen.

Endoskopisk biopsi: Ta 3 eller fler bitar med pincett, med en total mängd på ≥ 0,5 g, och samla rika områden av cancerceller; Punkteringsbiopsi: med en total längd på ≥ 3 cm (varje bit är 1 cm eller mer, totalt 3 stycken), samla in rika områden av cancerceller; Ascites punktering/dränering: Total volym över 250ml, för att undvika orenheter och säkerställa närvaron av tumörceller.

3.2 Kylkedjetransport De insamlade tumörproverna ska förvaras på is vid 2-8 ℃ i 24 timmar och levereras till laboratoriet.

3.3 Läkemedelskänslighetstestning av organmodeller

1. Organoid kultur I Erhållande av cellsuspension

   ① Tumörcellsuspension: Efter avlägsnande av nekrotisk vävnad, fettvävnad och fibrös vävnad från provet skärs det effektiva provet i tumörvävnadsfragment med en diameter på 1 mm, och sedan smälts vävnadsfragmenten med vävnadsdissociationslösning. Använd 70-100 μM:s sterila filter filtrerar den smälta vävnaden, och filtratet centrifugeras i 5 minuter innan supernatanten kasseras. Använd lysas av röda blodkroppar för att lysera de röda blodkropparna i suspensionen, centrifugera och suspendera fällningen med PBS.

   • Cellsuspension med maligna vätskor: med 70-100 μM sterilfilter används för att filtrera malign vätska, avlägsna fast suspension, centrifugera och suspendera fällningen med PBS.

   II Verifiering av cellviabilitet: Använd trypanblåttfärgningsmetod för att observera cellviabilitet och se till att andelen levande celler är större än 80 %.

2. Etablering av organoider Sprid den blandade matrisgelen av levande tumörceller jämnt på den förberedda odlingsplattan, tillsätt lämpligt cellodlingsmedium och placera den sedan i en 37 ℃, 5 % CO ₂-inkubator för statisk odling.
3. Verifiering av organogeneshastighet Patologisk, genetisk testning och immunhistokemisk validering utförs på prover av framgångsrikt odlade organoider för att bekräfta den framgångsrika konstruktionen av tumörorganoider. Om valideringen gäller normal vävnad, misslyckas provet och återkoppling i tid ges till den kliniska provtagningsläkaren.
4. Känslighetsverifiering av organoida läkemedel Efter framgångsrik odling delades organoiderna in i följande fyra grupper: nollställningsgrupp (exklusive organoider, som endast innehöll cellodlingsmedium); Negativ kontroll (organoid+läkemedelslösningsmedel); Positiv kontroll (organoid+astrosporin); Testgrupp för läkemedelskänslighet (organoid+testläkemedel); Varje grupp har tre brunnar, och det valda läkemedlet för testning av läkemedelskänslighet är baserat på rekommendationer från forskarna och riktlinjerna för diagnos och behandling av Chinese Society of Clinical Oncology. Den kliniska dosen används som bas, och tre koncentrationer av hög, medel och låg ställs in med en 3-faldig gradient.
5. Cellviabilitetstestning Cellviabiliteten mättes med användning av ATP-biofluorescensläkemedelskänslighetsdetektionsteknologi (ATP-TCA). Komplexet av fluorescerande pigment och fluorescerande enzym kan genomgå en kemisk reaktion med deltagande av ATP för att producera fluorescens. Den emitterade fluorescensintensiteten återspeglar innehållet av ATP, vilket i sin tur återspeglar antalet levande celler. ATP biofluorescensläkemedelskänslighetsdetektionsteknologi använder intracellulärt ATP-innehåll som slutpunkt för att mäta cellaktivitet, vilket kan mäta skillnaderna mellan olika läkemedel och samma läkemedel vid olika koncentrationer.
6. Förvärv av läkemedelskänslighetsindikatorer Organliknande tillväxthämningshastighet: Hämningshastigheten (IR) av olika läkemedelskoncentrationer på organoider.

Läkemedelskänslighetsbedömning: Läkemedlets tillväxthämningshastighet på organoider vid klinisk verkningskoncentration används som en känslighetsindikator för tumörorganoider mot läkemedel. En hämningshastighet på mindre än 20 indikerar att organoider är resistenta mot läkemedlet, en inhiberingshastighet på 20-40 indikerar mild känslighet, en inhiberingshastighet på 40-70 indikerar måttlig känslighet och en hämningshastighet större än 70 indikerar att organoider är mycket känsliga. till drogen.

Ovanstående tekniska support tillhandahålls av en professionell teknisk plattform från tredje part: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Tiden för att utfärda läkemedelskänslighetsresultat är cirka 2 veckor. Läkemedelskänslighetstestningen av gastrointestinala stromala tumörer kommer att utföras baserat på prospekteringsresultaten från 3D-odlingsmetoden och överenskommits med huvudenheten i projektet.

3.4 Utveckla medicineringsplaner Konstruera en tumörorganoidmodell baserad på biopsiprover, och utveckla en behandlingsplan baserad på organoida läkemedelskänslighetsresultat, kombinerat med diagnostiska och behandlingsriktlinjer/expertkonsensus, och klinisk erfarenhet från forskare.

Den övergripande behandlingsplanen för alla ämnen formuleras av subcenterforskarna utifrån deras tillstånd.

4. Forskningsprocedurer Denna studie är uppdelad i fyra delar: screeningperiod, planeringsperiod, behandlingsobservationsperiod och progressionsuppföljningsperiod.

5. Effektutvärdering Efter behandling, utvärdera och jämför tumörer av samma kategori. 5.1 Indikatorer för effektivitetsutvärdering

• Jämför skillnaderna mellan resultaten av organoid läkemedelskänslighet och de rekommenderade behandlingsplanerna baserat på riktlinjer/konsensus; ② Förändringar i målskador jämfört med baslinjen efter 3 behandlingscykler: CT av bröstet och buken eller MRT eller PET-CT;

  • Återfallsfrekvens; Baserat på patientuppföljningsinformation; ④ Medianprogressionsfri överlevnadstid och medianöverlevnadstid för patienter: kombinerat med cykelinformationen för varje tumör under patientuppföljning.

5.2 Kriterier för att bestämma effektivitet

Effekten utvärderas enligt Världshälsoorganisationens (WHO) kriterier för solida tumörer:

• Fullständigt svar (CR): Alla målskador försvinner, och kortaxelvärdena för alla patologiska lymfkörtlar är mindre än 10 mm;

  • Partiell respons (PR): hänvisar till summan av den kritiska radien, med en minsta minskning på 30 % av summan av alla mållesionsradier; ③ Stabil sjukdom (SD): hänvisar till minimivärdet för de totala observerade målskadorna, som inte uppfyller progressionskriterierna och inte heller uppfyller remissionskriterierna; ④ Progressiv sjukdom (PD): Minimivärdet för de totala observerade målskadorna, den minsta ökningen på 20 % av den totala radien för alla målskador och det absoluta värdet av den totala ökningen av radien för målskadorna >5 mm. Beräkning: Effektiv frekvens efter behandling=(CR+PR)/totalt antal fall x 100,0%; Den objektiva svarsfrekvensen (OR) inkluderar CR+PR bekräftad med minst 4 veckors mellanrum; Sjukdomskontrollfrekvensen (DCR) inkluderar bekräftad tumörremission (CR+PR) och patienter som har registrerats som SD efter minst 4 veckors läkemedelsanvändning, d.v.s. CR+PR+SD.

    • Tumörrecidiv: Vid bildundersökning efter behandling fann man att tumören expanderade igen 6 månader efter partiell remission, och nya tumörer visade sig återkomma i andra delar eller avlägsna områden av den primära lesionen; Efter 6 månaders fullständig remission upptäcktes tumörrecidiv (inklusive lokalt recidiv, regionalt recidiv och avlägsna recidiv) genom bildundersökning.