Ricerca sulla correlazione tra test di sensibilità ai farmaci organoidi e trattamento preciso dei tumori gastrointestinali

Questo studio è uno studio clinico prospettico, multicentrico, in aperto e a braccio singolo.

1. Dimensione del campione Questo studio è uno studio clinico esplorativo e non stima la dimensione del campione. Si prevede che includerà 68 pazienti con tumori del tratto digestivo, inclusi 16 casi ciascuno di cancro esofageo, cancro gastrico e cancro del colon-retto e 20 casi di tumori stromali gastrointestinali.

1.1Centro di Partecipazione Sono coinvolti circa 10-15 centri di ricerca a livello nazionale. 2.Selezione dei casi 2.1Criteri di selezione

Per essere selezionati devono essere soddisfatte tutte le seguenti condizioni:

1. Fascia di età dai 18 ai 75 anni, senza distinzione di sesso;
2. Pazienti con cancro esofageo, cancro gastrico, cancro del colon-retto e tumori stromali gastrointestinali confermati da istopatologia/citologia;

3. La condizione del soggetto soddisfa una delle seguenti condizioni:

   Cancro esofageo: la stadiazione clinica è stadio II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) o stadio III (cT3-4aN1-3MO); Cancro gastrico: la stadiazione clinica è lo stadio II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) o lo stadio III (cT3-4aN1-3MO); Cancro del colon-retto: la stadiazione clinica è stadio II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) o stadio III (cT3-4aN1-3MO) Tumori stromali gastrointestinali: tumori stromali primari con classificazione di rischio localmente avanzata (rottura spontanea del tumore; diametro del tumore >10 cm; immagine mitotica >10/5 mm) ²; Diametro del tumore>5 cm e conta mitotica>5/5mm²; 5 cm ≤ diametro del tumore> 2 cm e immagine mitotica> 5/5 mm ² Primitivo non gastrico; 10 cm ≤ diametro del tumore> 5 cm e immagine mitotica ≤ 5/5 mm ² (tumore stromale gastrico non primario) o tumore stromale gastrointestinale metastatico/non resecabile ricorrente.

4. Il paziente o il rappresentante legale partecipa volontariamente a questo studio e firma 2.2 Criteri di esclusione

Una delle seguenti situazioni non può essere inclusa in questa sperimentazione:

1. Soffre di malattie infiammatorie sistemiche e/o disturbi della coagulazione;
2. Esistono malattie gravi del fegato e dei reni, malattie cardiovascolari, malattie respiratorie o diabete non controllato;
3. Soffrendo di altri tumori maligni del sistema;
4. Pazienti con malattie mentali che non sono in grado di collaborare al completamento dello studio;
5. Allergie note a potenziali farmaci chemioterapici o controindicazioni chirurgiche;
6. Pazienti la cui condizione non può essere invertita o in uno stato di morte;
7. Impossibile ottenere tessuto tumorale sufficiente mediante intervento chirurgico di biopsia per la coltura di organoidi e l'analisi istologica;
8. Gravidanza o allattamento o pianificazione di un piano di fertilità entro i prossimi 6 mesi;
9. Cattivo stato di salute, punteggio KPS <70 punti o punteggio ECOG ≥ 3 punti;
10. Ricevere qualsiasi altro trattamento farmacologico antitumorale, terapia biologica, radioterapia o terapia immunosoppressiva entro 4 settimane; 3. Metodo di ricerca 3.1 Raccolta di campioni di organi tumorali Tessuto fresco, campione di dimensioni adeguate e sufficienti, cercare di rimuovere completamente il tessuto normale per ridurre l'interferenza.

Biopsia endoscopica: prelevare 3 o più pezzi con una pinza, per una quantità totale ≥ 0,5 g, e raccogliere aree ricche di cellule tumorali; Biopsia con puntura: con una lunghezza totale ≥ 3 cm (ogni pezzo è 1 cm o più, per un totale di 3 pezzi), raccogliere aree ricche di cellule tumorali; Puntura/drenaggio dell'ascite: volume totale superiore a 250 ml, per evitare impurità e garantire la presenza di cellule tumorali.

3.2 Trasporto nella catena del freddo I campioni tumorali raccolti devono essere conservati in ghiaccio a 2-8 ℃ per 24 ore e consegnati al laboratorio.

3.3 Test di sensibilità ai farmaci su modelli d'organo

1. Coltura organoide I Ottenimento della sospensione cellulare

   ① Sospensione di cellule tumorali: dopo aver rimosso il tessuto necrotico, il tessuto adiposo e il tessuto fibroso dal campione, il campione efficace viene tagliato in frammenti di tessuto tumorale con un diametro di 1 mm, quindi i frammenti di tessuto vengono digeriti utilizzando una soluzione di dissociazione tissutale. Utilizzare un filtro sterile da 70-100 μ M per filtrare il tessuto digerito e il filtrato viene centrifugato per 5 minuti prima di eliminare il surnatante. Utilizzare la lisasi dei globuli rossi per lisare i globuli rossi nella sospensione, centrifugare e sospendere il precipitato utilizzando PBS.

   • Sospensione cellulare del fluido maligno: utilizzando un filtro sterile da 70-100 μ M viene utilizzato per filtrare il fluido maligno, rimuovere la sospensione solida, centrifugare e sospendere il precipitato utilizzando PBS.

   II Verifica della vitalità cellulare: utilizzare il metodo di colorazione con trypan blue per osservare la vitalità cellulare e garantire che la percentuale di cellule vive sia superiore all'80%.

2. Stabilimento di organoidi Distribuire uniformemente il gel di matrice mista di cellule vive tumorali sulla piastra di coltura pre-preparata, aggiungere un terreno di coltura cellulare adatto e quindi posizionarlo in un incubatore a 37 ℃, 5% CO ₂ per la coltivazione statica.
3. Verifica del tasso di organogenesi Test patologici, genetici e immunoistochimici vengono eseguiti su campioni di organoidi coltivati ​​con successo per confermare la riuscita costruzione di organoidi tumorali. Se la validazione riguarda il tessuto normale, il campione non viene superato e al medico incaricato del campionamento clinico viene fornito un feedback tempestivo.
4. Verifica della sensibilità dei farmaci organoidi Dopo la coltivazione con successo, gli organoidi sono stati divisi nei seguenti quattro gruppi: gruppo di azzeramento (esclusi gli organoidi, contenente solo terreno di coltura cellulare); Controllo negativo (organoide+solvente del farmaco); Controllo positivo (organoide+astrosporina); Gruppo test di sensibilità ai farmaci (organoide+farmaco in esame); Ogni gruppo ha tre pozzetti e il farmaco selezionato per i test di sensibilità ai farmaci si basa sulle raccomandazioni dei ricercatori e sulle linee guida per la diagnosi e il trattamento della Società cinese di oncologia clinica. La dose clinica viene utilizzata come base e le tre concentrazioni alta, media e bassa vengono impostate con un gradiente triplo.
5. Test di vitalità cellulare La vitalità cellulare è stata misurata utilizzando la tecnologia di rilevamento della sensibilità ai farmaci con biofluorescenza ATP (ATP-TCA). Il complesso del pigmento fluorescente e dell'enzima fluorescente può subire una reazione chimica con la partecipazione dell'ATP per produrre fluorescenza. L'intensità della fluorescenza emessa riflette il contenuto di ATP, che a sua volta riflette il numero di cellule vive. La tecnologia di rilevamento della sensibilità ai farmaci con biofluorescenza ATP utilizza il contenuto di ATP intracellulare come punto finale per misurare l'attività cellulare, che può misurare le differenze tra diversi farmaci e lo stesso farmaco a diverse concentrazioni.
6. Acquisizione di indicatori di sensibilità ai farmaci Tasso di inibizione della crescita simile ad un organo: il tasso di inibizione (IR) di diverse concentrazioni di farmaco sugli organoidi.

Valutazione della sensibilità al farmaco: il tasso di inibizione della crescita del farmaco sugli organoidi alla concentrazione di azione clinica viene utilizzato come indicatore di sensibilità degli organoidi tumorali ai farmaci. Un tasso di inibizione inferiore a 20 indica che gli organoidi sono resistenti al farmaco, un tasso di inibizione di 20-40 indica una sensibilità lieve, un tasso di inibizione di 40-70 indica una sensibilità moderata e un tasso di inibizione superiore a 70 indica che gli organoidi sono altamente sensibili. al farmaco.

Il supporto tecnico di cui sopra è fornito da una piattaforma tecnica professionale di terze parti: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Il tempo per emettere i risultati della sensibilità ai farmaci è di circa 2 settimane. I test di sensibilità ai farmaci dei tumori stromali gastrointestinali saranno effettuati sulla base dei risultati esplorativi del metodo di coltura 3D e concordati con l'unità principale del progetto.

3.4 Sviluppo di piani terapeutici Costruire un modello di organoide tumorale basato su campioni bioptici e sviluppare un piano di trattamento basato sui risultati di sensibilità ai farmaci organoidi, combinato con linee guida diagnostiche e terapeutiche/consenso di esperti ed esperienza clinica dei ricercatori.

Il piano di trattamento complessivo per tutti i soggetti viene formulato dai ricercatori del sottocentro in base alla loro condizione.

4.Procedure di ricerca Questo studio è diviso in quattro parti: periodo di screening, periodo di pianificazione, periodo di osservazione del trattamento e periodo di follow-up della progressione.

5. Valutazione dell'efficacia Dopo il trattamento, valutare e confrontare tumori della stessa categoria. 5.1 Indicatori di valutazione dell'efficacia

• Confrontare le differenze tra i risultati della sensibilità ai farmaci organoidi e i piani di trattamento raccomandati basati su linee guida/consenso; ② Cambiamenti nelle lesioni target rispetto al basale dopo 3 cicli di trattamento con farmaci: TC torace e addominale o MRI o PET-CT;

  • Tasso di recidiva; Basato sulle informazioni di follow-up del paziente; ④ Tempo mediano di sopravvivenza libera da progressione e tempo mediano di sopravvivenza dei pazienti: combinato con le informazioni sul ciclo di ciascun tumore durante il follow-up del paziente.

5.2 Criteri per determinare l'efficacia

L'efficacia è valutata secondo i criteri dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) per i tumori solidi:

• Risposta completa (CR): tutte le lesioni target scompaiono e i valori dell'asse corto di tutti i linfonodi patologici sono inferiori a 10 mm;

  • Risposta parziale (PR): si riferisce alla somma del raggio critico, con una riduzione minima del 30% nella somma di tutti i raggi della lesione target; ③ Malattia stabile (SD): si riferisce al valore minimo delle lesioni target totali osservate, che non soddisfa i criteri di progressione e che non soddisfa i criteri di remissione; ④ Malattia progressiva (PD): il valore minimo delle lesioni target totali osservate, l'aumento minimo del 20% nel raggio totale di tutte le lesioni target e il valore assoluto dell'aumento totale nel raggio delle lesioni target>5 mm. Calcolo: tasso effettivo dopo il trattamento=(CR+PR)/numero totale di casi x 100,0%; Il tasso di risposta obiettiva (OR) include CR+PR confermate ad almeno 4 settimane di distanza; Il tasso di controllo della malattia (DCR) include la remissione confermata del tumore (CR+PR) e i pazienti che sono stati registrati come SD dopo almeno 4 settimane di uso del farmaco, vale a dire CR+PR+SD.

    • Recidiva del tumore: durante l'esame per immagini dopo il trattamento, si è riscontrato che il tumore si espandeva nuovamente 6 mesi dopo la remissione parziale e si riscontrava la recidiva di nuovi tumori in altre parti o aree distanti della lesione primaria; Dopo 6 mesi di remissione completa, la recidiva del tumore (inclusa recidiva locale, recidiva regionale e recidiva a distanza) è stata scoperta mediante esame di imaging.