Forskning på sammenhengen mellom organoid legemiddelsensitivitetstesting og presis behandling av gastrointestinale svulster

Denne studien er en enarms, multisenter, åpen prospektiv klinisk studie.

1. Prøvestørrelse Denne studien er en klinisk eksplorativ studie og estimerer ikke prøvestørrelse. Det forventes å inkludere 68 pasienter med svulster i fordøyelseskanalen, inkludert 16 tilfeller av hver av spiserørskreft, magekreft og tykktarmskreft, og 20 tilfeller av gastrointestinale stromale svulster.

1.1 Deltakelsessenter Omtrent 10-15 forskningssentre er involvert på landsbasis. 2.Utvalg av sak 2.1Utvalgskriterier

For å bli valgt må alle følgende betingelser være oppfylt:

1. Aldersspenning fra 18 til 75 år, uavhengig av kjønn;
2. Pasienter med esophageal cancer, gastrisk cancer, kolorektal cancer og gastrointestinale stromale svulster bekreftet av histopatologi/cytologi;

3. Emnets tilstand oppfyller ett av følgende vilkår:

   Spiserørskreft: klinisk stadieinndeling er stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO); Magekreft: Klinisk stadieinndeling er stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO); Kolorektal kreft: klinisk stadieinndeling er stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO) Gastrointestinale stromale svulster: Primære stromale svulster med lokalt avansert risikoklassifisering (spontan ruptur av svulsten; tumordiameter >10 cm; mitotisk bilde>10/5 mm) ²; Tumordiameter>5cm og mitotisk antall>5/5mm²; 5cm ≤ tumordiameter>2cm og mitotisk bilde>5/5mm ² Ikke primær gastrisk; 10 cm ≤ svulstdiameter > 5 cm og mitotisk bilde ≤ 5/5 mm ² (ikke primær gastrisk stromal svulst) eller tilbakevendende metastatisk/uopererbar gastrointestinal stromal svulst.

4. Pasienten eller juridisk representant deltar frivillig i denne studien og signerer 2.2 Eksklusjonskriterier

En av følgende situasjoner kan ikke inkluderes i denne prøveperioden:

1. Lider av systemiske inflammatoriske sykdommer og/eller koagulasjonsforstyrrelser;
2. Det er alvorlige lever- og nyresykdommer, hjerte- og karsykdommer, luftveissykdommer eller ukontrollert diabetes;
3. Lider av andre ondartede svulster i systemet;
4. Pasienter med psykiske lidelser som ikke er i stand til å samarbeide om å gjennomføre studien;
5. Kjente allergier mot potensielle kjemoterapimedisiner eller kirurgiske kontraindikasjoner;
6. Pasienter hvis tilstand ikke kan reverseres eller i en døende tilstand;
7. Ikke i stand til å oppnå tilstrekkelig tumorvev gjennom biopsikirurgi for organoid kultur og histologisk analyse;
8. Graviditet eller amming, eller planlegger å ha en fruktbarhetsplan innen de neste 6 månedene;
9. Dårlig helsestatus, KPS-score <70 poeng, eller ECOG-score ≥ 3 poeng;
10. motta annen kreftbehandling, biologisk terapi, strålebehandling eller immunsuppressiv terapi innen 4 uker; 3. Forskningsmetode 3.1 Innsamling av svulstorganprøver Ferskt vev, passende og tilstrekkelig prøvestørrelse, prøv å fjerne normalt vev fullstendig for å redusere interferens.

Endoskopisk biopsi: Ta 3 eller flere stykker med tang, med en total mengde på ≥ 0,5 g, og samle rike områder av kreftceller; Punkteringsbiopsi: med en total lengde på ≥ 3 cm (hver del er 1 cm eller mer, totalt 3 stykker), samle rike områder av kreftceller; Ascites punktering/drenering: Totalt volum over 250ml, for å unngå urenheter og sikre tilstedeværelse av tumorceller.

3.2 Transport av kjølekjeder De innsamlede tumorprøvene bør lagres på is ved 2-8 ℃ i 24 timer og leveres til laboratoriet.

3.3 Organmodell medikamentsensitivitetstesting

1. Organoid kultur I Oppnå cellesuspensjon

   ① Tumorcellesuspensjon: Etter fjerning av nekrotisk vev, fettvev og fibrøst vev fra prøven, kuttes den effektive prøven i tumorvevsfragmenter med en diameter på 1 mm, og deretter fordøyes vevsfragmentene ved bruk av vevsdissosiasjonsløsning. Bruk 70-100 μMs sterilfilter filtrerer det fordøyde vevet, og filtratet sentrifugeres i 5 minutter før supernatanten kastes. Bruk lysase av røde blodlegemer til å lysere de røde blodcellene i suspensjonen, sentrifuger og suspender bunnfallet ved bruk av PBS.

   • Ondartet væskecellesuspensjon: Bruk av 70-100 μM sterilt filter brukes til å filtrere ondartet væske, fjerne fast suspensjon, sentrifugere og suspendere bunnfallet ved bruk av PBS.

   II Verifisering av cellelevedyktighet: Bruk trypanblåttfargemetode for å observere cellelevedyktighet og sikre at andelen levende celler er større enn 80 %.

2. Etablering av organoider Spred den blandede matrisegelen av levende tumorceller jevnt på den forhåndstilberedte kulturplaten, tilsett egnet cellekulturmedium og plasser den deretter i en 37 ℃, 5 % CO ₂-inkubator for statisk dyrking.
3. Verifikasjon av organogenesehastighet Patologisk, genetisk testing og immunhistokjemisk validering utføres på prøver av vellykket dyrkede organoider for å bekrefte vellykket konstruksjon av tumororganoider. Hvis valideringen er for normalt vev, mislykkes prøven og rettidig tilbakemelding gis til den kliniske prøvetakingslegen.
4. Sensitivitetsverifisering av organoide legemidler Etter vellykket dyrking ble organoidene delt inn i følgende fire grupper: nullstillingsgruppe (unntatt organoider, som kun inneholdt cellekulturmedium); Negativ kontroll (organoid+medikamentløsningsmiddel); Positiv kontroll (organoid+astrosporin); Testgruppe for legemiddelsensitivitet (organoid+testmedikament); Hver gruppe har tre brønner, og det valgte stoffet for testing av legemiddelsensitivitet er basert på anbefalingene fra forskerne og retningslinjene for diagnose og behandling fra Chinese Society of Clinical Oncology. Den kliniske dosen legges til grunn, og tre konsentrasjoner av høy, middels og lav settes med 3 ganger gradient.
5. Cellelevedyktighetstesting Cellelevedyktighet ble målt ved bruk av ATP biofluorescens medikamentsensitivitetsdeteksjonsteknologi (ATP-TCA). Komplekset av fluorescerende pigment og fluorescerende enzym kan gjennomgå en kjemisk reaksjon med deltakelse av ATP for å produsere fluorescens. Fluorescensintensiteten som sendes ut reflekterer innholdet av ATP, som igjen reflekterer antall levende celler. ATP biofluorescens medikamentsensitivitetsdeteksjonsteknologi bruker intracellulært ATP-innhold som endepunkt for å måle celleaktivitet, som kan måle forskjellene mellom ulike medikamenter og det samme legemidlet ved forskjellige konsentrasjoner.
6. Anskaffelse av legemiddelsensitivitetsindikatorer Organlignende vekstinhiberingshastighet: Inhiberingshastigheten (IR) av ulike legemiddelkonsentrasjoner på organoider.

Legemiddelsensitivitetsvurdering: Legemidlets vekstinhiberingshastighet på organoider ved klinisk virkningskonsentrasjon brukes som en sensitivitetsindikator for tumororganoider overfor legemidler. En inhiberingshastighet på mindre enn 20 indikerer at organoider er resistente mot stoffet, en inhiberingsrate på 20-40 indikerer mild sensitivitet, en inhiberingsrate på 40-70 indikerer moderat sensitivitet, og en inhiberingsrate større enn 70 indikerer at organoider er svært sensitive. til stoffet.

Ovennevnte tekniske støtte leveres av en tredjeparts profesjonell teknisk plattform: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Tiden for å utstede resultater for medikamentfølsomhet er omtrent 2 uker. Legemiddelsensitivitetstesten av gastrointestinale stromale svulster vil bli utført basert på utforskningsresultatene fra 3D-kulturmetoden og avtalt med hovedenheten i prosjektet.

3.4 Utvikle medisineringsplaner Konstruere en tumororganoidmodell basert på biopsiprøver, og utvikle en behandlingsplan basert på organoidlegemiddelsensitivitetsresultater, kombinert med diagnostiske og behandlingsretningslinjer/ekspertkonsensus, og klinisk erfaring fra forskere.

Den overordnede behandlingsplanen for alle fag er formulert av undersenterets forskere basert på deres tilstand.

4. Forskningsprosedyrer Denne studien er delt inn i fire deler: screeningsperiode, planleggingsperiode, behandlingsobservasjonsperiode og progresjonsoppfølgingsperiode.

5. Effektevaluering Etter behandling, evaluer og sammenlign svulster i samme kategori. 5.1 Effektevalueringsindikatorer

• Sammenlign forskjellene mellom resultatene for organoid medikamentsensitivitet og de anbefalte behandlingsplanene basert på retningslinjer/konsensus; ② Endringer i mållesjoner sammenlignet med baseline etter 3 behandlingssykluser: bryst- og abdominal CT eller MR eller PET-CT;

  • Gjentakelsesfrekvens; Basert på pasientoppfølgingsinformasjon; ④ Median progresjonsfri overlevelsestid og median overlevelsestid for pasienter: kombinert med syklusinformasjonen til hver tumor under pasientoppfølging.

5.2 Kriterier for å bestemme effekt

Effekten er evaluert i henhold til Verdens helseorganisasjons (WHO) kriterier for solide svulster:

• Fullstendig respons (CR): Alle mållesjoner forsvinner, og kortakseverdiene for alle patologiske lymfeknuter er mindre enn 10 mm;

  • Delvis respons (PR): refererer til summen av kritisk radius, med en minimumsreduksjon på 30 % i summen av alle mållesjonsradier; ③ Stabil sykdom (SD): refererer til minimumsverdien av de totale observerte mållesjonene, som ikke oppfyller progresjonskriteriene og heller ikke oppfyller remisjonskriteriene; ④ Progressiv sykdom (PD): Minimumsverdien av de totale observerte mållesjonene, minimumsøkningen på 20 % i den totale radiusen for alle mållesjonene, og den absolutte verdien av den totale økningen i radiusen til mållesjonene > 5 mm. Beregning: Effektiv rate etter behandling=(CR+PR)/totalt antall tilfeller x 100,0 %; Den objektive responsraten (OR) inkluderer CR+PR bekreftet med minst 4 ukers mellomrom; Sykdomskontrollraten (DCR) inkluderer bekreftet tumorremisjon (CR+PR) og pasienter som er registrert som SD etter minst 4 ukers medikamentbruk, dvs. CR+PR+SD.

    • Residiv av svulster: Ved bildeundersøkelse etter behandling ble det funnet at svulsten utvidet seg igjen 6 måneder etter delvis remisjon, og nye svulster ble funnet å komme tilbake i andre deler eller fjerne områder av den primære lesjonen; Etter 6 måneder med fullstendig remisjon ble tumorresidiv (inkludert lokalt residiv, regionalt residiv og fjernt residiv) oppdaget gjennom bildeundersøkelse.