Forskning i sammenhængen mellem organoid lægemiddelfølsomhedstest og præcis behandling af gastrointestinale tumorer

Dette forsøg er et enkeltarms, multicenter, åbent, prospektivt klinisk studie.

1. Prøvestørrelse Denne undersøgelse er en klinisk eksplorativ undersøgelse og estimerer ikke prøvestørrelsen. Det forventes at omfatte 68 patienter med tumorer i fordøjelseskanalen, herunder 16 tilfælde af hver af esophageal cancer, gastrisk cancer og kolorektal cancer, og 20 tilfælde af gastrointestinale stromale tumorer.

1.1Deltagelsescenter Cirka 10-15 forskningscentre er involveret på landsplan. 2.Sagsudvælgelse 2.1Udvælgelseskriterier

For at blive valgt skal alle følgende betingelser være opfyldt:

1. Aldersspændet fra 18 til 75 år, uanset køn;
2. Patienter med esophageal cancer, gastrisk cancer, kolorektal cancer og gastrointestinale stromale tumorer bekræftet af histopatologi/cytologi;

3. Forsøgspersonens tilstand opfylder en af ​​følgende betingelser:

   Spiserørskræft: klinisk stadieinddeling er stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4NOMO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO); Mavekræft: Klinisk stadieinddeling er stadie II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadie III (cT3-4aN1-3MO); Kolorektal cancer: klinisk stadieinddeling er stadium II (cT1-2N1-3M0/cT3-4N0MO) eller stadium III (cT3-4aN1-3MO) Gastrointestinale stromale tumorer: Primære stromale tumorer med lokalt fremskreden risikoklassificering (spontan ruptur af tumoren; tumordiameter >10 cm; mitotisk billede>10/5 mm) ²; Tumordiameter > 5 cm og mitotisk antal > 5/5 mm ²; 5 cm ≤ tumordiameter>2 cm og mitotisk billede>5/5 mm ² Ikke primær gastrisk; 10 cm ≤ tumordiameter > 5 cm og mitotisk billede ≤ 5/5 mm ² (ikke primær gastrisk stromal tumor) eller tilbagevendende metastatisk/ikke-operabel gastrointestinal stromal tumor.

4. Patienten eller den juridiske repræsentant deltager frivilligt i denne undersøgelse og underskriver 2.2 Eksklusionskriterier

En af følgende situationer kan ikke inkluderes i dette forsøg:

1. Lider af systemiske inflammatoriske sygdomme og/eller koagulationsforstyrrelser;
2. Der er alvorlige lever- og nyresygdomme, hjerte-kar-sygdomme, luftvejssygdomme eller ukontrolleret diabetes;
3. Lider af andre ondartede tumorer i systemet;
4. Patienter med psykisk sygdom, som ikke er i stand til at samarbejde om at gennemføre undersøgelsen;
5. Kendte allergier over for potentielle kemoterapilægemidler eller kirurgiske kontraindikationer;
6. Patienter, hvis tilstand ikke kan vendes eller er i døende tilstand;
7. Ude af stand til at opnå tilstrækkeligt tumorvæv gennem biopsikirurgi til organoid kultur og histologisk analyse;
8. Graviditet eller amning, eller planlægger at have en fertilitetsplan inden for de næste 6 måneder;
9. Dårlig helbredstilstand, KPS-score<70 point eller ECOG-score ≥ 3 point;
10. Modtagelse af anden kræftbehandling, biologisk terapi, strålebehandling eller immunsuppressiv terapi inden for 4 uger; 3. Forskningsmetode 3.1 Indsamling af tumororganprøver Frisk væv, passende og tilstrækkelig prøvestørrelse, prøv fuldstændig at fjerne normalt væv for at reducere interferens.

Endoskopisk biopsi: Tag 3 eller flere stykker med pincet, med en samlet mængde på ≥ 0,5 g, og opsaml rige områder af kræftceller; Punkturbiopsi: med en samlet længde på ≥ 3 cm (hvert stykke er 1 cm eller mere, i alt 3 stykker), opsaml rige områder af kræftceller; Ascites punktering/drænage: Samlet volumen over 250 ml, for at undgå urenheder og sikre tilstedeværelsen af ​​tumorceller.

3.2 Koldekædetransport De indsamlede tumorprøver skal opbevares på is ved 2-8 ℃ i 24 timer og leveres til laboratoriet.

3.3 Organmodel lægemiddelfølsomhedstest

1. Organoid kultur I Opnåelse af cellesuspension

   ① Tumorcellesuspension: Efter fjernelse af nekrotisk væv, fedtvæv og fibrøst væv fra prøven skæres den effektive prøve i tumorvævsfragmenter med en diameter på 1 mm, og derefter fordøjes vævsfragmenterne ved hjælp af vævsdissociationsopløsning. Brug 70-100 μM's sterilfilter filtrerer det fordøjede væv, og filtratet centrifugeres i 5 minutter, før supernatanten kasseres. Brug lysase af røde blodlegemer til at lysere de røde blodlegemer i suspensionen, centrifuger og suspender bundfaldet ved hjælp af PBS.

   • Ondartet væskecellesuspension: Brug af 70-100 μM sterilt filter bruges til at filtrere malign væske, fjerne fast suspension, centrifugere og suspendere bundfaldet ved hjælp af PBS.

   II Verifikation af cellelevedygtighed: Brug trypanblåt farvningsmetode til at observere cellelevedygtighed og sikre, at andelen af ​​levende celler er større end 80 %.

2. Etablering af organoider Spred den blandede matrixgel af levende tumorceller jævnt på den præklarerede dyrkningsplade, tilsæt egnet cellekulturmedium, og anbring den derefter i en 37 ℃, 5 % CO ₂-inkubator til statisk dyrkning.
3. Verifikation af organogenesehastighed Patologisk, genetisk testning og immunhistokemisk validering udføres på prøver af vellykket dyrkede organoider for at bekræfte den vellykkede konstruktion af tumororganoider. Hvis valideringen er for normalt væv, fejler prøven, og rettidig feedback gives til den kliniske prøveudtagningslæge.
4. Sensitivitetsverifikation af organoide lægemidler Efter vellykket dyrkning blev organoiderne opdelt i følgende fire grupper: nulstillingsgruppe (eksklusive organoider, der kun indeholdt cellekulturmedium); Negativ kontrol (organoid + lægemiddelopløsningsmiddel); Positiv kontrol (organoid+astrosporin); Lægemiddelfølsomhedstestgruppe (organoid+testlægemiddel); Hver gruppe har tre brønde, og det udvalgte lægemiddel til lægemiddelfølsomhedstestning er baseret på anbefalingerne fra forskerne og retningslinjerne for diagnose og behandling fra Chinese Society of Clinical Oncology. Den kliniske dosis anvendes som grundlag, og tre koncentrationer af høj, medium og lav indstilles med en 3-fold gradient.
5. Cellelevedygtighedstestning Cellelevedygtighed blev målt under anvendelse af ATP-biofluorescens-lægemiddelfølsomhedsdetektionsteknologi (ATP-TCA). Komplekset af fluorescerende pigment og fluorescerende enzym kan gennemgå en kemisk reaktion med deltagelse af ATP for at producere fluorescens. Den udsendte fluorescensintensitet afspejler indholdet af ATP, som igen afspejler antallet af levende celler. ATP biofluorescens-lægemiddelfølsomhedsdetektionsteknologi bruger intracellulært ATP-indhold som endepunkt til måling af celleaktivitet, som kan måle forskellene mellem forskellige lægemidler og det samme lægemiddel i forskellige koncentrationer.
6. Erhvervelse af lægemiddelfølsomhedsindikatorer Organlignende væksthæmningshastighed: Hæmningshastigheden (IR) af forskellige lægemiddelkoncentrationer på organoider.

Lægemiddelfølsomhedsvurdering: Lægemidlets væksthæmningshastighed på organoider ved klinisk virkningskoncentration bruges som en følsomhedsindikator for tumororganoider over for lægemidler. En hæmningshastighed på mindre end 20 indikerer, at organoider er resistente over for lægemidlet, en hæmningshastighed på 20-40 indikerer mild følsomhed, en hæmningsrate på 40-70 indikerer moderat følsomhed, og en hæmningshastighed større end 70 indikerer, at organoider er meget følsomme. til stoffet.

Ovenstående tekniske support leveres af en tredjeparts professionel teknisk platform: Shanghai Biomass Drug Evaluation/Luzhou Health Product Testing Center; Tiden for udstedelse af lægemiddelfølsomhedsresultater er omkring 2 uger. Lægemiddelfølsomhedstesten af ​​gastrointestinale stromale tumorer vil blive udført baseret på udforskningsresultaterne af 3D-dyrkningsmetoden og aftalt med projektets hovedenhed.

3.4 Udvikling af medicinplaner Konstruer en tumororganoid model baseret på biopsiprøver, og udvikle en behandlingsplan baseret på organoid lægemiddelfølsomhedsresultater kombineret med diagnostiske og behandlingsretningslinjer/ekspertkonsensus og klinisk erfaring fra forskere.

Den overordnede behandlingsplan for alle forsøgspersoner formuleres af undercentrets forskere ud fra deres tilstand.

4. Forskningsprocedurer Denne undersøgelse er opdelt i fire dele: screeningsperiode, planlægningsperiode, behandlingsobservationsperiode og progressionsopfølgningsperiode.

5. Effektevaluering Efter behandling skal du evaluere og sammenligne tumorer af samme kategori. 5.1 Indikatorer for effektivitetsevaluering

• Sammenlign forskellene mellem resultaterne for organoid lægemiddelfølsomhed og de anbefalede behandlingsplaner baseret på retningslinjer/konsensus; ② Ændringer i mållæsioner sammenlignet med baseline efter 3 behandlingscyklusser: bryst- og abdominal CT eller MRI eller PET-CT;

  • Gentagelsesrate; Baseret på patientopfølgningsinformation; ④ Median progressionsfri overlevelsestid og median overlevelsestid for patienter: kombineret med cyklusinformationen for hver tumor under patientopfølgning.

5.2 Kriterier for bestemmelse af effektivitet

Effekten vurderes i henhold til Verdenssundhedsorganisationens (WHO) kriterier for solide tumorer:

• Komplet respons (CR): Alle mållæsioner forsvinder, og kortakseværdierne for alle patologiske lymfeknuder er mindre end 10 mm;

  • Delvis respons (PR): refererer til summen af ​​den kritiske radius med en minimumsreduktion på 30 % i summen af ​​alle mållæsionsradier; ③ Stabil sygdom (SD): refererer til minimumsværdien af ​​de samlede observerede mållæsioner, som ikke opfylder progressionskriterierne og heller ikke opfylder remissionskriterierne; ④ Progressiv sygdom (PD): Minimumsværdien af ​​de samlede observerede mållæsioner, den mindste stigning på 20 % i den totale radius af alle mållæsioner og den absolutte værdi af den samlede stigning i mållæsioners radius > 5 mm. Beregning: Effektiv rate efter behandling=(CR+PR)/samlet antal tilfælde x 100,0%; Den objektive responsrate (OR) inkluderer CR+PR bekræftet med mindst 4 ugers mellemrum; Sygdomskontrolfrekvensen (DCR) omfatter bekræftet tumorremission (CR+PR) og patienter, der er blevet registreret som SD efter mindst 4 ugers medicinbrug, dvs. CR+PR+SD.

    • Tumortilbagefald: Ved billeddiagnostisk undersøgelse efter behandling blev det fundet, at tumoren udvidede sig igen 6 måneder efter delvis remission, og nye tumorer viste sig at komme igen i andre dele eller fjerne områder af den primære læsion; Efter 6 måneders fuldstændig remission blev tumorrecidiv (herunder lokalt recidiv, regionalt recidiv og fjernt recidiv) opdaget ved billeddiagnostisk undersøgelse.