ベルベリンサプリメント、スプリントインターバルトレーニング、および免疫機能に関する研究

アクティブコンパレータ：ベルベリン単独群 (BO)

BOの参加者は、市販のベルベリンサプリメント（500mg、1日3回食事と共に）を、同一のビーガンカプセルに保存された状態で2週間摂取し、日常の活動と食事を維持するように指示されます。

ダイエットサプリメント：ベルベリン

食事とともに1日3回、500mgの市販のベルベリンサプリメントを摂取し、総摂取量は1500mg/日となります。

他の名前：

• ベルベリン塩酸塩

プラセボコンパレーター：プラセボのみ群 (PO)

POの参加者は、同一のビーガンカプセルに保存されたプラセボカプセル（米の粉、1日3回食事とともに）を2週間摂取し、日常の活動と食事を維持するよう指示されます。

他の：プラセボ

食事とともに1日3カプセルの用量で米粉からなるプラセボカプセルを服用する。

アクティブコンパレータ：スプリントインターバルトレーニング + ベルベリン群 (SB)

SBの参加者は、同一のビーガンカプセルに保存された市販のベルベリンサプリメント（500mg、1日3回、食事と共に）を摂取し、2週間にわたり6回のスプリントインターバルトレーニングセッションを受ける。

ダイエットサプリメント：ベルベリン

食事とともに1日3回、500mgの市販のベルベリンサプリメントを摂取し、総摂取量は1500mg/日となります。

他の名前：

• ベルベリン塩酸塩

他の：スプリントインターバルトレーニング

2週間の介入期間中、6回のセッションにわたり、自転車エルゴメーター上で、最大努力の30秒間スプリントを複数セット実施し、各セット間には4分間の休息／アクティブリカバリーを挟みます。 各セットの抵抗は、参加者の体重の7.5%で計算されます。 各セッションのセット数は以下の通りです: (1) 4セット, (2) 5セット, (3) 6セット, (4) 6セット, (5) 7セット, (6) 4セット。

他の名前：

• 座る

プラセボコンパレーター：スプリントインターバルトレーニング＋プラセボ群 (SP)

SPの参加者は、同一のビーガンカプセルに保存されたプラセボカプセル（米の粉、1日3回食事とともに摂取）を摂取し、2週間にわたり6回のスプリントインターバルトレーニングセッションを受講します。

他の：プラセボ

食事とともに1日3カプセルの用量で米粉からなるプラセボカプセルを服用する。

他の：スプリントインターバルトレーニング

2週間の介入期間中、6回のセッションにわたり、自転車エルゴメーター上で、最大努力の30秒間スプリントを複数セット実施し、各セット間には4分間の休息／アクティブリカバリーを挟みます。 各セットの抵抗は、参加者の体重の7.5%で計算されます。 各セッションのセット数は以下の通りです: (1) 4セット, (2) 5セット, (3) 6セット, (4) 6セット, (5) 7セット, (6) 4セット。

他の名前：

• 座る

単球数

全血単一細胞懸濁液200μLは、1X赤血球溶解緩衝液（BioLegend、サンディエゴCA）による赤血球溶解とFc-Blocker（BioLegend、サンディエゴCA）によるFc受容体のブロッキング後、CD14（抗ヒトCD14-FITC）およびCD16（抗ヒトCD16-APC）（BioLegend、サンディエゴCA）で染色されます。 調製されたサンプルは、固定および透過処理後、Attune NxTフローサイトメーター（Thermo Fisher Scientific、ウォルサム、MA）で実行されます。

単球による細胞内IL-6産生

細胞100 µLを12 x 75 mmチューブに分注し、Cyto-Fast™ Fix/Perm Solution（BioLegend、サンディエゴCA）150 µLを加え、室温で20分間インキュベートします。 次に、1X Cyto-Fast™ Perm Wash Solution（BioLegend、サンディエゴCA）1 mLを加え、350xgで5分間遠心し、上清を除去します。この操作を2回繰り返します。 次に、最適濃度に調整したPE標識抗ヒトIL-6抗体（BioLegend、サンディエゴCA）を1X Cyto-Fast™ Perm Washで100 µLのマスターミックスとして調製し、細胞を染色します。その後、暗所で室温で20分間インキュベートします。 次に、1X Cyto-Fast™ Perm Wash 1 mLで細胞を洗浄し、350xgで5分間遠心します。 上清を除去し、Cell Staining Buffer（BioLegend、サンディエゴCA）1 mLを加え、350xgで5分間遠心します。 上清を除去し、細胞をCell Staining Buffer（BioLegend、サンディエゴCA）600 µLに再懸濁し、Attune NxT（Thermo Fisher Scientific、ウォルサムMA）で解析します。

C反応性タンパク質

約60mLの全血を血清分離管（Beckton Dickinson, East Rutherford, NJ, USA）に採取し、室温で30分間凝固させた後、2000 RPMで15分間遠心分離します。 血清を1.5 mLマイクロ遠心管（Eppendorf AG, Hamburg, Germany）にピペットで移し、直ちに-80°Cフリーザーに保存します。 CRPの血清濃度は市販の酵素結合免疫吸着測定法（ALPCO Diagnostics, Salem, NH, USA）を用いて測定します。 マイクロプレートはELx800 BioTekマイクロプレートリーダー（BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA）で推奨波長450ナノメートルを用いて読み取ります。

インターロイキン-6 (IL-6)

約60mLの全血を血清分離管（Beckton Dickinson、イーストラザフォード、ニュージャージー州、米国）に採取し、室温で30分間凝固させた後、2000 RPMで15分間遠心分離します。 血清を1.5 mLマイクロ遠心管（Eppendorf AG、ハンブルク、ドイツ）にピペットで移し、直ちに-80°Cフリーザーに保存します。 IL-6の血清濃度は、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（BioLegend、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて測定します。 マイクロプレートは、推奨波長450ナノメートルでELx800 BioTekマイクロプレートリーダー（BioTek Instruments, Inc.、ウィヌースキー、バーモント州、米国）を用いて読み取ります。

嫌気性パワー

参加者は、自転車エルゴメーター（Monark Ergomedic 894E、Monark、Varberg、Sweden）を使用して、Wingate無酸素パワーテストによる無酸素性フィットネスの測定を行います。 参加者は、自己選択した負荷で毎分60〜75回転（RPM）のウォームアップを5分間行います。 ウォームアップ完了後、負荷を0に下げ、参加者は最大ケイデンスでペダリングを開始するよう指示されます。 参加者が最大ペダルケイデンスに達したら、参加者の体重の7.5％を自転車エルゴメーターに加え、テストが開始されます。 参加者は、体重の7.5％の負荷で合計30秒間ペダリングを行います。 30秒間の最大テスト終了後、参加者は自己選択した負荷で追加の5分間クールダウンを行います。 ピーク無酸素パワー、平均無酸素パワー、相対ピーク無酸素パワー、総仕事量、疲労指数、最大心拍数の測定値が記録されます。

うつ病・不安・ストレス尺度（DASS-21）

参加者は、21項目の抑うつ・不安・ストレス尺度（DASS-21）の紙版を記入するよう求められます。
DASS-21は、参加者の主観的なメンタルヘルスとストレス状態を評価する0-3のリッカート尺度を用いた21の質問で構成されており、「0」は「全く当てはまらなかった」、「3」は「非常に当てはまった、またはほとんどの場合当てはまった」を示します。
DASS-21は、抑うつ、不安、ストレスを評価する3つの下位尺度を含み、各下位尺度は7つの質問で構成されています。ここで、28点以上の高スコアは抑うつの「極めて重度」レベルを示し、20点以上の高スコアは不安の「極めて重度」レベルを示し、34点以上の高スコアはストレスの「極めて重度」レベルを示します。一方、0-9点の低スコアは抑うつの「正常」レベルを示し、0-7点は不安の「正常」レベルを示し、0-14点はストレスの「正常」レベルを示します。

除脂肪体重

除脂肪体重（LBM）は、校正済みBODPOD（COSMED USA Inc.、コンコード、CA）を用いた空気変位プレチスモグラフィーを使用して評価されます。 参加者は、靴、靴下、宝石類、およびベースレイヤー以外のすべての追加衣類を取り除くように指示されます。 その後、参加者は水泳帽を着用し、メーカーのガイドラインに従って体組成分析が実施されます。

体脂肪率

体脂肪率（BF%）は、較正済みのBODPOD（COSMED USA Inc.、コンコード、カリフォルニア州）を用いた空気置換式体積変動法によって評価されます。
参加者は、靴、靴下、装飾品、および肌着以外のすべての追加の衣服を脱ぐように指示されます。
その後、参加者には水泳帽が渡され、製造元のガイドラインに従って体組成分析が行われます。

心理的ウェルビーイング尺度 (PWB)

参加者は、心理的ウェルビーイング尺度（PWB）のオンライン版に回答するよう求められます。 PWBは、ウェルビーイングと幸福度の6つのサブスケール（自律性、環境適応力、個人的成長、他者との良好な関係、人生の目的、自己受容）を測定する18項目、6分間の尺度です。 参加者は、各サブスケールについて、7段階のリッカート尺度で「強く同意する」から「強く同意しない」まで評価するよう指示されます。ここで、スコア1は「強く同意する」、スコア7は「強く同意しない」を示します。 自律性、環境適応力、個人的成長、他者との良好な関係、人生の目的、自己受容の各サブスケールのスコアは合計され、スコアが高いほど各カテゴリーでの心理的ウェルビーイングのレベルが高いことを示しますが、スコア間の分類は提供されていません。

パイパー疲労尺度 (PFS)

参加者は、パイパー疲労尺度（PFS）のオンライン版を完了するよう求められます。 PFSは、0から10の視覚的アナログ尺度を使用した22項目の疲労スクリーニングツールで、0点は「ほとんど疲労がない」、10点は「最大の疲労」症状を示し、疲労症状と原因の質的特徴を評価するための追加5項目が含まれています。 この質問票は4つのサブスケールに分かれています：行動（6項目）、感情（5項目）、感覚（5項目）、認知／気分（6項目）。 サブスケールのスコアは、サブスケール項目の合計点をその項目数で割ることで算出されます。 総合スコアも同様の方法で計算され、スコアが高いほど疲労が強いことを示します。

ピッツバーグ睡眠質問票 (PSQI)

参加者は、ピッツバーグ睡眠質問票（PSQI）のオンライン版に回答するよう求められます。 PSQIは、主観的睡眠の質、睡眠潜時、睡眠時間、習慣的睡眠効率、睡眠障害、睡眠薬の使用、日中の機能障害など、7つのサブカテゴリに分かれてスコアリングされる19項目の自己申告による睡眠の質評価ツールです。 各サブセクションのスコアリングは以下の通りです：睡眠時間（0 = 良好、3 = 不良）、睡眠障害（0 = 良好、3 = 不良）、睡眠潜時（0 = 良好、3 = 不良）、日中の機能障害（0 = 良好、3 = 不良）、睡眠効率（0 = 良好、3 = 不良）、睡眠の質（0 = 良好、3 = 不良）、睡眠薬（0 = 良好、3 = 不良）。 総合スコアについては、各サブセクションのスコアを合計し、総合スコア ≤ 5 は「良好な睡眠の質」、スコア ≥ 5 は「不良な睡眠の質」と関連付けられます。

免疫状態アンケート (ISQ)

参加者は、免疫状態質問票（ISQ）のオンライン版に回答するよう求められます。 ISQは、特定の免疫関連の不調の発生について尋ねることで、回答者の過去1年間の免疫状態を評価する7項目から構成されています。 ISQは、過去12か月間の疾病症状の発生に基づいて、参加者の認識された免疫フィットネスを確立するのに役立ちます。 ISQは、これらの症状の発生を評価するために0〜4のリッカート尺度を使用し、0は「決してない」、4は「いつも（ほぼ）」を示します。 生のスコアを合計し、最終スコアに変換します。最終スコアが0は「認識された免疫状態が非常に悪い」、最終スコアが10は「認識された免疫状態が優れている」を示します。 最終スコアが6未満の場合、認識された免疫機能が低下していると分類されます。

消化器症状質問票 (GSQ)

参加者は、オンライン版の胃腸症状質問票（GSQ）を記入するよう求められます。 GSQは29項目から成る自己申告式の胃腸（GI）スクリーニングツールで、採点のために2つのサブカテゴリに分かれています。1つは今日経験したGI症状、もう1つは過去2週間で経験したGI症状に関するものです。 また、調査の最後には2つの自由記述質問があり、1つは質問票で取り上げられていない他のGI症状について、もう1つは通常の食事摂取について説明するものです。 GI症状の発生頻度の採点は4段階のリッカート尺度に基づいており、0点は症状が「ない」ことを示し、3点は症状の「重度」な存在と頻度を示します。 この調査は、一般的なGI症状の頻度と重症度を特徴づけるために利用されます。

成人食行動質問票（AEBQ）

参加者は、Adult Eating Behavior Questionnaire (AEBQ) (Hunot et al., 2016) のオンライン版に回答するよう求められます。
AEBQは、食欲特性の個人差を8つの異なる側面（食物の楽しみ、感情的な過食、感情的な少食、食べ物の好き嫌い、食物への反応性、食べる速度の遅さ、空腹感、満腹感への反応性）で評価するために設計された、35項目の自己報告式ツールです。
各項目は5段階のリッカート尺度で評価され、1点は「強く反対」、5点は「強く同意」を示し、高いスコアは悪い食習慣（感情的な過食や感情的な少食で表される）または良い食習慣（食物への反応性、食物の楽しみ、満腹感への反応性、食べ物の好き嫌い、食べる速度の遅さで表される）を示します。