多剤耐性クレブシエラ・ニューモニアエにおけるバイオフィルム形成と排出ポンプ活性の表現型および遺伝子型検出 (Klebsiella)

Klebsiella pneumoniaeは、グラム陰性腸内細菌科の一員です。 桿菌状で、莢膜を持ち、運動性がなく、芽胞を形成しない細菌であり、寒天培地上で独特の粘稠な外観を特徴とします。

Klebsiella pneumoniaeは日和見病原体であり、尿路感染症、創傷感染症、菌血症、肺炎など、幅広い市中感染および医療関連感染の原因となります。

1. 検体：尿、膿、および喀痰の検体。
2. 培養：検体をマッコンキー寒天に接種し、エオシンメチレンブルー寒天で継代培養します。

3. 分離株の同定は以下の方法で行います：

   • コロニー形態。
   • グラム染色。
   • 生化学反応：インドール試験、メチルレッド試験、Voges-Proskauer試験、クエン酸塩利用試験（IMViC試験）を含みます。
4. 分離株の抗菌薬感受性試験は、臨床検査標準研究所（CLSI 2025）のガイドラインに従い、選択した抗生物質群について、Muller Hinton寒天を用いたKirby-Bauer法（ディスク拡散法）で実施します。
5. マイクロタイタープレート法によるバイオフィルム形成の表現型検出。
6. 臭化エチジウム-寒天カルトホイール法による排出ポンプ活性の表現型検出。
7. 従来のPCR法によるバイオフィルム遺伝子（fimH-1、mrkA、mrkD）の検出。
8. 従来のPCR法による排出ポンプ遺伝子（acrAB、tolC、mdtk）の検出。