Detecção Fenotípica e Genotípica de Formação de Biofilme e Atividade da Bomba de Efluxo em Klebsiella Pneumoniae Multi-resistente (Klebsiella)

A Klebsiella pneumoniae é um membro da família Enterobacteriaceae Gram-negativa. É uma bactéria em forma de bastonete, encapsulada, não móvel e não formadora de esporos, caracterizada por um aspeto mucoide único em placas de ágar.

A Klebsiella pneumoniae é um patogénico oportunista responsável por uma ampla gama de infeções adquiridas na comunidade e associadas a cuidados de saúde, incluindo infeções do trato urinário, infeções de feridas, bacteriemia e pneumonia.

1. Amostra: amostras de urina, pus e expetoração.
2. Cultura: as amostras serão inoculadas em ágar MacConkey e subcultivadas em ágar eosina azul de metileno.

3. A identificação dos isolados será feita por:

   • Morfologia da colónia.
   • Coloração de Gram.
   • Reações bioquímicas: incluindo os testes Indol, Vermelho de metilo, Voges-Proskauer e utilização de citrato (testes IMViC).
4. O teste de suscetibilidade antimicrobiana dos isolados será realizado pelo método de Kirby-Bauer (método de difusão em disco) utilizando ágar Muller Hinton, de acordo com as diretrizes do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2025) para grupos selecionados de antibióticos.
5. Deteção fenotípica da formação de biofilme pelo método da placa de microtitulação.
6. Deteção fenotípica da atividade da bomba de efluxo pelo método da roda de carroça com brometo de etídio-ágar.
7. Deteção de genes de biofilme (fimH-1, mrkA e mrkD) por PCR convencional.
8. Deteção de genes da bomba de efluxo (acrAB, tolC e mdtk) por PCR convencional.