항레트로바이러스 치료를 받는 HIV-1 감염 환자의 바이러스 저장소 및 면역 기능 측정

소개

현재의 항레트로바이러스 요법(ART)은 혈장 바이러스 부하를 검출 한계 이하로 억제하고 숙주 면역을 회복시켜 HIV-1 감염 환자의 생존 기간을 현저히 연장시키는 데 매우 효과적입니다. 그러나 HIV-1은 치료를 중단하거나 불규칙한 약물 투여 후 몇 주 이내에 치료 전 수준으로 회복됩니다1,2. 강력한 ART에 의해 HIV-1이 근절되지 않는 이유는 휴면 중인 CD4 T 세포에 잠재된 HIV-1의 저장소가 혈장 바이러스 RNA를 장기간 억제하더라도 지속적으로 존재하기 때문이라고 설명할 수 있습니다. 치료 중단 후 바이러스 반동을 예방하거나 지연하여 치료 후 완화 또는 HIV-1의 기능적 치유를 유도하는 것을 목표로 하는 여러 치료 접근법이 조사되고 있습니다3. 본 연구는 ART 기간 동안 HIV-1 감염 환자의 바이러스 저장소 크기와 HIV-1 특이적 T 세포 반응을 측정하여 HIV-1 지속 메커니즘을 이해하고 기능적 치료를 위한 잠재적인 정책을 수립하는 데 도움을 주기 위한 것입니다.

방법 등록 기준

1. 정기적인 추적관찰 및 항레트로바이러스 치료를 받고 있는 HIV-1 감염 환자 확인
2. 20~50세의 남성

제외 기준

1. 심각한 동반질환
2. 명백한 간 또는 신장 기능 장애
3. 면역억제요법을 받고 있다

기간 및 빈도 총 48주간 추적관찰, 8주마다 실험실 측정

실험실 측정 피험자가 동의서에 서명한 후 피험자로부터 혈액 검체를 채취합니다. 등록 시점부터 48주 말까지 8주마다 약 30mL의 혈액을 채취하여 바이러스 저장소 및 HIV-1 특이적 T 세포 반응을 확인하기 위해 보냅니다.

HIV-1 Gag-특이적 T 세포 반응 재조합 HIV-1 Gag p24(5ug/mL; Research Diagnostics, Inc.)가 HIV-1 항원으로 사용됩니다. PBMC(106)는 24웰 플레이트에서 p24 유무에 관계없이 6일 동안 배양됩니다. BrdU가 포함된 T 세포의 빈도는 유세포 분석법으로 측정됩니다.

HIV 바이러스 저장소

말초 혈액 내 HIV 바이러스 저장소의 수준과 함량은 CD4+ T 세포(HIV 저장소를 보유하는 주요 세포 유형)에서 2가지 주요 구성 요소로 분석됩니다.

• 프로바이러스 DNA
• 세포 관련(CA) HIV RNA HIV pvDNA와 CA RNA 모두에 대한 정량화는 PCR 기반 정량 시스템을 기반으로 합니다.

프로바이러스 DNA 평가 혈액 샘플은 세포 DNA 추출을 위해 CD4+ T 세포를 분리하는 데 사용됩니다.

추출된 DNA의 표준화된 분취량은 HIV 유전자 보존 영역을 표적으로 하는 PCR 기반 정량 분석을 통해 HIV pvDNA 수준을 결정하는 데 사용됩니다. HIV pvDNA 수준은 CD4+ T 세포 백만개당 복사본으로 표시됩니다. 입력 세포 수는 인간 내인성 유전자를 표적으로 하는 별도의 PCR에 의해 결정됩니다.

세포 관련(CA) HIV RNA 전체 세포 RNA는 CD4+ T 세포에서 추출되어 역전사를 통해 전체 상보성 DNA(cDNA)를 생성합니다. 그런 다음 cDNA는 후원사가 지정한 실험실에서 보존된 HIV 서열을 표적으로 하는 PCR 기반 정량 분석을 통해 CA HIV RNA 수준을 결정하는 데 사용됩니다. CA RNA 수준은 내인성 하우스키핑 유전자 전사체의 범위를 제시하며, 그 사본 수는 하우스키핑 유전자의 RNA 전사체를 표적으로 하는 별도의 PCR에 의해 독립적으로 결정됩니다.

참조

1. Pinkevych M, 외. 잠복기 후 치료 중단으로 인한 HIV 재활성화는 평균 5~8일마다 발생하며 이는 HIV 관해에 영향을 미칩니다. PLOS Pathog11, e1005000(2015).
2. Bloch MT, 외. 일차 HIV 감염에서 구조화된 치료 중단을 통해 달성된 바이러스 제어 강화에 있어서 수산화요소의 역할: 무작위 임상 시험(Pulse)의 최종 결과. J. 획득. 면역 방어. 신드르. 42,192-202(2006)
3. DavenportMP, 그 외 여러분. HIV의 기능적 치료: 도전의 규모. 네이처 Rev Immunol 19:45 (2019)