Измерение вирусного резерва и иммунной функции у ВИЧ-1-инфицированных пациентов, находящихся на антиретровирусной терапии

Введение

Современная антиретровирусная терапия (АРТ) весьма эффективна для подавления вирусной нагрузки в плазме ниже предела обнаружения и восстановления иммунитета хозяина, тем самым значительно продлевая выживаемость пациентов, инфицированных ВИЧ-1. Однако уровень ВИЧ-1 вернется к уровню, наблюдавшемуся до лечения, в течение нескольких недель после перерыва или нерегулярного приема препарата1,2. Причину, по которой ВИЧ-1 не может быть уничтожен мощной АРТ, можно объяснить тем, что резервуар латентного ВИЧ-1 в покоящихся CD4 Т-клетках будет постоянно существовать даже при длительном подавлении вирусной РНК в плазме. В настоящее время исследуются несколько терапевтических подходов, направленных на предотвращение или задержку повторного заражения вирусом после прерывания лечения, что приводит к ремиссии после лечения или функциональному излечению от ВИЧ-13. Это исследование призвано измерить размер вирусного резервуара и реакцию Т-клеток, специфичных для ВИЧ-1, у ВИЧ-1-инфицированных пациентов во время АРТ, чтобы помочь понять механизм персистенции ВИЧ-1, а затем помочь разработать потенциальную политику функционального излечения.

Методы Критерии регистрации

1. Пациенты с подтвержденной ВИЧ-1 инфекцией, находящиеся под регулярным наблюдением и получающие антиретровирусную терапию
2. Мужчины от 20-50 лет

Критерий исключения

1. Серьезное сопутствующее заболевание
2. Явная печеночная или почечная дисфункция.
3. Получающие иммуносупрессивную терапию

Продолжительность и частота В общей сложности 48 недель наблюдения и лабораторные измерения каждые 8 ​​недель.

Лабораторные измерения Мы возьмем образцы крови у субъектов после того, как они подпишут информированное согласие. Около 30 мл крови будут брать и отправлять для определения вирусного резервуара и ответа Т-клеток, специфичных для ВИЧ-1, каждые 8 ​​недель, от исходного уровня при включении в исследование до конца 48 недель.

Т-клеточные реакции, специфичные для Gag ВИЧ-1. Рекомбинантный Gag p24 ВИЧ-1 (5 мкг/мл; Research Diagnostics, Inc.) будет использоваться в качестве антигена ВИЧ-1. РВМС (106) будут инкубироваться с р24 или без него в 24-луночных планшетах в течение 6 дней. Частоту Т-клеток с включением BrdU будут измерять с помощью проточной цитометрии.

Вирусные резервуары ВИЧ

Уровни и содержание резервуаров вируса ВИЧ в периферической крови будут анализироваться в CD4+ Т-клетках (основной тип клеток, содержащий резервуар ВИЧ) в двух основных компонентах:

• Провирусная ДНК
• РНК ВИЧ, ассоциированные с клетками (СА) Количественные оценки как пвДНК ВИЧ, так и РНК ВИЧ основаны на количественной системе, основанной на ПЦР.

Оценка провирусной ДНК. Образцы крови будут использоваться для выделения CD4+ Т-клеток для экстракции клеточной ДНК.

Стандартизированное аликвотное количество экстрагированной ДНК используется для определения уровня пвДНК ВИЧ посредством количественного анализа на основе ПЦР, нацеленного на консервативную область гена ВИЧ. Уровень pvDNA ВИЧ будет представлен в виде копий на миллион CD4+ Т-клеток. Входное количество клеток определяется с помощью отдельной ПЦР, нацеленной на эндогенный ген(ы) человека.

Ассоциированная с клетками (СА) РНК ВИЧ Общая клеточная РНК будет экстрагирована из CD4+ Т-клеток для создания полной комплементарной ДНК (кДНК) посредством обратной транскрипции. Затем кДНК используется для определения уровня РНК ВИЧ CA посредством количественного анализа на основе ПЦР, который нацелен на консервативные последовательности ВИЧ в назначенной Спонсором лаборатории. Уровень СА-РНК представлен в виде копий эндогенных транскриптов гена «домашнего хозяйства», число копий которых будет определяться независимо с помощью отдельной ПЦР, нацеленной на транскрипты РНК гена «домашнего хозяйства».

Ссылка

1. Пинкевич М и др. Реактивация ВИЧ в результате латентного прерывания лечения происходит в среднем каждые 5-8 дней, что указывает на ремиссию ВИЧ. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Блох М.Т. и др. Роль гидроксимочевины в усилении вирусологического контроля, достигаемого за счет структурированного прерывания лечения при первичной ВИЧ-инфекции: окончательные результаты рандомизированного клинического исследования (Pulse). Дж. Приобретение. Иммунная защита. Синдр. 42,192-202(2006)
3. ДавенпортМП и др. Функциональное лечение ВИЧ: масштаб проблемы. Природа Преподобный Иммунол 19:45 (2019)