Måling for viral reservoir og immunfunktion hos HIV-1-inficerede patienter under antiretroviral terapi

Introduktion

Nuværende antiretroviral terapi (ART) er yderst effektiv til at undertrykke plasma viral belastning til under detektionsgrænsen og til at genoprette værtens immunitet og dermed forlænge overlevelsen af ​​HIV-1-inficerede patienter bemærkelsesværdigt. Imidlertid vil HIV-1 vende tilbage til niveauerne før behandling inden for uger efter afbrydelse eller uregelmæssig medicinering1,2. Årsagen til, at HIV-1 ikke ville blive udryddet af kraftig ART, kan forklares ved, at reservoiret af latent HIV-1 i hvilende CD4 T-celler vedvarende vil eksistere selv langsigtet undertrykkelse af plasma viralt RNA. Adskillige terapeutiske tilgange, der sigter mod at forhindre eller forsinke viral rebound efter behandlingsafbrydelse, hvilket producerer en efterbehandlingsremission eller funktionel helbredelse af HIV-1, er ved at blive undersøgt3. Denne undersøgelse skal måle størrelsen af ​​viralt reservoir og HIV-1-specifik T-cellerespons hos HIV-1-inficerede patienter under ART for at hjælpe med at forstå mekanismen for HIV-1 persistens og derefter hjælpe med at etablere en potentiel politik for funktionel helbredelse.

Metoder Tilmeldingskriterier

1. Bekræftede HIV-1-inficerede patienter under regelmæssig opfølgning og i antiretroviral behandling
2. Mænd med 20-50 år

Eksklusionskriterier

1. Alvorlig komorbiditet
2. Tydelig lever- eller nyredysfunktion
3. Modtager immunsuppressiv behandling

Varighed og hyppighed I alt 48 ugers opfølgning og laboratoriemåling hver 8. uge

Laboratoriemåling Vi vil tage blodprøven fra forsøgspersoner, efter at de har underskrevet det informerede samtykke. Omkring 30 ml blod vil blive taget og sendt til bestemmelse af viralt reservoir og HIV-1-specifikke T-celle-responser, hver 8. uge, fra baseline ved indskrivning til slutningen af ​​48 uger.

HIV-1 Gag-specifikke T-celle-responser Rekombinant HIV-1 Gag p24 (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) vil blive brugt som HIV-1-antigen. PBMC (106) vil blive inkuberet med eller uden p24 i 24-brønds plade i 6 dage. Hyppigheden af ​​T-celler med BrdU-inkorporering vil blive målt ved flowcytometri.

HIV-virale reservoirer

Niveauer og indhold af HIV-virale reservoirer i det perifere blod vil blive analyseret i CD4+ T-celler (den største celletype, der huser HIV-reservoiret) i 2 hovedkomponenter:

• Proviralt DNA
• Celleassocierede (CA) HIV RNA'er Kvantificeringerne for både HIV pvDNA og CA RNA er baseret på det PCR-baserede kvantitative system.

Proviral DNA-vurdering Blodprøverne vil blive brugt til at isolere CD4+ T-celler til cellulær DNA-ekstraktion.

Standardiseret alikvot mængde af ekstraheret DNA bruges til at bestemme HIV pvDNA-niveauet gennem PCR-baseret kvantitativ analyse rettet mod den konserverede region af HIV-genet. HIV-pvDNA-niveauet vil blive præsenteret som kopier pr. million CD4+ T-celler. Indgangscelletallet bestemmes af en separat PCR rettet mod humane endogene gener.

Celleassocieret (CA) HIV RNA Total cellulært RNA vil blive ekstraheret fra CD4+ T-celler for at generere totalt komplementært DNA (cDNA) gennem revers transkription. cDNA'et bruges derefter til at bestemme CA HIV RNA-niveau gennem PCR-baseret kvantitativ analyse, der retter sig mod de konserverede sekvenser af HIV på et udpeget laboratorium af sponsor. CA RNA-niveauet er præsenteret som en skopi af endogene husholdningsgen-transkripter, hvis kopiantal vil blive bestemt uafhængigt af en separat PCR rettet mod RNA-transkripterne af husholdningsgenet.

Reference

1. Pinkevych M, et al. HIV-reaktivering fra latens-efterbehandlingsafbrydelse forekommer i gennemsnit hver 5-8 dage - implikationer for HIV-remission. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. Hydroxyurinstofs rolle i at forbedre den virologiske kontrol opnået gennem struktureret behandlingsafbrydelse ved primær HIV-infektion: endelige resultater fra et randomiseret klinisk forsøg (Pulse). J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42.192-202 (2006)
3. DavenportMP, et al. Funktionel helbredelse af HIV: omfanget af udfordringen. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)