기계 환기 환자의 치아 세척 시 면봉과 칫솔의 비교

연구 목적: 이 연구의 주요 목표는 구강 삽관 기계 환기 환자의 치태 제거에 폼 면봉 또는 칫솔이 가장 효과적인 방법을 제공하는지 여부를 결정하는 것입니다.

2차 목표는 치석, 기관내관 및 폐의 미생물 균총을 프로파일링하는 것입니다. 또한 플라크 샘플, 사용된 기관내관(ETT) 및 비방향성 기관지폐포 세척(NBL)을 모두 수집하면 구강 미생물이 ETT 내 생물막 형성에 기여하고 잠재적으로 VAP를 촉진하는지 여부를 확인할 수 있습니다. 이 연구 결과는 ETT에서 생물막을 촉진하는 것과 관련된 유기체에 대한 우리의 지식을 향상시킬 뿐만 아니라 생물막 형성을 줄이기 위한 잠재적인 관리 전략을 강조할 수도 있습니다.

연구 모집단: 기계적 환기가 시작된 카디프 웨일스 대학 병원의 중환자실에 입원한 중환자실에 입원한 중환자 성인 환자.

모집: 연구 시작일부터 웨일즈 대학 병원의 성인 ICU에 입원한 포함 및 제외 기준을 충족하는 모든 환자는 모집 자격이 있는 것으로 간주됩니다. 당직 컨설턴트가 확인한 환자는 연구팀에 통보됩니다. 동의를 얻어 총 50명의 환자를 모집합니다.

중재: 이것은 구강 한쪽에서 중재(거품 면봉 또는 칫솔로 청소)를 수행하는 분할 구강 설계 연구입니다. 예를 들어 입 왼쪽 면봉과 입 오른쪽 면에 칫솔을 사용합니다. 청소는 최소 24시간 동안 또는 발관할 때까지 또는 모집 후 최대 7일 중 더 짧은 기간 동안 매일 수행됩니다.

비지시 기관지폐포 세척(NBL)은 월요일과 목요일 그리고 임상적으로 지시될 때(예: 의심되는 VAP) 실시됩니다. 여기에는 멸균 흡입 카테터를 폐에 삽입하고 10-20ml의 멸균 식염수를 주입하고 다시 끌어내어 멸균 유니버셜에 넣습니다. 샘플은 감염이 의심되는 경우 두 개로 나뉘며, 절반은 평소와 같이 UHW 미생물학 실험실로 이동하고 나머지 절반은 연구의 일부로 프로파일링됩니다. 의심되는 감염이 없는 경우 모든 샘플이 연구의 일부로 프로파일링됩니다.

방법: 모집 후, 환자는 '유아용 칫솔'과 거품 면봉을 사용하여 2분 동안 멸균수로 하루에 두 번 치아를 닦게 되며, 닦는 방법이 할당된 면이 무작위로 배정됩니다. 구강 양쪽에 할당된 1분의 청소.

수정된 Silness 및 Loe 플라크 점수(Scannapieco et al 1992) 및 치은 지수(Loe and Silness 1963)는 연구 기간 동안 청소 전과 청소 후 매일 아침 기록됩니다. 치태 지수는 협측면에서 입 양쪽의 상하 제1대구치, 제1소구치 및 중절치에 기록됩니다. 플라크 지수 점수는 각 면에 있는 6개 치아의 평균입니다. 인덱스 치아가 없는 환자의 경우 가장 근접한 나머지 치아에 점수를 매깁니다. 치은 지수는 동일한 치아에서 채점됩니다.

플라크 기록 후 치은 인덱스 플라크 샘플은 플라크 점수에 사용된 것과 동일한 치아에서 수집됩니다. 그런 다음 구강 관리를 시작하기 전에 멸균 큐렛을 사용하여 대상 치아의 치은 세 번째 부분에서 치은 상 플라크 샘플을 수집한 다음 세척하기 전에 하루에 한 번 수집합니다. 플라크는 즉시 1ml의 미생물 수송 배지에 접종됩니다. 수송 배지는 나선형 도금 시스템(Don Whitley Scientific)을 사용하여 한천 플레이트에 접종하기 전에 인산염 완충 식염수에서 일련의 십진수 방식으로 희석됩니다. 다음 배지는 미생물 배양에 사용됩니다: Blood Agar(호기성 박테리아), Fastidious Anaerobe Agar(혐기성 박테리아) 및 CHROMagar Candida(칸디다 및 효모 종). 유당 발효 장내 세균의 차등 계수는 MacConkey Agar를 사용하는 반면 Staphylococcus 종(coagulase 양성 및 coagulase 음성)은 Mannitol Salt Agar(MSA)를 사용하여 검출됩니다. 접종된 배지는 적절한 기체 환경에서 37°C에서 48시간(호기성 세균) 또는 7일(혐기성 세균) 동안 배양됩니다. 각 면의 총 호기성 미생물 수는 혈액 한천에서 얻어 총 콜로니 형성 단위(CFU)로 표시됩니다.

각각의 뚜렷한 콜로니 형태의 식별은 광범위한 표현형 조사를 통해 이루어집니다. 테스트에는 다양한 테스트 시스템을 통한 그람 염색, 옥시다제 및 카탈라제 활성 및 생화학적 프로파일링이 포함됩니다. 생화학적 테스트 시스템에는 APICoryne 시스템(그람 양성 간균), APIStrep 시스템(카탈라아제 음성 그람 양성 구균), APIStaph 및 ID32Staph(카탈라아제 양성 그람 양성 구균)가 포함됩니다. 옥시다아제 음성, 그람 음성 간균은 API20E 테스트를 사용하여 프로파일링되며 산화효소 양성 그람 음성 간균은 API NE를 사용하여 프로파일링됩니다. 진균 유기체(칸디다 및 효모 종)는 감별 배지인 CHROMagar의 콜로니 색상 및 모양과 Auxocolour 2 시스템(biorad)을 사용한 생화학적 프로파일링을 기반으로 식별됩니다.

위의 개입 섹션에 요약된 대로 수집된 NBL. NBL 샘플 내에 존재하는 유기체의 식별은 위에서 설명한 배양 방법을 사용하여 수행됩니다.

연구 중에 환자가 발관되면 기관내관을 수집하여 실험실로 옮길 것입니다. ETT 처리에는 미생물 배양, 분자 분석 또는 현미경 이미징에 의한 유기체의 정량적 식별을 위해 각 튜브를 섹션으로 나누는 작업이 포함됩니다.

각 ETT의 섹션은 처음에 생물막 응집체를 방해하기 위해 멸균된 유리 구슬과 30초 동안 혼합된 2ml의 인산염 완충 식염수 및 소용돌이에 배치됩니다. 그런 다음 PBS 용액을 제거하고 106배 연속 희석합니다.

생물막 내에 존재하는 유기체의 식별은 보충 분자 분석(아래에 설명됨)과 함께 위에 설명된 배양 방법을 사용하여 수행됩니다.

기관내관의 16S 리보솜 RNA 유전자 정의 세균 오염 회수된 기관내관의 각 영역에서 나온 절편을 분자 절차를 사용하여 분석합니다. 이 방법은 Puregene® 박테리아 DNA 분리 키트(Gentra Systems)를 사용하여 표본 500µl에서 전체 DNA를 추출하는 작업을 포함합니다. 범용 박테리아 프라이머 쌍, d88 및 e94(Paster et al, 2001) 및 표적 유기체(Porphyromonas gingivalis, Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa 및 Staphylococcus aureus)에 특이적인 프라이머는 다음을 사용하여 추출된 샘플 내의 16S rRNA 유전자 표적을 증폭하는 데 사용될 것입니다. 표준 PCR 및 반응 조건. 음성 대조군에는 시약 대조군(PCR 템플릿으로서의 멸균수) 및 시료 준비 대조군(원래 시료 대신 사용되며 전체 추출 프로토콜에 노출되는 멸균수)이 포함됩니다. P. gingivalis, S. aureus 및 mutans의 알려진 종에서 얻은 주형 DNA의 양성 대조군도 포함될 것입니다.

공초점 레이저 스캐닝 현미경 사용된 ETT의 절편은 또한 유기체 특이적 펩티드 핵산(PNA) 프로브를 사용하는 형광 in situ 혼성화를 사용하여 분석됩니다. 각각의 특정 프로브는 ETT 생물막 내에서 표적 유기체(S. aureus, P. aeruginosa, Candida albicans, S. mutans)의 공간적 위치 및 분포를 허용하기 위해 뚜렷한 형광 라벨과 결합됩니다.

기타 데이터 수집: 연령, 성별, APACHE II 점수, 동반 질환, 입원 일수 및 최근 항생제 투여를 포함하여 환자의 기본 인구 통계가 기록됩니다.

Zsigmondy 및 DMFT(충치, 결손, 충전 치아) 점수는 등록된 환자의 기준 치아 상태를 평가하기 위해 연구 기간 동안 치과 위생사에 의해 기록됩니다.

결과 측정: 1차 결과: 플라크 내 박테리아 식별 및 정량화와 함께 기계적 세척 후 일일 플라크 및 치은 점수. 정량적 비교는 총 로그 변환 CFU 수와 두 가지 세척 방법의 치태 및 치은 점수에서 확인됩니다.