人工呼吸器装着患者の歯のクリーニングにおけるスワブと歯ブラシの比較

研究の目的: この研究の主な目的は、フォームスワブまたは歯ブラシが、経口挿管された機械換気患者の歯垢を除去する最も効果的な方法を提供するかどうかを判断することです。

二次的な目的は、歯垢、気管内チューブ、および肺の微生物フローラをプロファイリングすることです。 さらに、気管内チューブ (ETT) と気管支肺胞洗浄 (NBL) を使用した両方のプラーク サンプルの収集により、口腔微生物が ETT 内のバイオ フィルム形成に寄与し、VAP を促進する可能性があるかどうかを判断できます。 この研究の発見は、ETTでのバイオフィルムの促進に関与する生物に関する知識を高めるだけでなく、その形成を減らすための潜在的な管理戦略を浮き彫りにするかもしれません.

研究集団: カーディフのウェールズ大学病院の集中治療室に入院し、人工呼吸器が開始された重篤な成人患者。

募集： 研究の開始日からウェールズ大学病院の成人ICUに入院した、包含および除外基準を満たすすべての患者は、募集の資格があると見なされます。 当直コンサルタントによって特定された患者は、研究チームに通知されます。 同意を得て、合計50人の患者を募集します。

介入：これは、介入（フォームスワブまたは歯ブラシによるクリーニング）が口の片側で実行される分割口設計研究です. たとえば、泡のスワブを口の左側に、歯ブラシを口の右側に置きます。 クリーニングは、最低 24 時間、または抜管まで、または採用後 7 日間のいずれか短い方で、毎日実行されます。

無向気管支肺胞洗浄 (NBL) は、月曜日と木曜日、および臨床的に必要な場合 (たとえば、VAP の疑い) に行われます。 これには、無菌の吸引カテーテルを肺に挿入し、10 ～ 20ml の無菌生理食塩水を注入して引き戻し、無菌ユニバーサルに配置します。 感染が疑われる場合、サンプルは 2 つに分割され、半分は通常どおり UHW 微生物検査室に送られ、残りの半分は研究の一環としてプロファイリングされます。 感染の疑いがない場合、すべてのサンプルが研究の一部としてプロファイリングされます。

方法: 募集後、患者は「ベビー歯ブラシ」と泡綿棒を使用して滅菌水で 2 分間、1 日 2 回歯を清掃します。清掃方法が割り当てられる側は無作為化されます。 口の両側に割り当てられた 1 分間のクリーニング。

変更された Silness and Loe プラーク スコア (Scannapieco et al 1992) および歯肉指数 (Loe and Silness 1963) は、洗浄前に記録され、その後、調査期間中の洗浄後の毎朝に記録されます。 プラーク指数は、頬面から口の両側にある上下の第一大臼歯、第一小臼歯、および中切歯で記録されます。 プラーク インデックス スコアは、各側の 6 本の歯の平均になります。 人差し指の歯が欠けている患者の場合は、最も近い残りの歯が採点されます。 歯肉指数は、同じ歯で採点されます。

プラークおよび歯肉指標の記録に続いて、プラークスコアに使用したのと同じ歯でプラークサンプルを収集します。 歯肉縁上のプラークのサンプルは、口腔ケアの開始前に無菌キュレットを使用して、対象となる歯の歯肉の 3 番目の部分から収集され、その後は 1 日 1 回、クリーニングの前に収集されます。 プラークはすぐに1mlの微生物学的輸送培地に接種されます。 輸送培地は、スパイラルプレーティングシステム（Don Whitley Scientific）を使用して寒天プレートに接種する前に、リン酸緩衝生理食塩水で連続10進数で希釈されます。 微生物の培養には次の寒天が使用されます: 血液寒天 (好気性細菌)、Fastidious Anaerobe Agar (嫌気性細菌)、および CHROMagar Candida (カンジダおよび酵母種)。 ラクトース発酵腸内細菌のカウントは、マッコンキー寒天を使用して行いますが、ブドウ球菌種 (コアグラーゼ陽性およびコアグラーゼ陰性) は、マンニトール塩寒天 (MSA) を使用して検出します。 接種された培地は、適切な気体環境下、37℃で48時間（好気性菌）または7日間（嫌気性菌）インキュベートされます。 各側からの総好気性微生物数は、血液寒天培地から取得され、総コロニー形成単位 (CFU) として表されます。

それぞれの異なるコロニーの形態型の同定は、広範な表現型の調査によって行われます。 テストには、グラム染色、オキシダーゼおよびカタラーゼ活性、およびさまざまなテストシステムによる生化学的プロファイリングが含まれます。 生化学試験システムには、APICoryne システム (グラム陽性桿菌)、APIStrep システム (カタラーゼ陰性グラム陽性球菌)、APIStaph および ID32Staph (カタラーゼ陽性グラム陽性球菌) が含まれます。 オキシダーゼ陰性グラム陰性桿菌は API20E テストを使用してプロファイリングされ、オキシダーゼ陽性グラム陰性桿菌は API NE を使用してプロファイリングされます。 菌類生物 (カンジダおよび酵母種) は、コロニの色と示差培地 CHROMagar 上の外観に基づいて、および Auxocolour 2 システム (biorad) を使用した生化学的プロファイリングによって識別されます。

上記の介入に関するセクションで概説したように収集された NBL。 NBL サンプル内に存在する生物の同定は、上記で概説した培養方法を使用して行われます。

研究中に患者が抜管された場合、気管内チューブが回収され、検査室に移されます。 ETT の処理には、微生物培養、分子分析、または顕微鏡イメージングによる生物の定量的識別のために、各チューブをセクションに分割することが含まれます。

各 ETT の切片を最初に 2 ml のリン酸緩衝生理食塩水に入れ、ボルテックスで 30 秒間滅菌ガラスビーズと混合して、バイオフィルム凝集体を破壊します。 次に、PBS 溶液を除去し、106 倍に連続希釈します。

バイオ フィルム内に存在する生物の同定は、補足的な分子分析 (以下に概説) と共に、上記で概説した培養方法を使用して行われます。

気管内チューブの16SリボソームRNA遺伝子定義の細菌汚染 回収された気管内チューブの各領域からの切片は、分子的手法を使用して分析されます。 この方法では、Puregene® 細菌 DNA 分離キット (Gentra Systems) を使用して、500 μl の標本から全 DNA を抽出します。 普遍的な細菌プライマー ペア、d88 と e94 (Paster et al, 2001) および標的生物 (ポルフィロモナス ジンジバリス、ストレプトコッカス ミュータンス、緑膿菌、黄色ブドウ球菌) に特異的なプライマーを使用して、抽出サンプル内の 16S rRNA 遺伝子ターゲットを増幅します。標準的な PCR および反応条件。 ネガティブ コントロールには、試薬コントロール (PCR テンプレートとしての滅菌水) とサンプル調製コントロール (元のサンプルの代わりに使用され、抽出プロトコル全体にさらされる滅菌水) が含まれます。 P. gingivalis、S. aureus、および mutans の既知の種からのテンプレート DNA のポジティブ コントロールも含まれます。

共焦点レーザー走査顕微鏡 使用された ETT の切片は、生物特異的ペプチド核酸 (PNA) プローブを使用した蛍光 in situ ハイブリダイゼーションを使用して分析されます。 各特定のプローブは、ETT バイオ フィルム内の標的生物 (黄色ブドウ球菌、緑膿菌、カンジダ アルビカンス、S. ミュータンス) の空間的位置と分布を可能にするために、別個の蛍光標識と共役します。

その他のデータの収集: 年齢、性別、APACHE II スコア、合併症、入院からの日数、最近の抗生物質投与など、患者のベースライン人口統計が記録されます。

ZsigmondyおよびDMFT（虫歯、欠損、充填歯）スコアは、登録された患者のベースラインの歯科状態を評価するための研究中に歯科衛生士によって記録されます。

結果の測定: 主要な結果: 機械的洗浄後の毎日の歯垢および歯肉スコア、歯垢内の細菌の同定および定量化。 定量的な比較は、対数変換された CFU カウントの合計と、2 つの洗浄方法のプラークおよび歯肉スコアから確認されます。