Vanupuikkojen ja hammasharjojen vertailu mekaanisesti tuuletettujen potilaiden hampaiden puhdistuksessa

Tutkimuksen tavoite: Tämän työn päätavoitteena on selvittää, ovatko vaahtomuovipuikot tai hammasharjat tehokkain tapa poistaa plakkia oraalisesti intuboiduilla mekaanisesti ventiloiduilla potilailla.

Toissijaisena tavoitteena on profiloida mikrobiologista kasvistoa hammasplakissa, endotrakeaalisessa putkessa ja keuhkoissa. Lisäksi sekä plakkinäytteiden, käytettyjen endotrakeaalisten putkien (ETT) että ohjaamattoman bronkoalveolaarisen huuhtelun (NBL) kerääminen antaa meille mahdollisuuden määrittää, edistävätkö suun mikro-organismit biofilmin muodostumista ETT:ssä ja mahdollisesti edistävätkö VAP:tä. Tämän tutkimuksen havainnot eivät vain lisää tietoamme organismeista, jotka osallistuvat biofilmien edistämiseen ETT:llä, vaan voivat myös korostaa mahdollisia hoitostrategioita niiden muodostumisen vähentämiseksi.

Tutkimuspopulaatio: Kriittisesti sairaat aikuiset potilaat, jotka on otettu tehohoitoon Walesin yliopistolliseen sairaalaan Cardiffin osavaltiossa ja joille on aloitettu koneellinen ventilaatio.

Rekrytointi: Kaikki potilaat, jotka täyttävät sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit ja jotka on otettu aikuisten teho-osastolle Walesin yliopistolliseen sairaalaan tutkimuksen aloituspäivästä, katsotaan kelpoisiksi rekrytointiin. Päivystävän konsultin tunnistamat potilaat ilmoitetaan tutkimusryhmälle. Suostumus hankitaan ja yhteensä 50 potilasta rekrytoidaan.

Interventiot: Tämä on jaetun suun suunnittelututkimus, jossa toimenpide (puhdistus vaahtopuikolla tai hammasharjalla) suoritetaan suun toisella puolella. Esimerkiksi vaahtomuovipuikko suun vasemmalle puolelle ja hammasharjalle oikealle puolelle. Puhdistus suoritetaan päivittäin vähintään 24 tunnin ajan tai ekstubaatioon asti tai enintään seitsemän päivää värväyksen jälkeen sen mukaan, kumpi on lyhyempi.

Ohjaamattomat bronkoalveolaariset huuhtelut (NBL:t) otetaan maanantaisin ja torstaisin ja kun kliininen aihe on (esimerkiksi epäilty VAP). Tämä sisältää steriilin imukatetrin asettamisen keuhkoihin, 10-20 ml steriiliä suolaliuosta tiputetaan ja vedetään takaisin ja asetetaan steriiliin yleispulloon. Näyte jaetaan kahtia, kun epäillään tartuntaa, joista toinen puoli menee UHW-mikrobiologian laboratorioon tuttuun tapaan, toinen puoli profiloidaan osana tutkimusta. Jos tartuntaa ei ole epäilty, koko näyte profiloidaan osana tutkimusta.

Menetelmät: Rekrytoinnin jälkeen potilaiden hampaat puhdistetaan kahdesti päivässä steriilillä vedellä 2 minuutin ajan käyttämällä "vauvan hammasharjaa" ja vaahtopuikkoa, jolloin satunnaistetaan se puoli, jolle puhdistusmenetelmä kohdistetaan. Yksi minuutti puhdistusta suunnilleen molemmille puolille.

Muokattu Silness- ja Loe-plakkipistemäärä (Scannapieco et al 1992) ja ienindeksi (Loe ja Silness 1963) tallennetaan ennen puhdistusta ja sitten joka aamu puhdistuksen jälkeen koko tutkimuksen ajan. Plakkiindeksi kirjataan ylempään ja alempaan ensimmäiseen poskihampaan, ensimmäiseen kaksoishampaan ja keskietuhampaan molemmille suun puolille posken pinnasta. Plakkiindeksin pistemäärä on kummankin puolen kuuden hampaan keskiarvo. Potilaille, joista puuttuu etuhampaat, lähimpänä olevat jäljellä olevat hampaat pisteytetään. Ienindeksi pisteytetään samoista hampaista.

Plakin ja ienindeksin tallentamisen jälkeen plakkinäytteet otetaan samoista hampaista, joita käytettiin plakin pisteytykseen. Supragingivaalisesta plakista otetaan sitten näytteitä kohdehampaiden ikenen kolmannesta osasta steriilillä kyretillä ennen suunhoidon aloittamista ja sen jälkeen kerran päivässä ennen puhdistusta. Plakki siirrostetaan välittömästi 1 ml:aan mikrobiologista kuljetusalustaa. Kuljetuselatusaine laimennetaan desimaalisarjassa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella ennen agarlevyjen ymppäämistä käyttämällä spiraalimaljausjärjestelmää (Don Whitley Scientific). Seuraavia agareja käytetään mikro-organismien viljelyyn: Blood Agar (aerobiset bakteerit), Fastidious Anaerobe Agar (anaerobiset bakteerit) ja CHROMagar Candida (Candida ja hiivalajit). Laktoosia fermentoivien enteeristen bakteerien erot lasketaan käyttämällä MacConkey-agaria, kun taas Staphylococcus-lajit (koagulaasipositiiviset ja koagulaasinegatiiviset) havaitaan käyttämällä mannitolisuolaagaria (MSA). Inokuloituja väliaineita inkuboidaan sopivissa kaasumaisissa ympäristöissä 37 °C:ssa 48 tuntia (aerobit) tai 7 päivää (anaerobit). Aerobisten mikrobien kokonaismäärä molemmilta puolilta saadaan veriagareista ja ilmaistaan ​​kokonaispesäkettä muodostavina yksikköinä (CFU).

Kunkin erillisen pesäkemorfotyypin tunnistaminen tapahtuu laajan fenotyyppitutkimuksen avulla. Testit sisältävät Gram-värjäyksen, oksidaasi- ja katalaasiaktiivisuuden sekä biokemiallisen profiloinnin useiden testijärjestelmien avulla. Biokemiallisiin testijärjestelmiin kuuluvat APICoryne-järjestelmä (grampositiiviset basillit), APIStrep-järjestelmä (katalaasinegatiiviset grampositiiviset kokit), APIStaph ja ID32Staph (katalaasipositiiviset grampositiiviset kokit). Oksidaasinegatiiviset, gramnegatiiviset basillit profiloidaan API20E-testillä, kun taas oksidaasipositiiviset gramnegatiiviset basillit profiloidaan API NE:n avulla. Sieni-organismit (Candida ja hiivalajit) tunnistetaan pesäkkeiden värin ja ulkonäön perusteella differentiaalialustalla CHROMagar ja biokemiallisen profiloinnin avulla Auxocolour 2 -järjestelmällä (biorad).

NBL:t kerättiin yllä olevassa interventioita käsittelevässä osassa kuvatulla tavalla. NBL-näytteissä esiintyvien organismien tunnistaminen tehdään käyttämällä edellä kuvattuja viljelymenetelmiä.

Jos potilaat ekstuboidaan tutkimuksen aikana, endotrakeaalinen putki kerätään ja siirretään laboratorioon. ETT:n prosessointi sisältää jokaisen putken jakamisen osiin organismien kvantitatiivista tunnistamista varten mikrobiviljelmän, molekyylianalyysin tai mikroskooppisen kuvantamisen avulla.

Jokaisen ETT:n leikkeet laitetaan aluksi 2 ml:aan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta ja sekoitetaan 30 sekunnin ajan steriloitujen lasihelmien kanssa biofilmiaggregaattien hajottamiseksi. Sitten PBS-liuos poistetaan ja laimennetaan desimaalisarjassa 106-kertaisesti.

Biofilmeissä olevien organismien tunnistaminen tehdään käyttämällä edellä kuvattuja viljelymenetelmiä yhdessä täydentävän molekyylianalyysin kanssa (kuvattu alla).

16S ribosomaalisen RNA:n geenin määrittelemä bakteerikontaminaatio endotrakeaalisissa putkissa Jokaisesta talteen otettujen endotrakeaalisten putkien alueesta analysoidaan leikkeitä käyttämällä molekyylimenetelmiä. Menetelmä sisältää kokonais-DNA:n uuttamisen 500 µl:sta näytteitä käyttämällä Puregeneâ-bakteerin DNA-eristyssarjaa (Gentra Systems). Universaalisia bakteerialukepareja, d88 ja e94 (Paster et al, 2001) ja kohde-organismeille (Porphyromonas gingivalis, Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa ja Staphylococcus aureus) spesifisiä alukkeita käytetään sitten monistamaan 16S rRNA:n uutettujen geenikohteiden avulla. standardi PCR ja reaktio-olosuhteet. Negatiiviset kontrollit sisältävät reagenssikontrollin (steriili vesi PCR-templaattina) ja näytteenvalmistuskontrollin (steriiliä vettä käytetään alkuperäisen näytteen tilalla ja altistetaan koko uuttoprotokollalle). Myös tunnetuista P. gingivalis-, S. aureus- ja mutans-lajeista peräisin olevat templaatti-DNA:n positiiviset kontrollit sisällytetään.

Konfokaalinen laserpyyhkäisymikroskopia Käytetyn ETT:n leikkeet analysoidaan myös käyttämällä fluoresoivaa in situ -hybridisaatiota käyttäen organismispesifisiä peptidinukleiinihappo (PNA) -koettimia. Jokainen spesifinen koetin konjugoidaan erillisen fluoresoivan leiman kanssa kohde-organismien (S. aureus, P. aeruginosa, Candida albicans, S. mutans) avaruudellisen sijainnin ja jakautumisen mahdollistamiseksi ETT-biofilmissä.

Muiden tietojen kerääminen: Potilaiden demografiset perustiedot tallennetaan, mukaan lukien ikä, sukupuoli, APACHE II -pisteet, samanaikaiset sairaudet, päivät sairaalaan saapumisesta ja äskettäinen antibioottien antaminen.

Hammashygienisti kirjaa Zsigmondy- ja DMFT-pisteet (karies, puuttuvat, täytetyt hampaat) tutkimuksen aikana arvioidakseen osallistuneiden potilaiden hampaiden perustilan.

Tulosmittaukset: Ensisijainen tulos: Päivittäiset plakin ja ienten pisteet mekaanisen puhdistuksen jälkeen sekä plakin sisällä olevien bakteerien tunnistaminen ja kvantifiointi. Kvantitatiiviset vertailut varmistetaan kahdesta puhdistusmenetelmästä saaduista log-muunnetuista CFU-määristä sekä plakin ja ienten pisteistä.