Sammenligning av vattpinner og tannbørster ved rengjøring av tennene til mekanisk ventilerte pasienter

Studiemål: Hovedmålet med dette arbeidet er å finne ut om skumpinner eller tannbørster er den mest effektive metoden for å fjerne tannplakk hos oralt intuberte, mekanisk ventilerte pasienter.

Det sekundære målet er å profilere den mikrobiologiske floraen i tannplakk, endotrakealtube og lunge. I tillegg vil innsamling av både plakkprøver, brukte endotrakeale rør (ETT) og ikke-rettet bronkoalveolær lavage (NBL) tillate oss å bestemme om orale mikroorganismer bidrar til biofilmdannelse i ETT og potensielt fremmer VAP. Funnene i denne studien vil ikke bare forbedre vår kunnskap om organismene som er involvert i å fremme biofilmer på ETT, men kan også fremheve potensielle styringsstrategier for å redusere dannelsen av dem.

Studiepopulasjon: Kritisk syke voksne pasienter innlagt på intensivavdelingen ved University Hospital of Wales, Cardiff, hvor mekanisk ventilasjon er igangsatt.

Rekruttering: Alle pasienter som tilfredsstiller inklusjons- og eksklusjonskriterier, innlagt på ICU for voksne ved University Hospital of Wales fra studiens startdato vil bli vurdert som kvalifisert for rekruttering. Pasienter identifisert av vakthavende konsulent vil bli varslet til forskningsteamet. Samtykke vil innhentes og totalt rekrutteres 50 pasienter.

Intervensjoner: Dette er en designstudie med delt munn hvor intervensjonen (rengjøring med en skumpinne eller tannbørste) utføres på den ene siden av munnen. For eksempel skum vattpinne venstre side av munnen og tannbørste høyre side av munnen. Rengjøring vil bli utført daglig i minimum 24 timer eller frem til ekstubering eller opptil syv dager etter rekruttering, avhengig av hva som er kortest.

Ikke-rettede bronkoalveolære skyllinger (NBL) vil bli tatt på en mandag og torsdag og når det er klinisk indisert (for eksempel en mistenkt VAP). Dette innebærer innføring av et sterilt sugekateter i lungen, 10-20ml sterilt saltvann dryppes inn og trekkes tilbake, og plasseres i en steril universal. Prøven deles i to ved mistanke om infeksjon, den ene halvparten går til UHWs mikrobiologiske laboratorium som vanlig, den andre halvparten vil bli profilert som en del av studien. Hvis det ikke er mistanke om infeksjon, vil hele prøven bli profilert som en del av studien.

Metoder: Etter rekruttering vil pasienter få renset tennene sine to ganger daglig med sterilt vann i 2 minutter ved hjelp av en "barnetannbørste" og skumservietter, siden som rensemetoden er tildelt vil bli randomisert. Ett minutts rengjøring tildelt hver side av munnen.

En modifisert Silness og Loe plakk score (Scannapieco et al 1992) og gingival indeks (Loe og Silness 1963) vil bli registrert før rengjøring og deretter hver morgen etter rengjøring gjennom hele studiens varighet. Plakkindeksen vil bli registrert på øvre og nedre første jeksler, første bikuspidal og sentrale fortenner på hver side av munnen fra bukkaloverflaten. Plakkindekspoengsummen vil være et gjennomsnitt av de seks tennene på hver side. For pasienter med manglende indekstenner vil de gjenværende tennene i nærmeste nærhet bli skåret. Gingivalindeksen vil bli skåret på de samme tennene.

Etter registrering av plakk og gingivalindeks vil plakkprøver samles på de samme tennene som ble brukt for plakkpoengsummen. Prøver av supragingival plakk vil deretter bli samlet fra den tredje delen av tannkjøttet av de målrettede tennene ved hjelp av en steril kyrett før oppstart av munnpleie og deretter en gang om dagen før rengjøring. Plakk vil umiddelbart bli inokulert i 1 ml mikrobiologisk transportmedium. Transportmediet vil bli fortynnet på seriell desimal måte i fosfatbufret saltvann før inokulering av agarplater ved bruk av et spiralpletteringssystem (Don Whitley Scientific). Følgende agarer vil bli brukt til å dyrke mikroorganismene: Blood Agar (aerobe bakterier), Fastidious Anaerobe Agar (anaerobe bakterier) og CHROMagar Candida (Candida og gjærarter). Differensielle tellinger av laktosefermenterende enteriske bakterier vil skje ved bruk av MacConkey-agar, mens Staphylococcus-arter (koagulasepositive og koagulase-negative) vil bli påvist ved bruk av Mannitol Salt Agar (MSA). Det inokulerte mediet vil bli inkubert under passende gassmiljøer ved 37 °C i 48 timer (aerobe) eller 7 d (anaerobe). Et totalt aerobt mikrobielt antall fra hver side vil bli oppnådd fra blodagarene og uttrykt som totale kolonidannende enheter (CFUer).

Identifikasjon av hver enkelt kolonimorfotype vil skje gjennom omfattende fenotypisk undersøkelse. Tester vil involvere Gram-farging, oksidase- og katalaseaktivitet og biokjemisk profilering gjennom en rekke testsystemer. De biokjemiske testsystemene vil inkludere APICoryne-systemet (Gram-positive basiller), APIStrep-systemet (katalase-negative gram-positive kokker), APIStaph og ID32Staph (katalase-positive gram-positive kokker). Oksidase-negative, Gram-negative basiller vil bli profilert ved hjelp av API20E-testen, mens oksidase-positive Gram-negative basiller vil bli profilert ved hjelp av API NE. Sopporganismer (Candida og gjærarter) vil bli identifisert basert på kolonifarge og utseende på differensialmediet, CHROMagar og ved biokjemisk profilering med Auxocolour 2-systemet (biorad).

NBL-er samlet inn som skissert i avsnittet om intervensjoner ovenfor. Identifikasjon av organismene som er tilstede i NBL-prøvene vil bli gjort ved å bruke kulturmetodene som er skissert ovenfor.

Hvis pasienter ekstuberes under studien, vil endotrakealrøret samles og overføres til laboratoriet. Behandling av ETT vil innebære å dele opp hvert rør i seksjoner for enten kvantitativ identifikasjon av organismer ved mikrobiell kultur, molekylær analyse eller mikroskopisk avbildning.

Seksjoner av hver ETT vil først bli plassert i 2 ml fosfatbufret saltvann og vortex blandet i 30 s med steriliserte glasskuler for å forstyrre biofilmaggregater. PBS-løsningen vil deretter bli fjernet og fortynnet seriell desimalt, 106 ganger.

Identifikasjon av organismene som er tilstede i biofilmene vil bli gjort ved hjelp av kulturmetodene skissert ovenfor, sammen med supplerende molekylær analyse (skissert nedenfor).

16S ribosomalt RNA-gendefinert bakteriell kontaminering av endotrakeale rør Snitt fra hver region av gjenvunnede endotrakeale rør vil bli analysert ved hjelp av molekylære prosedyrer. Metoden vil involvere ekstraksjon av totalt DNA fra 500 µl av prøvene ved bruk av et Puregeneâ bakteriell DNA-isolasjonssett (Gentra Systems). Universelle bakterielle primerpar, d88 og e94 (Paster et al, 2001) og primere spesifikke for målorganismer (Porphyromonas gingivalis, Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa og Staphylococcus aureus) vil deretter bli brukt til å forsterke de 16S-prøvene som er ekstrahert i genmålene. standard PCR og reaksjonsbetingelser. Negative kontroller vil inkludere en reagenskontroll (sterilt vann som PCR-mal) og en prøveklargjøringskontroll (sterilt vann brukt i stedet for den originale prøven og eksponert for hele ekstraksjonsprotokollen). Positive kontroller av mal DNA fra kjente arter av P. gingivalis, S. aureus og mutans vil også bli inkludert.

Konfokal laserskanningsmikroskopi Deler av den brukte ETT vil også bli analysert ved bruk av fluorescerende in situ hybridisering ved bruk av organismespesifikke peptidnukleinsyreprober (PNA). Hver spesifikk probe vil bli konjugert med en distinkt fluorescerende merkelapp for å tillate romlig plassering og distribusjon av målorganismer (S. aureus, P. aeruginosa, Candida albicans, S. mutans) i ETT-biofilmen.

Innsamling av andre data: Baseline demografi av pasienter vil bli registrert, inkludert alder, kjønn, APACHE II-score, komorbiditeter, dager fra sykehusinnleggelse og nylig antibiotikaadministrasjon.

En Zsigmondy- og DMFT-score (decayed, missing, filled teeth) vil bli registrert av en tannpleier under studien for å vurdere baseline-tannstatusen til pasienter som er registrert.

Resultatmål: Primært utfall: Daglig plakk og tannkjøttskår etter mekanisk rengjøring, med identifisering og kvantifisering av bakterier i plakk. Kvantitative sammenligninger vil bli konstatert fra de totale logtransformerte CFU-tellingene og plakk- og gingivalskårer fra de to rengjøringsmetodene.