새로운 미세유동장치를 이용한 순환종양세포 분자진단법 개발

목표 1의 경우, 2개의 5ml 전처리 혈액과 해당 종양 샘플을 National University Health System의 NSCLC 환자로부터 얻을 것입니다. 피부 상피 세포의 오염을 최소화하기 위해 혈액 샘플이 피부 천자 후 첫 번째 샘플이 되는 것을 피하기 위해 샘플링이 구성됩니다. 첫 번째 혈액 샘플의 경우, 이전에 설명한 방법에 따라 NUS가 개발한 CTC 바이오 칩을 사용하여 CTC를 분리하고 검색합니다.21 두 번째 혈액 샘플에서 CTC를 분리하고 칩에 고정한 다음 EpCAM, CD45 및 DAPI에 대해 염색하여 세포 순도 및 양을 평가합니다. 검색된 CTC 및 종양 샘플에서 DNA를 추출하고 이전에 설명한 방법에 따라 Fluidigm Biomark에서 디지털 PCR로 엑손 19 결실, L858R 및 T790M 돌연변이를 분석합니다.23 그런 다음 혈액 및 종양 샘플의 EGFR 돌연변이 상태를 일치성에 대해 비교합니다.

목표 2를 위해 게피티닙으로 치료를 받고 있는 NSCLC 환자에게 접근할 것입니다. National University Health System에서 NSCLC 환자로부터 치료 전(기준선) 및 치료 4주마다(게피티닙 1주기) 2개의 5ml 혈액 샘플을 채취합니다.

CTC는 게피티닙/하이드록시클로로퀸을 받는 또 다른 프로토콜을 사용하는 환자들로부터 획득 및 분석될 것입니다. (B/08/196. 진행된 비소세포폐암에서 Hydroxychloroquine과 Gefitinib의 내약성, 안전성 프로필 및 효능을 조사하기 위한 1상 연구를 주도하는 2상.) 이 연구에서 CTC는 이미 수집되고 있습니다. 따라서 조사관은 CTC 바이오칩 플랫폼을 사용하여 CTC 분석을 위해 B/08/196의 샘플을 사용할 계획입니다.

각 시점에 대해 위에서 설명한 대로 CTC를 분리, 검색 및 EGFR 돌연변이 상태에 대해 분석합니다. 임상 반응은 RECIST 기준을 사용하여 결정됩니다.34 전처리 EGFR 돌연변이 유형 양과 최고의 임상 반응 사이의 연관성은 피셔의 정확한 테스트에 의해 평가될 것입니다. 모든 치료 주기에 걸친 EGFR 돌연변이 유형 양의 경향과 종양 크기 사이의 연관성은 Maheswaran 등의 연구에서 수행된 관찰에 의해 평가될 것입니다.9

연구자들은 이 연구의 두 가지 목적을 위해 1년 동안 30명의 환자를 분석할 계획입니다. 어떤 경우에는 두 가지 목적 모두에 관련 샘플(연속 혈액 샘플 및 해당 종양)이 있습니다. 샘플 크기는 Maheshwaran et al.9의 연구와 NUHS에서 1년 동안 적합한 피험자의 예상 볼륨을 기반으로 합니다. 그렇지 않으면 표본 크기 추정을 위한 관련 데이터가 부족합니다. 특히, 관련 환자 집단에서 T790M 돌연변이의 빈도가 부족하여 이 연구에서 제안된 것과 같은 평가를 위한 적절한 분석 시스템의 부족을 강조합니다.