Ontwikkeling van moleculaire diagnostiek van circulerende tumorcellen met behulp van een nieuw microfluïdisch apparaat

Voor doel 1 zullen twee voorbehandelingsbloed van 5 ml en overeenkomstige tumormonsters worden verkregen van NSCLC-patiënten bij het National University Health System. Bemonstering zal worden georganiseerd om te voorkomen dat de bloedmonsters het eerste monster zijn dat wordt genomen na huidpunctie om besmetting met huidepitheelcellen te minimaliseren. Voor het eerste bloedmonster zullen CTC's worden geïsoleerd en opgehaald met behulp van de door NUS ontwikkelde CTC-biochip volgens eerder beschreven methoden.21 Van het tweede bloedmonster worden CTC's geïsoleerd, op de chip gefixeerd en gekleurd voor EpCAM, CD45 en DAPI om de celzuiverheid en -hoeveelheid te beoordelen. DNA zal worden geëxtraheerd uit de opgehaalde CTC's en tumormonsters, en exon 19-deletie, L858R- en T790M-mutaties worden geanalyseerd door middel van digitale PCR op de Fluidigm Biomark volgens eerder beschreven methoden.23 De EGFR-mutatiestatus in bloed- en tumormonsters zal vervolgens worden vergeleken op hun concordantie.

Voor doel 2 worden patiënten met NSCLC die worden behandeld met gefitnib benaderd. Er zullen twee bloedmonsters van 5 ml worden afgenomen vóór de behandeling (baseline) en vervolgens elke 4 weken van de behandeling (één cyclus met gefitinib) van NSCLC-patiënten bij het National University Health System.

CTC's zullen ook worden verkregen en geanalyseerd van patiënten met een ander protocol die gefitinib/hydroxychloroquine krijgen. (B/08/196. Een fase II met een aanloop naar een fase I-studie om de verdraagbaarheid, het veiligheidsprofiel en de werkzaamheid van Hydroxychloroquine en Gefitinib bij gevorderde niet-kleincellige longkanker te onderzoeken.) In dit onderzoek worden al CTC's verzameld. Daarom zijn de onderzoekers van plan monsters van B/08/196 te gebruiken voor CTC-analyse met behulp van het CTC biochip-platform.

Voor elk tijdstip worden CTC's geïsoleerd, opgehaald en geanalyseerd op EGFR-mutatiestatus zoals hierboven beschreven. De klinische respons zal worden bepaald aan de hand van de RECIST-criteria.34 Associaties tussen hoeveelheden van het EGFR-mutatietype vóór de behandeling en de beste klinische respons zullen worden beoordeeld met de Fisher's exact-test. Associatie tussen trends in hoeveelheden van het EGFR-mutatietype en tumorgrootte over alle behandelingscycli zal worden beoordeeld door observatie zoals uitgevoerd in het onderzoek door Maheswaran et al.9

De onderzoekers zijn van plan om gedurende een jaar 30 patiënten te analyseren voor beide doelstellingen van deze studie. Sommige gevallen zullen voor beide doeleinden relevante monsters hebben (seriële bloedmonsters en bijbehorende tumor). De steekproefomvang is gebaseerd op die van de studie van Maheshwaran et al.9 en ook op het waarschijnlijke aantal geschikte proefpersonen gedurende 1 jaar bij NUHS. Relevante gegevens voor het schatten van de steekproefomvang ontbreken verder. Met name de frequentie van T790M-mutaties in een relevante patiëntenpopulatie ontbreekt, wat wijst op het gebrek aan adequate analytische systemen voor de beoordeling ervan, zoals het systeem dat in dit onderzoek wordt voorgesteld.