Développement de diagnostics moléculaires de cellules tumorales circulantes à l'aide d'un nouveau dispositif microfluidique

Pour l'objectif 1, deux échantillons de sang de prétraitement de 5 ml et les échantillons de tumeur correspondants seront obtenus auprès de patients atteints de NSCLC au National University Health System. L'échantillonnage sera organisé pour éviter que les échantillons de sang ne soient le premier échantillon prélevé après la ponction cutanée afin de minimiser la contamination par les cellules épithéliales de la peau. Pour le premier échantillon de sang, les CTC seront isolés et récupérés à l'aide de la biopuce CTC développée par NUS selon les méthodes décrites précédemment.21 À partir du deuxième échantillon de sang, les CTC seront isolés, fixés sur la puce et colorés pour EpCAM, CD45 et DAPI afin d'évaluer la pureté et la quantité des cellules. L'ADN sera extrait des CTC et des échantillons de tumeurs récupérés, et analysé la délétion de l'exon 19, les mutations L858R et T790M par PCR numérique sur le Fluidigm Biomark selon les méthodes décrites précédemment.23 Le statut de mutation de l'EGFR dans les échantillons sanguins et tumoraux sera ensuite comparé pour leur concordance.

Pour l'objectif 2, les patients atteints de NSCLC traités par gefitnib seront approchés. Deux échantillons de sang de 5 ml seront obtenus avant le traitement (ligne de base) puis toutes les 4 semaines de traitement (un cycle de gefitinib) auprès de patients NSCLC au National University Health System.

Les CTC seront également obtenus et analysés chez des patients sur un autre protocole recevant du géfitinib/hydroxychloroquine. (B/08/196. Une phase II avec une étude de phase I en tête pour examiner la tolérabilité, le profil d'innocuité et l'efficacité de l'hydroxychloroquine et du géfitinib dans le cancer du poumon non à petites cellules avancé.) Dans cette étude, les CTC sont déjà collectés. Par conséquent, les enquêteurs ont l'intention d'utiliser des échantillons de B/08/196 pour l'analyse CTC à l'aide de la plate-forme de biopuces CTC.

Pour chaque point de temps, les CTC seront isolés, récupérés et analysés pour le statut de mutation EGFR comme décrit ci-dessus. La réponse clinique sera déterminée à l'aide des critères RECIST.34 Les associations entre les quantités de type mutation EGFR avant le traitement et la meilleure réponse clinique seront évaluées par le test exact de Fisher. L'association entre les tendances des quantités de type de mutation de l'EGFR et la taille de la tumeur sur tous les cycles de traitement sera évaluée par observation, comme dans l'étude de Maheswaran et al.9

Les investigateurs prévoient d'analyser 30 patients sur un an pour les deux objectifs de cette étude. Certains cas auront des échantillons pertinents (prélèvements sanguins en série et tumeur correspondante) pour les deux objectifs. La taille de l'échantillon est basée sur celle de l'étude de Maheshwaran et al.9 ainsi que sur le volume probable de sujets appropriés pendant 1 an au NUHS. Les données pertinentes pour l'estimation de la taille de l'échantillon manquent par ailleurs. En particulier, la fréquence des mutations T790M dans une population de patients pertinente fait défaut, soulignant le manque de systèmes analytiques adéquats pour son évaluation, comme celui proposé dans cette étude.