Udvikling af cirkulerende tumorcelle molekylær diagnostik ved hjælp af en ny mikrofluidisk enhed

Til mål 1 vil der blive indhentet to 5 ml forbehandlingsblod og tilsvarende tumorprøver fra NSCLC-patienter ved National University Health System. Prøveudtagning vil blive organiseret for at undgå, at blodprøverne er den første prøve, der tages efter hudpunktur for at minimere kontaminering med hudepitelceller. Til den første blodprøve vil CTC'er blive isoleret og hentet ved hjælp af den NUS-udviklede CTC-bio-chip i henhold til metoder beskrevet tidligere.21 Fra den anden blodprøve vil CTC'er blive isoleret, fikseret på chippen og farvet til EpCAM, CD45 og DAPI for at vurdere cellerenhed og mængde. DNA vil blive ekstraheret fra de hentede CTC'er og tumorprøver og analyseret exon 19 deletion, L858R og T790M mutationer ved digital PCR på Fluidigm Biomark i overensstemmelse med metoder beskrevet tidligere.23 EGFR-mutationsstatus i blod- og tumorprøver vil derefter blive sammenlignet for deres overensstemmelse.

For mål 2 vil patienter med NSCLC, der behandles med gefitnib, blive kontaktet. To 5 ml blodprøver vil blive opnået før-behandling (baseline) og derefter hver 4. uges behandling (én cyklus af gefitinib) fra NSCLC-patienter ved National University Health System.

CTC'er vil også blive indhentet og analyseret fra patienter på en anden protokol, der modtager gefitinib/hydroxychloroquin. (B/08/196. En fase II med et ledende fase I-studie for at undersøge tolerabiliteten, sikkerhedsprofilen og effektiviteten af ​​Hydroxychloroquine og Gefitinib ved fremskreden ikke-småcellet lungekræft.) I denne undersøgelse bliver CTC'er allerede indsamlet. Derfor har efterforskerne til hensigt at bruge prøver fra B/08/196 til CTC-analyse ved hjælp af CTC-biochipplatformen.

For hvert tidspunkt vil CTC'er blive isoleret, hentet og analyseret for EGFR-mutationsstatus som beskrevet ovenfor. Klinisk respons vil blive bestemt ved hjælp af RECIST-kriterierne.34 Forbindelser mellem mængder af EGFR-mutationstype før behandling og bedste kliniske respons vil blive vurderet ved Fishers eksakte test. Sammenhæng mellem tendenser i mængder af EGFR-mutationstype og tumorstørrelse over alle behandlingscyklusser vil blive vurderet ved observation som udført i undersøgelsen af ​​Maheswaran et al.9

Efterforskerne planlægger at analysere 30 patienter over et år for begge formål med denne undersøgelse. Nogle tilfælde vil have relevante prøver (serielle blodprøver og tilsvarende tumor) til begge formål. Stikprøvestørrelsen er baseret på undersøgelsen af ​​Maheshwaran et al.9 og også den sandsynlige mængde af egnede forsøgspersoner i løbet af 1 år på NUHS. Der mangler ellers relevante data til estimering af stikprøvestørrelse. Især mangler hyppigheden af ​​T790M-mutationer i en relevant patientpopulation, hvilket fremhæver manglen på tilstrækkelige analytiske systemer til dens vurdering, som den foreslåede i denne undersøgelse.