Utvikling av sirkulerende tumorcelle molekylær diagnostikk ved bruk av en ny mikrofluidisk enhet

For mål 1 vil to 5 ml forbehandlingsblod og tilsvarende tumorprøver bli innhentet fra NSCLC-pasienter ved National University Health System. Prøvetaking vil bli organisert for å unngå at blodprøvene er den første prøven som tas etter hudpunksjon for å minimere kontaminering med hudepitelceller. For den første blodprøven vil CTC-er isoleres og hentes ved hjelp av den NUS-utviklede CTC-biobrikken i henhold til metoder beskrevet tidligere.21 Fra den andre blodprøven vil CTC-er isoleres, fikseres på brikken og farges for EpCAM, CD45 og DAPI for å vurdere cellenes renhet og mengde. DNA vil bli ekstrahert fra de hentede CTC-ene og tumorprøvene, og analysert ekson 19-delesjon, L858R og T790M-mutasjoner ved digital PCR på Fluidigm Biomark i henhold til metoder beskrevet tidligere.23 EGFR-mutasjonsstatus i blod- og tumorprøver vil deretter bli sammenlignet for deres samsvar.

For mål 2 vil pasienter med NSCLC som behandles med gefitnib bli kontaktet. To 5 ml blodprøver vil bli tatt før behandling (baseline) og deretter hver 4. uke med behandling (én syklus med gefitinib) fra NSCLC-pasienter ved National University Health System.

CTC-er vil også bli innhentet og analysert fra pasienter på en annen protokoll som får gefitinib/hydroksyklorokin. (B/08/196. En fase II med en ledende fase I-studie for å undersøke tolerabiliteten, sikkerhetsprofilen og effekten av Hydroxychloroquine og Gefitinib ved avansert ikke-småcellet lungekreft.) I denne studien blir CTC allerede samlet inn. Derfor har etterforskerne til hensikt å bruke prøver fra B/08/196 for CTC-analyse ved bruk av CTC-biochipplattformen.

For hvert tidspunkt vil CTC-er bli isolert, hentet og analysert for EGFR-mutasjonsstatus som beskrevet ovenfor. Klinisk respons vil bli bestemt ved å bruke RECIST-kriteriene.34 Assosiasjoner mellom mengder av EGFR-mutasjonstype før behandling og beste kliniske respons vil bli vurdert av Fishers eksakte test. Assosiasjon mellom trender i EGFR-mutasjonstype mengder og tumorstørrelse over alle behandlingssykluser vil bli vurdert ved observasjon som utført i studien av Maheswaran et al.9

Etterforskerne planlegger å analysere 30 pasienter over ett år for begge formålene med denne studien. Noen tilfeller vil ha relevante prøver (serieblodprøver og tilsvarende svulst) for begge formål. Utvalgsstørrelsen er basert på studien til Maheshwaran et al.9 og også det sannsynlige volumet av passende forsøkspersoner i løpet av 1 år ved NUHS. Relevante data for estimering av prøvestørrelse mangler ellers. Spesielt mangler frekvensen av T790M-mutasjoner i en relevant pasientpopulasjon, noe som understreker mangelen på tilstrekkelige analytiske systemer for vurderingen, slik som den som er foreslått i denne studien.