다중 전극 응집법 및 클로피도그렐 내성

이 연구의 목적은 제2형 당뇨병(T2DM) 및 관상 동맥 질환 환자에서 클로피도그렐 내성을 검출하고 임상 결과를 예측하는 새로운 POC 장치인 다중 전극 응집계(Multiplate, Dynabyte, Munich, Germany)의 능력을 평가하는 것입니다. 혈소판 기능 검사의 금본위제로 간주되는 광 투과 응집 측정법(LTA)과 비교하여 동맥 질환(CAD)[7]. 최소 1개월 동안 경구 및/또는 비경구 저혈당 요법을 받고 이전의 ST 상승, 비-ST 상승 급성 관상 동맥 증후군 또는 불안정 협심증을 근거로 혈관조영학적으로 확립된 관상 동맥 질환이 있는 20세에서 75세 사이의 T2DM 환자 280명 CAD 문서화 후 최소 7일 동안 매일 peros 아스피린 요법과 병용하여 클로피도그렐 75mg/일로 치료받은 환자를 모집합니다. 환자 등록은 그리스 아테네에 있는 "Attiko" 대학 병원의 제2 대학 심장학과에서 이루어집니다. 기본 평가에는 인구통계학적 데이터, 병력, 심혈관 위험 인자, 혈액학적 매개변수, 병든 혈관 수, 스텐트 혈관 수, 이전 심근 경색(MI), 이전 혈관 재생술, 박출률 및 병용 약물의 기록이 포함됩니다. 신장(크레아티닌 수치 > 2.5mg/dl) 또는 간(빌리루빈 수치 > 2mg/dL) 기능 부전, 악성 질환, 혈소판 기능에 영향을 미치는 것으로 알려진 약물 사용, 출혈 체질 병력, 혈소판 수 < 100x109/L 및 헤마토크리트 < 28%는 제외됩니다. 프로토콜은 "Attiko" 대학 병원의 기관 검토 위원회에 의해 승인되며 모든 환자는 연구 절차를 거치거나 연구 치료를 받기 전에 서면 동의서를 제공합니다.

혈소판 기능 측정은 연구 등록 시 수행됩니다. 환자는 클로피도그렐에 대한 반응이 좋지 않거나 좋은 반응자로 식별됩니다. 1차 종료점은 심혈관 원인으로 인한 사망, 비치명적 심근경색, 스텐트 혈전증, 허혈성 뇌졸중, 급성 관상동맥 증후군으로 인한 긴급 재입원 및/또는 1년 추적 기간 동안 혈관재생술의 복합으로 정의됩니다. PLATO 기준에 따른 주요 출혈의 에피소드는 후속 조치 동안 기록됩니다[8].

클로피도그렐 내성을 검출하는 두 가지 방법의 능력을 평가하고 항혈소판제 치료에 대한 반응과 임상 결과 사이의 잠재적 상관관계를 평가합니다. 동시에 유사한 특성을 가지고 있지만 prasugrel 또는 ticagrelor로 치료받은 환자는 동일한 샘플 크기의 대조군으로 사용됩니다.

혈소판 기능 분석 혈소판 기능 분석은 "아티코" 대학병원 혈액학 및 혈액은행 연구실에서 수행됩니다. 혈액 샘플은 항혈소판제 투여 후 2~4시간 후에 전주정맥에서 채취합니다. 자발적인 혈소판 활성화를 피하기 위해 처음 2~4ml의 혈액은 폐기하고 혈소판 기능 검사는 샘플링 후 2시간 이내에 수행됩니다.

LTA(Light Transmittance Aggregometry) 전혈 검체를 3.8% 시트르산삼나트륨에서 채취하고 200g에서 10분 동안 원심분리하여 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 얻습니다. 나머지 검체는 2000g에서 15분 동안 재원심분리하여 혈소판 부족 혈장(PPP)을 얻습니다. 혈소판 수는 PPP를 사용하여 200,000/μl에서 300,000/μl 사이로 조정됩니다. 응집은 Biodata-PAP-4 응집계(Bio/Data Corporation, PA, USA)를 사용하여 수행될 것이다. 100% 라인은 PPP를 사용하여 설정되고 작용제를 추가하기 전에 PRP로 설정된 0% 기준선입니다. 사용된 작용제는 ADP 2.0×10-5 M(Bio/Data Corporation, PA, USA)일 것이다. 테스트 절차는 이전에 설명한 대로 수행됩니다[9]. 간단히 말해서, 0.45mL PRP를 37°C에서 3분 동안 배양한 큐벳으로 옮깁니다. 그런 다음 0.05mL의 작용제를 PRP에 첨가하고 응집 패턴이 6분 동안 생성되도록 합니다. 혈소판 응집은 PPP를 기준으로 사용하여 기준선에서 빛 투과율의 최대 변화 백분율로 결정되었습니다. 20 microM ADP 자극 후 > 59% 응집의 컷오프 값은 높은 치료 중 혈소판 반응성을 나타내는 것으로 정의됩니다[10]. 다른 테스트 매개변수는 지연 집계 및 분해 정도입니다.

다중 전극 응집계(MEA) 전혈 내 혈소판 응집은 임피던스 응집계(Multiplate, Dynabyte, Munich, Germany)를 사용하여 MEA에 의해 평가됩니다. 샘플은 3.2% 구연산염 튜브에 수집되고 제조업체의 지침에 따라 혈액 수집 후 30분에서 2시간 이내에 분석됩니다. 혈소판 응집은 최종 농도 6.5μM에서 ADP에 의해 유도될 것입니다. 각 일회용 테스트 셀에는 두 쌍의 전극이 포함되어 있어 두 개의 동시 측정이 가능합니다. 응집은 응집 속도 및 최대 응집의 통합 측정인 곡선 아래 면적(AUC)으로 보고됩니다. MEA에 의한 HRPR의 컷오프 값(멀티플레이트 분석기에 의한 ADP에 대한 반응에서 > 468 임의 응집 단위/분)은 아데노신 이인산에 대한 높은 치료 중 혈소판 반응성의 정의에 대한 최근 발표된 합의 진술에 따라 정의되었습니다[11].

통계적 방법

1. 기본 끝점:

   이 전향적 코호트 연구에서 1차 종료점은 심혈관 원인으로 인한 사망, 비치명적 심근경색, 스텐트 혈전증, 허혈성 뇌졸중, 급성 관상동맥 증후군에 대한 긴급 재입원 및/또는 1년 추적 기간 동안 혈관재생술의 복합으로 정의됩니다. 기간. PLATO 기준에 따른 주요 출혈의 에피소드는 후속 조치 동안 기록됩니다.

2. 기술 통계:

   평균 ± SD, 중앙값 및 사분위수 범위(IQR) 또는 적절한 경우 백분율로 표시됩니다.

3. 클로피도그렐에 반응한 사람과 반응하지 않은 사람 사이의 기준선 데이터(인구학적 데이터, 병력, 심혈관 위험 인자, 혈액학적 매개변수, 병든 혈관 수, 이전 심근경색, 이전 혈관재생술, 박출률 및 병용 약물) 비교:

   먼저 Shapiro-Wilk 테스트를 사용하여 데이터 분포의 정규성을 확인합니다. 연속 변수는 2-샘플 스튜던트 t 테스트(분포가 정상인 경우) 또는 비모수 2-샘플 Wilcoxon rank-sum(Mann-Whitney) 테스트(분포가 발견된 경우)를 통해 비교됩니다. 비정상). 범주형 변수는 Pearson의 카이제곱 테스트를 사용하여 비교됩니다.

4. 클로피도그렐에 대한 내성을 검출하는 두 가지 방법의 일치:

   "Multiplate"와 "ADP 유발 LTA" 사이의 일치는 kappa 통계 및 각각의 p-값에 의해 결정됩니다. 0.20 미만의 Kappa 값은 일치하지 않음, 0.21~0.40은 공정한 일치, 0.41~0.60은 중간 정도의 일치, 0.61~0.80은 좋은 일치, >0.81은 매우 좋은 일치를 나타냅니다.

5. 실험실 내성과 임상 결과의 상관관계:

   클로피도그렐에 대한 내성을 검출하는 방법("멀티플레이트" 및 "ADP-유도된 LTA")이 임상 결과(엔드 포인트)와 연관되는지 여부를 평가하기 위해 로지스틱 회귀 분석이 사용될 것이다. 이러한 연관성이 독립적인지 여부를 평가하기 위해 잘 알려진 위험 요인(즉, 심혈관 위험 요인, 질병 혈관 수, 이전 심근 경색, 이전 혈관 재형성 등)인 특정 공변량이 다변수 로지스틱 회귀 모델에 포함됩니다. 원유 및 조정된 승산비(OR)와 해당 95% 신뢰 구간(CI)이 표시됩니다.

6. 유의 수준:

   가설 테스트의 경우 < 0.05의 확률 수준은 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다. 모든 통계 테스트는 양면입니다.

7. 통계 소프트웨어:

   Stata 소프트웨어는 모든 통계 분석에 사용됩니다(Stata Corp., College Station, TX, USA).

8. 샘플 크기 계산:

연구 표본 크기 계산을 위해 우리는 클로피도그렐 내성 CR(+)이 비 DM 환자에 비해 T2DM 환자에서 더 널리 퍼진다는 가설을 세웠습니다[12, 13]. 동시에, 클로피도그렐 내성이 있는 DM 환자군은 심혈관 부작용의 가능성이 증가했습니다[14]. T2DM 환자의 일반 인구의 13%가 주요 심혈관 부작용(MACE)[심혈관 원인에 이차적인 사망, ST-분절 상승 심근 경색(STEMI), 비-ST-분절 상승 심근 경색( NSTEMI) 및 불안정 협심증(UA) 및 뇌졸중]; 이 수치는 클로피도그렐 치료를 계속 받고 있는 클로피도그렐 내성이 있는 T2DM 환자에서 38%로 증가합니다[15]. CR(+) 및 CR(-) 당뇨병 환자 사이의 부작용 발생률의 차이를 감지하는 데 필요한 샘플 크기는 양측 위험이 5%이고 b 위험이 20%(80%의 검정력)입니다. 총 101명[CR(+)군 40명, CR(-)군 61명]. 감소율을 10%로 가정하면 표본 크기를 111명(CR(+)군 44명, CR(-)군 67명)으로 더 늘려야 한다. 마지막으로, 제2형 당뇨병 환자의 클로피도그렐 내성이 약 40%에 이르는 것으로 추정할 수 있다는 점을 고려하여[16-18], 모든 당뇨병 환자의 초기 샘플은 2.5배 더 큰 278명의 환자(클로피도그렐 내성 111명, 예민한). 통계 소프트웨어 G*Power 3.1.3 (Kiel, Germany)를 샘플 크기 계산에 사용했습니다.