소아비만의 식이영양중재 기법에 관한 연구

학업 시험 전에 학부모에게 보내는 편지, 정보에 입각한 동의서 및 자원 봉사 설문지가 학교 어린이와 보호자에게 공개됩니다. 우리는 자원봉사자와 보호자에게 이 연구에 대해 설명하고 이 연구에 참여하도록 초대합니다. 자원 봉사자 및 보호자가 부모에게 보내는 서신에 서명하고 정보에 입각한 동의서만 연구 대상에 접근할 수 있습니다.

실험 절차:

전체 실험 연구를 위해 두 차례의 건강 검진, 혈액 및 대변 샘플 수집이 필요합니다. 첫 번째 시험 및 샘플 수집은 학업 시험 중에 수행됩니다. 두 번째는 개입 후 수행됩니다.

연구 대상 모집:

학업시험 및 자원봉사 설문조사 결과, 3개월 이전 항생제를 복용하지 않은 건강한 어린이 약 300명을 모집하였으며, 이들의 BMI는 비만 범위에 있어야 합니다. 그런 다음 허리 둘레와 체지방 비율을 측정합니다. 체중 대비 허리둘레의 비율이 0.46 이상이고 체지방률이 높은 경우(남자 20% 이상, 12세 미만 여자 25% 이상, 12세 여자 25% 이상) 데이터를 수집하여 입력한다. 데이터베이스에. 15-18세 사이의 약 40명의 건강한 어린이를 모집하여 다음 중재 연구에 참여합니다.

일반 신체 검사:

학업시험에서는 신장, 체중 등 학생의 기본 의료정보를 기록하고 BMI를 계산합니다. BMI가 비만 범위에 있으면 체성분을 측정하고 기록합니다.

MRI 및 MRS 테스트:

모든 환자는 3 Tesla MR 장치(MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Erlangen, Germany)를 사용하여 숙련된 기술자가 수행한 MRI 스캐닝을 받았습니다. MRI와 MRS는 각각 multi-echo Dixon과 HISTO 시퀀스로 수행하여 간 양성자 밀도 지방 분율(PDFF)을 계산했습니다.

채혈, 보존 및 검사:

채혈 및 보존은 건강검진 기준으로 진행됩니다. 비만 데이터 수집 시 비만아동에 대한 혈구수, 혈당, 혈청지질, 간기능 검사를 진행해야 한다. 개입 시 혈구 수, 혈당, 혈중 지질, 간 기능, 헤모글로빈, 사이토카인, 인슐린, 고감도 C 반응성 단백질, 렙틴 및 소마토메딘 C를 포함한 더 많은 검사를 처리해야 합니다.

대변 ​​수집, 보존 및 감지:

50ml 원심분리기 튜브를 사용하여 대변 샘플을 수집합니다. 각 튜브에는 지원자에 해당하는 고유한 인코딩이 표시되어 있습니다. 자원봉사자가 대변 샘플을 수집할 때 가능한 한 빨리 멸균 면봉이나 이쑤시개를 사용하여 대변 샘플을 멸균 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 채집 샘플은 10g 이상이어야 합니다. 원심분리기 튜브는 저온의 장소에 두었다가 냉장고로 옮겨 DNA 추출 및 기타 시험을 할 때까지 -80℃에서 보관해야 합니다. 짧은 사슬 지방산 함량(SCFA), pH, 수분 함량, 면역 인자 sIgA 및 칼프로텍틴을 포함한 테스트가 처리됩니다.

대변 ​​내 박테리아의 16S rRNA 유전자 시퀀싱:

DNA 추출:

각 샘플에 대해 약 0.2g의 대변을 칭량하고 대변 게놈 DNA 추출 키트(Qiagen, 모델 DP328)를 사용하여 전체 DNA를 추출합니다. 그런 다음 추출된 DNA의 농도와 순도를 NanoDrop(Thermo, 2000C)을 사용하여 측정하여 각 샘플이 시퀀싱 요구 사항을 충족하는지 확인했습니다.

샘플 시퀀싱:

16S rRNA 유전자(V3-V4)의 PCR 증폭은 범용 정방향 프라이머 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' 및 역방향 프라이머 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'으로 수행됩니다. 증폭 시스템은 멸균수 19.375ul, 완충액 2.5ul, 주형 1ul, 프라이머 1ul, Pyrobest DNA polymerase 0.125ul을 포함합니다. PCR 순환 조건은 다음과 같습니다: 94℃ 5분, 이어서 94℃에서 30초 동안 변성, 50℃에서 30초 동안 변성, 72℃에서 30초 동안 연장, 그 다음 72℃에서 5분 동안 연장을 포함하는 몇몇 주기. PCR 산물 전기영동은 다양한 적용 주기로 적절한 PCR 산물을 결정하기 위해 수행됩니다. 증폭된 산물을 tagged primer와 label에 연결한 후 Illumina MiSeq의 sequencing platform으로 paired-end sequencing을 진행하며 read length는 약 250bp입니다.

PFE를 이용한 아동 비만에 대한 개입 치료:

16S rRNA 유전자 시퀀싱 후, 고등학생 및 유사한 장내 세균총 프로파일을 가진 약 40명의 비만 지원자가 중재 치료 연구에 참여하도록 선택됩니다. 끼어든 음식은 "닥터. 에브라임" 식물발효추출물(PFE). 연구 대상의 이전 식단을 변경하지 않고 각 연구 대상은 아침과 저녁 효소에 각각 30mL PFE를 마시며 중재는 8주 동안 지속됩니다. 8주간의 개입 전후에 연구 대상의 대변 및 혈액 샘플을 수집하고 분석하여 생리학적 및 생화학적 지표를 얻습니다. 각 단계에서 분변 샘플의 모든 16S rRNA 유전자를 시퀀싱합니다.