Studie om kosttilskuddsintervensjonsteknikker for fedme hos barn

Før akademisk eksamen blir brev til foreldre, informert samtykke og frivillig spørreskjema gitt ut til skolebarn og deres foresatte. Vi forteller de frivillige og deres foresatte hva med denne studien og inviterer dem til å delta i denne studien. Det er kun frivillige og foresattes signatur på brevet til foreldrene og informert samtykke som kan gjøre forskningsobjekter.

Eksperimentelle prosedyrer:

To ganger med medisinske undersøkelser, blod- og avføringsprøvetaking er nødvendig for hele eksperimentets forskning. Førstegangseksamen og prøvesamling gjennomføres under akademisk eksamen; den andre gangen fortsetter etter inngrepet.

Rekruttering av forskningsobjekter:

I følge akademisk undersøkelse og frivillige spørreskjemaer, rekrutteres ca. 300 friske barn uten å ha tatt antibiotika før 3 måneder, og deres BMI bør være i overvektsområdet. Deretter måles midjeomkretsen og forholdet mellom kroppsfett. Hvis forholdet mellom midjestørrelse og vekt på dem er >0,46 og de har høyere prosentandel kroppsfett (>20 % for gutter og under 12 år gamle jenter, >25 % for 12 år gamle jenter), samles dataene inn og legges inn til databasen. Omtrent 40 friske barn mellom 15-18 år rekrutteres til å delta i neste intervensjonsforskning.

Generell kroppsundersøkelse:

Ved akademisk eksamen registreres studentens grunnleggende medisinske data inkludert høyde og vekt, og deretter beregnes BMI. Hvis hans/hennes BMI er i overvektsområdet, blir hans/hennes kroppssammensetning målt og registrert.

MR- og MRS-test:

Alle pasientene gjennomgikk MR-skanning utført av en erfaren teknolog ved bruk av en 3 Tesla MR-enhet (MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Erlangen, Tyskland). MR og MRS ble utført med henholdsvis multi-ekko Dixon- og HISTO-sekvenser for å beregne hepatisk protondensitetsfettfraksjon (PDFF).

Blodinnsamling, konservering og test:

Blodinnsamling og konservering fortsetter i standarden for medisinsk undersøkelse. Når du samler inn data om fedme, bør testene av blodtelling, blodsukker, serumlipid og leverfunksjon behandles for overvektige barn. Ved intervenering bør flere tester inkludert blodtelling, blodsukker, blodlipider, leverfunksjon, hemoglobin, cytokiner, insulin, høysensitivt C-reaktivt protein, leptin og somatomedin C behandles.

Innsamling, konservering og påvisning av avføring:

50 ml sentrifugerør brukes til å samle avføringsprøver. Hvert rør er merket med en unik koding som tilsvarer en frivillig. Når frivillige samler avføringsprøver, overfører de avføringsprøvene til sterile sentrifugerør ved hjelp av sterile vattpinner eller tannpirkere så snart som mulig. Samleprøvene bør være mer enn 10 g. Sentrifugerørene skal settes på et sted med lav temperatur, deretter overføres til kjøleskap og oppbevares ved -80 ℃ til DNA-ekstraksjon og annen testing. Testene inkludert kortkjedede fettsyreinnhold (SCFA), pH, vanninnhold, immunfaktorer sIgA og Calprotectin behandles.

16S rRNA-gensekvensering av bakterier i avføring:

DNA-ekstraksjon:

For hver prøve veies ca. 0,2 g avføring og det totale DNA ekstraheres ved bruk av fekalt genomisk DNA-ekstraksjonssett (Qiagen, modell DP328). Og deretter ble konsentrasjonen og renheten til ekstrahert DNA målt ved hjelp av NanoDrop (Thermo, 2000C) for å garantere at hver prøve oppfyller sekvenseringskravet.

Eksempelsekvensering:

PCR-amplifisering av 16S rRNA-genet (V3-V4) utføres med universelle fremre primere 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' og revers primer 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'. Amplifikasjonssystemet inkluderer sterilt vann 19,375 ul, buffer 2,5 ul, mal 1 ul, primere 1 ul, Pyrobest DNA-polymerase 0,125 ul. PCR-syklusforhold var som følger: 94 ℃ 5 min, etterfulgt av noen sykluser inkludert 94 ℃ denaturering i 30 sekunder, 50 ℃ renaturering i 30 s, 72 ℃ forlenget i 30 sekunder, deretter 72 ℃ forlenget i 5 minutter. PCR-produktelektroforese utføres for å bestemme riktig PCR-produkt med forskjellige påføringssykluser. Etter å ha koblet amplifiserte produkter til merkede primere og etiketter, utføres sekvensering av paret ende med sekvenseringsplattformen til Illumina MiSeq, og leselengden er omtrent 250 bp.

Intervensjonsbehandling på fedme hos barn med PFE:

Etter 16S rRNA-gensekvensering velges rundt 40 overvektige frivillige på videregående skole og med lignende tarmfloraprofiler til å delta i intervensjonsbehandlingsforskningen. Den mellomliggende maten er "Dr. Ephraim" plantefermenteringsekstrakt (PFE). Uten å endre de tidligere diettene til forskningsobjekter, drikker hvert forskningsobjekt ved å drikke 30mL PFE ved henholdsvis morgen- og kveldsenzymer, og intervensjonen varer i 8 uker. Før og etter 8-ukers intervensjon blir avførings- og blodprøver av forskningsobjekter samlet inn og analysert for å oppnå deres fysiologiske og biokjemiske indekser. Hele 16S rRNA-genet til fekale prøver i hvert trinn sekvenseres.