Undersøgelse af diæternæringsinterventionsteknikker til fedme hos børn

Før den akademiske eksamen udsendes brev til forældre, informeret samtykke og frivillige spørgeskemaer til skolebørn og deres værger. Vi fortæller de frivillige og deres værger hvad med denne undersøgelse og inviterer dem til at deltage i denne undersøgelse. Kun de frivillige og værgernes underskrift på brevet til forældrene og informeret samtykke er i stand til at gøre forskningsobjekter.

Eksperimentelle procedurer:

To gange med medicinske undersøgelser, blod- og afføringsprøve er påkrævet for hele eksperimentets forskning. Første gangs eksamener og prøveindsamling udføres under den akademiske eksamen; anden gang fortsættes efter indgrebet.

Rekruttering af forskningsobjekter:

Ifølge akademisk undersøgelse og frivillige spørgeskemaer rekrutteres omkring 300 raske børn, der ikke har taget antibiotika før 3 måneder, og deres BMI skulle ligge i det overvægtige område. Derefter måles deres taljeomkreds og forholdet mellem kropsfedt. Hvis forholdet mellem taljestørrelse og vægt af dem er >0,46, og de har en højere procentdel af kropsfedt (>20 % for drenge og under 12 år gamle piger, >25 % for 12 år gamle piger), indsamles dataene og indtastes til databasen. Omkring 40 raske børn mellem 15-18 år rekrutteres til at deltage i den næste interventionsforskning.

Generel kropsundersøgelse:

Ved akademisk eksamen registreres den studerendes grundlæggende medicinske data inklusiv højde og vægt, og derefter beregnes deres BMI. Hvis hans/hendes BMI er i det overvægtige område, måles og registreres hans/hendes kropssammensætning.

MR og MRS test:

Alle patienter gennemgik MR-scanning udført af en erfaren teknolog ved hjælp af en 3 Tesla MR-enhed (MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Erlangen, Tyskland). MRI og MRS blev udført med henholdsvis multi-ekko Dixon- og HISTO-sekvenser for at beregne hepatisk protondensitetsfedtfraktion (PDFF).

Blodopsamling, konservering og test:

Blodopsamling og konservering foregår i standarden for lægeundersøgelse. Når der indsamles data om fedme, bør test af blodtal, blodsukker, serumlipid og leverfunktion behandles for overvægtige børn. Når der gribes ind, bør flere tests, herunder blodtal, blodsukker, blodlipider, leverfunktion, hæmoglobin, cytokiner, insulin, højfølsomt C-reaktivt protein, leptin og somatomedin C behandles.

Indsamling, konservering og detektion af afføring:

50 ml centrifugerør bruges til at indsamle afføringsprøver. Hvert rør er markeret med en unik kodning, der svarer til en frivillig. Når frivillige indsamler afføringsprøver, overfører de afføringsprøverne til sterile centrifugerør ved hjælp af sterile vatpinde eller tandstikker så hurtigt som muligt. Prøverne skal være mere end 10 g. Centrifugerørene skal placeres på et lavtemperatursted, overføres derefter til køleskabet og opbevares ved -80 ℃ indtil DNA-ekstraktion og anden testning. Testene, herunder indhold af kortkædede fedtsyrer (SCFA), pH, vandindhold, immunfaktorer sIgA og Calprotectin behandles.

16S rRNA gensekventering af bakterier i afføring:

DNA ekstraktion:

For hver prøve vægtes ca. 0,2 g afføring, og det samlede DNA ekstraheres ved hjælp af fækal genomisk DNA-ekstraktionssæt (Qiagen, model DP328). Og derefter blev koncentrationen og renheden af ​​ekstraheret DNA målt ved hjælp af NanoDrop (Thermo, 2000C) for at sikre, at hver prøve opfylder sekventeringskravet.

Prøvesekvensering:

PCR-amplifikation af 16S rRNA-gen (V3-V4) udføres med universelle fremadgående primere 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' og omvendt primer 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'. Amplifikationssystemet omfatter sterilt vand 19,375 ul, buffer 2,5 ul, template 1 ul, primere 1 ul, Pyrobest DNA-polymerase 0,125 ul. PCR-cyklusbetingelser var som følger: 94 ℃ 5 min., efterfulgt af nogle cyklusser, herunder 94 ℃ denaturering i 30 sek., 50 ℃ renaturering i 30 s, 72 ℃ forlængelse i 30 s, derefter 72 ℃ forlængelse i 5 min. PCR-produktelektroforese udføres for at bestemme det passende PCR-produkt med forskellige påføringscyklusser. Efter tilslutning af amplificerede produkter til mærkede primere og etiketter udføres parret ende-sekventering med sekventeringsplatformen af ​​Illumina MiSeq, og læselængden er omkring 250bp.

Interventionsbehandling af fedme hos børn med PFE:

Efter 16S rRNA-gensekventering er omkring 40 overvægtige frivillige i gymnasiet og med lignende tarmfloraprofiler udvalgt til at deltage i interventionsbehandlingsforskningen. Den mellemliggende mad er "Dr. Ephraim" plantefermenteringsekstrakt (PFE). Uden at ændre forskningsobjekternes tidligere diæter drikker hvert forskningsobjekt ved at drikke 30mL PFE ved henholdsvis morgen- og aftenenzymer, og interventionen varer i 8 uger. Før og efter 8 ugers intervention indsamles og analyseres afførings- og blodprøver af forskningsobjekter for at opnå deres fysiologiske og biokemiske indekser. Hele 16S rRNA-genet fra fækale prøver i hvert trin sekventeres.