Étude sur les techniques d'intervention en nutrition diététique pour l'obésité infantile

Avant l'examen académique, la lettre aux parents, le consentement éclairé et le questionnaire du volontaire sont remis aux écoliers et à leurs tuteurs. Nous disons aux volontaires et à leurs tuteurs ce qu'il en est de cette étude et les invitons à participer à cette étude. Seule la signature des bénévoles et des tuteurs sur la lettre aux parents et le consentement éclairé sont aptes à faire l'objet de la recherche.

Procédures expérimentales:

Deux fois des examens médicaux, la collecte d'échantillons de sang et de selles est nécessaire pour toute la recherche expérimentale. Les premiers examens et la collecte d'échantillons ont lieu pendant l'examen académique ; la deuxième fois est poursuivie après l'intervention.

Recruter des objets de recherche :

Selon l'examen académique et les questionnaires des volontaires, environ 300 enfants en bonne santé sans prise d'antibiotiques avant 3 mois sont recrutés et leur IMC devrait se situer dans la fourchette obèse. Ensuite, leur tour de taille et le taux de graisse corporelle sont mesurés. Si le rapport tour de taille/poids est > 0,46 et qu'ils ont un pourcentage de graisse corporelle plus élevé (> 20 % pour les garçons et les filles de moins de 12 ans, > 25 % pour les filles de 12 ans), les données sont collectées et saisies à la base de données. Environ 40 enfants en bonne santé âgés de 15 à 18 ans sont recrutés pour participer à la prochaine recherche interventionnelle.

Examen général du corps :

Lors de l'examen académique, les données médicales de base de l'étudiant, y compris sa taille et son poids, sont enregistrées, puis son IMC est calculé. Si son IMC se situe dans la fourchette obèse, sa composition corporelle est mesurée et enregistrée.

Test IRM et MRS :

Tous les patients ont subi une IRM réalisée par un technologue expérimenté à l'aide d'une unité MR 3 Tesla (MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Erlangen, Allemagne). L'IRM et la MRS ont été réalisées avec des séquences multi-écho Dixon et HISTO, respectivement, pour calculer la fraction graisseuse de densité de protons hépatiques (PDFF).

Prélèvement, conservation et analyse du sang :

La collecte et la conservation du sang se déroulent selon les normes de l'examen médical. Lors de la collecte des données sur l'obésité, les tests de numération globulaire, de glycémie, de lipides sériques et de fonction hépatique doivent être traités pour les enfants obèses. Lors de l'intervention, d'autres tests comprenant la numération globulaire, la glycémie, les lipides sanguins, la fonction hépatique, l'hémoglobine, les cytokines, l'insuline, la protéine C-réactive à haute sensibilité, la leptine et la somatomédine C doivent être effectués.

Collecte, conservation et détection des selles :

Des tubes à centrifuger de 50 ml sont utilisés pour prélever des échantillons de selles. Chaque tube est marqué d'un codage unique correspondant à un volontaire. Lorsque les volontaires collectent des échantillons de selles, ils transfèrent les échantillons de selles dans un tube à centrifuger stérile à l'aide d'écouvillons stériles ou de cure-dents dès que possible. Les échantillons collectés doivent peser plus de 10 g. Les tubes à centrifuger doivent être placés dans un endroit à basse température, puis transférés au réfrigérateur et stockés à -80 ℃ jusqu'à l'extraction de l'ADN et d'autres tests. Les tests comprenant la teneur en acides gras à chaîne courte (SCFA), le pH, la teneur en eau, les facteurs immunitaires sIgA et la calprotectine sont traités.

Séquençage du gène ARNr 16S des bactéries dans les selles :

Extraction d'ADN :

Pour chaque échantillon, environ 0,2 g de selles sont pesés et l'ADN total est extrait à l'aide du kit d'extraction d'ADN génomique fécal (Qiagen, modèle DP328). Ensuite, la concentration et la pureté de l'ADN extrait ont été mesurées à l'aide de NanoDrop (Thermo, 2000C) pour garantir que chaque échantillon répond aux exigences de séquençage.

Séquençage des échantillons :

L'amplification par PCR du gène de l'ARNr 16S (V3-V4) est réalisée avec les amorces sens universelles 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' et l'amorce antisens 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'. Le système d'amplification comprend 19,375 ul d'eau stérile, 2,5 ul de tampon, 1 ul de matrice, 1 ul d'amorces, 0,125 ul d'ADN polymérase Pyrobest. Les conditions de cycle PCR étaient les suivantes : 94 ℃ 5 min, suivis de certains cycles, dont 94 ℃ de dénaturation pendant 30 s, 50 ℃ de renaturation pendant 30 s, 72 ℃ d'extension pendant 30 s, puis 72 ℃ d'extension pendant 5 min. L'électrophorèse du produit PCR est effectuée pour déterminer le produit PCR approprié avec différents cycles d'application. Après avoir connecté les produits amplifiés aux amorces et étiquettes marquées, le séquençage apparié est effectué avec la plate-forme de séquençage d'Illumina MiSeq, et la longueur de lecture est d'environ 250 pb.

Traitement d'intervention sur l'obésité infantile avec PFE :

Après le séquençage du gène de l'ARNr 16S, environ 40 volontaires obèses au lycée et présentant des profils de flore intestinale similaires sont sélectionnés pour participer à la recherche sur le traitement interventionnel. La nourriture intermédiaire est "Dr. Ephraïm" extrait de fermentation végétale (PFE). Sans changer les régimes alimentaires précédents des objets de recherche, chaque objet de recherche boit en buvant 30 ml de PFE aux enzymes du matin et du soir respectivement, et l'intervention dure 8 semaines. Avant et après une intervention de 8 semaines, des échantillons de selles et de sang d'objets de recherche sont prélevés et analysés pour obtenir leurs indices physiologiques et biochimiques. Tous les gènes d'ARNr 16S des échantillons fécaux à chaque étape sont séquencés.