Studie om kostnäringsinterventionstekniker för barnfetma

Före akademisk prövning släpps brev till föräldrar, informerat samtycke och frivilligfrågeformulär till skolbarn och deras vårdnadshavare. Vi berättar för volontärerna och deras vårdnadshavare vad om denna studie och inbjuder dem att delta i denna studie. Endast frivilliga och vårdnadshavares underskrift på brevet till föräldrarna och informerat samtycke kan göra forskningsobjekten.

Experimentella procedurer:

Två gånger av medicinska undersökningar, blod- och avföringsprovtagning krävs för hela experimentforskningen. Första tentamen och provinsamling sker under akademisk examination; den andra gången genomförs efter ingreppet.

Rekrytering av forskningsobjekt:

Enligt akademisk undersökning och frivilliga frågeformulär rekryteras cirka 300 friska barn utan att ha tagit antibiotika innan 3 månader och deras BMI bör ligga i överviktsintervallet. Därefter mäts deras midjemått och förhållandet mellan kroppsfett. Om förhållandet mellan midjestorlek och vikt för dem är >0,46 och de har högre andel kroppsfett (>20 % för pojkar och under 12 år gamla flickor, >25 % för 12 år gamla flickor), samlas data in och matas in till databasen. Ett 40-tal friska barn mellan 15-18 år rekryteras för att delta i nästa interventionsforskning.

Allmän kroppsbesiktning:

Vid akademisk examination registreras studentens grundläggande medicinska data inklusive längd och vikt, och sedan beräknas deras BMI. Om hans/hennes BMI ligger i det överviktiga intervallet, mäts och registreras hans/hennes kroppssammansättning.

MRT och MRS-test:

Alla patienter genomgick MRT-skanning utförd av en erfaren tekniker med en 3 Tesla MR-enhet (MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Erlangen, Tyskland). MRI och MRS utfördes med multi-eko Dixon- respektive HISTO-sekvenser för att beräkna leverprotondensitetsfettfraktion (PDFF).

Bloduppsamling, konservering och test:

Bloduppsamling och konservering fortgår i standarden för medicinsk undersökning. Vid insamling av data om fetma bör tester av blodvärde, blodsocker, serumlipider och leverfunktion bearbetas för överviktiga barn. Vid ingripande bör fler tester inklusive blodvärde, blodsocker, blodlipider, leverfunktion, hemoglobin, cytokiner, insulin, högkänsligt C-reaktivt protein, leptin och somatomedin C behandlas.

Insamling, konservering och upptäckt av avföring:

50 ml centrifugrör används för att samla avföringsprover. Varje rör är märkt med en unik kodning som motsvarar en frivillig. När frivilliga samlar avföringsprover överför de avföringsproverna till ett sterilt centrifugrör med hjälp av sterila pinnar eller tandpetare så snart som möjligt. De samlade proverna bör väga mer än 10 g. Centrifugerören ska placeras på lågtemperaturställe, överförs sedan till kylskåpet och förvaras vid -80 ℃ tills DNA-extraktion och annan testning. Testerna inklusive kortkedjiga fettsyror (SCFA), pH, vattenhalt, immunfaktorer sIgA och Calprotectin bearbetas.

16S rRNA-gensekvensering av bakterier i avföring:

DNA-extraktion:

För varje prov vägs cirka 0,2 g avföring och det totala DNA extraheras med användning av fekal genomisk DNA-extraktionskit (Qiagen, modell DP328). Och sedan mättes koncentrationen och renheten av extraherat DNA med hjälp av NanoDrop (Thermo, 2000C) för att garantera att varje prov uppfyller sekvenseringskravet.

Provsekvensering:

PCR-amplifiering av 16S rRNA-genen (V3-V4) utförs med universella framåtriktade primrar 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' och omvänd primer 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'. Amplifieringssystemet inkluderar sterilt vatten 19,375 ul, buffert 2,5 ul, mall 1 ul, primers 1 ul, Pyrobest DNA-polymeras 0,125 ul. PCR-cykelförhållandena var som följer: 94 ℃ 5 min, följt av några cykler inklusive 94 ℃ denaturering i 30 s, 50 ℃ renaturering i 30 s, 72 ℃ förlängning i 30 s, sedan 72 ℃ förlängning i 5 min. PCR-produktelektrofores utförs för att bestämma den lämpliga PCR-produkten med olika appliceringscykler. Efter anslutning av amplifierade produkter till taggade primers och etiketter, utförs parad-end-sekvensering med sekvenseringsplattformen för Illumina MiSeq, och läslängden är cirka 250 bp.

Interventionsbehandling mot barnfetma med PFE:

Efter 16S rRNA-gensekvensering väljs cirka 40 överviktiga frivilliga i gymnasiet och med liknande tarmfloraprofiler för att delta i interventionsbehandlingsforskningen. Den mellanliggande maten är "Dr. Ephraim" växtfermentationsextrakt (PFE). Utan att ändra forskningsobjektens tidigare dieter dricker varje forskningsobjekt genom att dricka 30mL PFE vid morgon- respektive kvällsenzymer, och interventionen varar i 8 veckor. Före och efter 8 veckors intervention samlas avförings- och blodprover av forskningsobjekt in och analyseras för att erhålla deras fysiologiska och biokemiska index. Hela 16S rRNA-genen från fekala prover i varje steg sekvenseras.