Исследование методов диетического питания при детском ожирении

Перед академическим экзаменом школьникам и их опекунам выдается письмо родителям, информированное согласие и анкета волонтера. Мы рассказываем добровольцам и их опекунам об этом исследовании и приглашаем их принять участие в этом исследовании. Только добровольцы и опекуны, подписавшие письмо родителям и информированное согласие, имеют право на объекты исследования.

Экспериментальные процедуры:

Два раза медицинские осмотры, сбор образцов крови и стула требуется для всего исследования эксперимента. Первый раз экзамены и сбор проб проводятся во время академического экзамена; второй раз проводится после вмешательства.

Набор объектов исследования:

Согласно академическому обследованию и опросам добровольцев, было набрано около 300 здоровых детей, не принимавших антибиотики до 3 месяцев, и их ИМТ должен быть в диапазоне ожирения. Затем измеряется их окружность талии и соотношение жировых отложений. Если отношение размера талии к весу у них >0,46 и у них более высокий процент жира в организме (>20% у мальчиков и девочек до 12 лет, >25% у девочек 12 лет), данные собираются и вводятся. в базу данных. Около 40 здоровых детей в возрасте от 15 до 18 лет набираются для участия в следующем интервенционном исследовании.

Общий осмотр тела:

На академическом экзамене записываются основные медицинские данные студента, включая рост и вес, а затем рассчитывается его ИМТ. Если его/ее ИМТ находится в диапазоне ожирения, его/ее состав тела измеряется и записывается.

МРТ и МРС-тест:

Всем пациентам было проведено МРТ-сканирование, выполненное опытным лаборантом на аппарате МРТ мощностью 3 Тесла (MAGNETOM Skyra, Siemens Healthcare, Эрланген, Германия). МРТ и МРС были выполнены с последовательностями мульти-эхо Диксона и HISTO, соответственно, для расчета жировой фракции протонной плотности в печени (PDFF).

Сбор, хранение и анализ крови:

Сбор и консервация крови осуществляются в соответствии со стандартом медицинского освидетельствования. При сборе данных об ожирении у детей с ожирением должны быть обработаны анализы крови, глюкозы в крови, липидов сыворотки и функции печени. При вмешательстве следует провести дополнительные тесты, включая анализ крови, уровень глюкозы в крови, липиды крови, функцию печени, гемоглобин, цитокины, инсулин, С-реактивный белок высокой чувствительности, лептин и соматомедин С.

Сбор стула, сохранение и обнаружение:

Для сбора образцов кала используются центрифужные пробирки объемом 50 мл. Каждая пробирка маркируется уникальной кодировкой, соответствующей добровольцу. Когда добровольцы собирают образцы стула, они как можно скорее переносят образцы стула в стерильную центрифужную пробирку с помощью стерильных тампонов или зубочисток. Отбираемые пробы должны быть более 10 г. Центрифужные пробирки следует поместить в место с низкой температурой, затем перенести в холодильник и хранить при температуре -80 ℃ до выделения ДНК и других анализов. Обрабатываются тесты, включающие содержание короткоцепочечных жирных кислот (SCFA), pH, содержание воды, иммунные факторы sIgA и кальпротектин.

Секвенирование гена 16S рРНК бактерий в стуле:

Экстракция ДНК:

Для каждого образца взвешивают около 0,2 г стула и выделяют общую ДНК с использованием набора для выделения фекальной геномной ДНК (Qiagen, модель DP328). Затем с помощью NanoDrop (Thermo, 2000C) измеряли концентрацию и чистоту выделенной ДНК, чтобы гарантировать соответствие каждого образца требованиям секвенирования.

Пример последовательности:

ПЦР-амплификацию гена 16S рРНК (V3-V4) проводят с универсальными прямыми праймерами 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3' и обратным праймером 5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3'. Система амплификации включает стерильную воду 19,375 мкл, буфер 2,5 мкл, матрицу 1 мкл, праймеры 1 мкл, ДНК-полимеразу Pyrobest 0,125 мкл. Условия циклирования ПЦР были следующими: 94 ℃ 5 минут, затем несколько циклов, включая денатурацию 94 ℃ в течение 30 с, ренатурацию 50 ℃ в течение 30 с, 72 ℃ в течение 30 с, затем 72 ℃ в течение 5 минут. Электрофорез продукта ПЦР проводят для определения соответствующего продукта ПЦР с различными циклами применения. После соединения амплифицированных продуктов с мечеными праймерами и метками выполняется секвенирование парных концов с помощью платформы секвенирования Illumina MiSeq, и длина считывания составляет около 250 п.н.

Интервенционное лечение детского ожирения с помощью PFE:

После секвенирования гена 16S рРНК около 40 добровольцев, страдающих ожирением, старшеклассников и с аналогичными профилями кишечной флоры, были отобраны для участия в исследовании интервенционной терапии. Промежуточная еда - "Dr. Экстракт ферментации растений Ефремова (БФЭ). Без изменения предыдущего рациона испытуемых, каждый испытуемый выпивает по 30 мл ФФЭ утром и вечером ферментов соответственно, а вмешательство длится 8 недель. До и после 8-недельного вмешательства собирают и анализируют образцы кала и крови объектов исследования для получения их физиологических и биохимических показателей. Все гены 16S рРНК образцов фекалий на каждой стадии секвенируют.