IVM에서 성숙 배양 배지에 대한 암피레귤린 대 비암피레귤린 보충.

이 연구에서 구별할 수 있는 두 가지 유형의 환자가 있습니다.

• 다낭성 난소 형태 + 정상 주기 길이(최대 35일). 이 그룹의 대부분의 피험자는 비증후군성 다낭성 난소를 갖고 있으며 PCOS가 없습니다. 이 환자들에서 AMH는 약간만 상승하고 FSH의 영향으로 주기적으로 난포 발달이 일어납니다.
• PCOS - 다낭성 난소 형태 + 희발월경(월경 기간이 35일 이상 간격으로 발생하며 1년에 4~9회만 있음) 또는 무월경. 종종 AMH 수치가 크게 상승하고 안드로겐과다혈증이 수반되는 이러한 환자에서 상대적인 FSH 저항성은 작은 전정부 여포 상태에서 난포 성장을 정지시킵니다. 우성 난포의 자발적인 선택은 발생하지 않거나 드물게 발생합니다. 대부분의 난포는 폐쇄성입니다. 이 환자의 중요한 비율은 BMI가 25보다 높습니다. 이 환자들은 일반적으로 이전 그룹의 환자들과 동일한 표준 성선자극호르몬 자극 요법을 받지만, 자극 3일째에 가장 큰 난포의 직경이 8mm 미만인 경우, 환자들은 추가로 1~2일의 성선자극호르몬 자극을 받습니다. 또한, 이러한 환자는 일반적으로 IVM 주기가 시작되기 전에 2-3주 동안 OCP를 받고 OCP 중단 후 대략 5일째에 자극을 시작합니다. 그러나, 이 환자들은 난포의 내인성 FSH 유도 모집이 없기 때문에 자극의 시작은 다소 유연합니다.
• IVM 주기 전에 OCP(경구 피임약) 사용은 의무입니다. OCP(예: Microgynon 30마이크로그램)를 매일 투여하여 난소의 폐색된 난포를 제거합니다. OCP는 14일에서 21일 사이에 제공됩니다(이 방법을 사용하면 배아 연구실에서 주기와 작업 부하를 더 잘 프로그래밍할 수 있습니다).

첫 번째 IVM 주기 전(선별 방문): 모든 피험자는 IVM 치료를 받는 적합성을 평가하기 위해 골반 초음파 스캔을 받게 됩니다. 환자는 혈청학(B형 간염, HIV, 매독) 및 기본 호르몬 프로파일링(LH, FSH, E2, 프로게스테론, AMH, SHBG, 테스토스테론)에 대한 혈액 검사를 받게 됩니다. TSH, thyroperoxidase 항체, prolactin의 추가 분석. IVM 시도 전 지난 3개월 동안 복용한 병용 약물은 모두 알려야 합니다.

첫 번째 IVM 치료 주기:

• 첫 진료소 방문:

  • 모든 피험자는 주기 일(cd1)에 연구 간호사에게 연락하여 첫 번째 Capacitation 배양 주기를 시작합니다. cd1이 주말인 경우 피험자는 월요일에 연구 간호사에게 연락할 것입니다. 피험자는 월경 출혈의 1, 2 또는 3일에 클리닉에 참석할 것입니다. 난소 낭종의 존재를 배제하기 위해 초음파 스캔을 수행하고 호르몬 평가를 위해 혈액 샘플을 채취합니다(HCG, FSH, LH, E2, 프로게스테론). 첫 내원 주기 3일째 저녁에 유연한 성선자극호르몬 자극을 시작하여 여포 발달을 향상시킵니다. 오후 2시에 HP-hMG 150 IU의 첫 번째 복용량. 다음날 오후 2시에 HP-hMG 150 IU의 두 번째 투여. 대상자는 HP-hMG 150 IU 자극 2일 후(즉, 6일째 아침) 골반 초음파 스캔 및 혈액 검사(FSH, LH, E2, 프로게스테론)를 위해 돌아올 것입니다.
  • OCP 출혈 환자에게: OCP 중단 후 발생하는 금단 출혈의 1일, 2일, 3일 또는 4일에 피험자는 클리닉에 출석하여 골반 초음파 검사를 받고 호르몬 평가(FSH)를 위한 혈액 샘플을 채취합니다. , LH, E2, 프로게스테론, AMH, 총 혈청 테스토스테론, SHBG). 첫 번째 클리닉 방문 당일 오후 8시에 HP-hMG의 첫 번째 일일 투여량에서 난포 발달을 향상시키기 위해 유연한 HP-hMG 자극이 시작됩니다. 대상자는 HP hMG 자극 2일 후에 골반 초음파 스캔 및 혈액 검사(FSH, LH, E2, 프로게스테론)를 위해 돌아올 것입니다.

• 6일차에 두 번째 클리닉 방문(HP-hMG 치료 2일 후):

  • 초음파 스캔에서 10mm 미만의 다른 난포와 함께 12mm보다 큰 단일 우성 난포의 존재가 표시되면 난자 회수(OR)는 2일 후인 8:00~9:00시로 예정됩니다. 고정된 타이밍으로 마지막 HP-hMG 주입 후 OR 42 - 46시간을 유지하는 것이 중요합니다. 초음파 검사에서 최대 난포 직경이 8mm 미만인 경우 HP-hMG의 최종 주사는 오후 2시에 시행됩니다. 그리고 난자 검색(OR)은 2일 후인 8시에서 9시 사이에 예정됩니다. 고정된 타이밍으로 마지막 HP-hMG 주입 후 OR 42 - 46시간을 유지하는 것이 중요합니다.
  • OCP 출혈이 있는 환자에게: 초음파 스캔에서 최대 난포 직경이 약 9 mm, HP-hMG의 최종 주사는 오후 2시에 시행됩니다. 그리고 난자 회수(OR)는 2일 후인 8:00~9:00시로 예정되어 있습니다(전신 마취 하에서 - 정확한 OR 시간은 수술 간호사 및 마취과 의사와 논의해야 함). 마지막 HP-hMG 주사 후 OR 시간을 42-46시간으로 일정하게 유지하는 것이 중요합니다.

• 세 번째 방문 - 난자 회수: 난자 회수(OR)는 8:00~10:00시(전신 마취 하)로 예정되어 있습니다. 수술 당일:

  • 난소와 자궁내막의 초음파 스캔이 기록됩니다.
  • 호르몬 프로파일링(LH, FSH, E2, 프로게스테론)을 위해 혈액 샘플을 채취합니다.
• 환자에게서 채취한 모든 난구-난모세포 복합체(COC)를 CAPA 배지에서 24시간 동안 배양합니다.

• CAPA 배양 후, 난모세포의 절반을 무작위로(50/50) 2개의 성숙 트리거 배지로 나눕니다.

  • 그룹 1: Medicult IVM 배지 + AREG+FSH+HSA+인슐린+에스트라디올(AREG-TRIGGER 그룹)
  • 그룹 2: AREG가 추가되지 않은 Medicult IVM 미디어 + FSH+GH+hCG+HSA(CONTROL-TRIGGER 그룹)

• 체외 난모세포 성숙:

  • 난모세포와 난구 세포 사이의 적운 질량(CM) 및 적운 접촉에 대한 COC를 평가하고 등록합니다. 매번 사진을 찍습니다. 완전히 벗겨지고 퇴화된 난모세포를 폐기하십시오.
  • Capacitation 배양 접시에서 Eppendorf 마이크로파이펫을 사용하여 "성숙 배지 1(AREG-TRIGGER 배지)"을 포함하는 "세척 접시"로 COC의 절반(한 번에 5-10개)을 옮기고 철저히 씻습니다(피펫 팁을 로드 최대 5µl 10µl). 그런 다음 "성숙 매체 1(AREG-TRIGGER 매체)"을 사용하여 COC를 "IVM 접시"로 전송합니다.
  • Capacitation 배양 접시에서 COC의 후반부를 "성숙 배지 2(CONTROL-TRIGGER 배지)"가 들어 있는 "세척 접시"로 옮기고 철저히 씻습니다(피펫 팁에 5µl, 최대 10µl). 그런 다음 "성숙 매체 2(CONTROL-TRIGGER 매체)"를 사용하여 COC를 "IVM 접시"로 전송합니다.
  • ~10개의 풀에 COC를 유지합니다.
  • 접시에 적절하게 라벨을 붙이고 인큐베이터에서 COC를 30-32시간 배양합니다.
• 숙성 평가(MII, GVBD, GV)는 30시간에 수행될 것이다. GVBD를 겪었지만 명확한 PB가 없는 난모세포는 32시간에 평가됩니다. 수정은 세포질 내 정자 주입을 사용하여 수행됩니다(난자 검색 또는 성숙 확인 후 3-4시간). 성숙한 난자만 수정됩니다.
• 수정 후 16~18시간에 도립현미경으로 수정 확인을 합니다. 배아 평가는 이스탄불 컨센서스를 사용하여 수정 후 68 ±1시간에 수행됩니다. 표준 배아 유리화 프로토콜이 사용되었습니다. 배아는 얻은 자극 프로토콜에 따라 유리화됩니다(그룹 1 AREG-TRIGGER 또는 그룹 2 - CONTROL-TRIGGER).
• 냉동 배아 이식: 환자는 AREG-TRIGGER 또는 CONTROL-TRIGGER에서 무작위로 배아를 받도록 무작위 배정됩니다. 무작위 그룹의 배아가 없는 경우 다른 그룹의 배아를 이식했습니다.
• 첫 번째 임신 테스트는 배아 이식 후 14일에 수행되었습니다. 양성 임신 검사는 혈청 베타 hCG >5 mIU/mL로 정의되었습니다.
• 임상적 임신은 임신 7주에 심장박동 활동이 감지되고 초음파에서 적어도 하나의 임신낭으로 정의되었습니다.
• 진행 중인 임신은 첫 번째 이식 완료 후 임신 12주 이상에서 심박수가 감지되는 임신으로 정의되었습니다.
• 정상 출산은 임신 24주 이후에 생명의 징후를 보이는 최소 한 명의 신생아의 출생으로 정의되었습니다(쌍둥이는 단일 카운트).
• 실패한 첫 번째 IVM 주기 이후: 첫 번째 IVM 주기(누적 신선 및 냉동 배아 주기)와 관련된 임상 및 배아학적 데이터와 결과에 대해 논의하여 궁극적인 두 번째 IVM 주기에 대한 보다 환자 맞춤형 접근 방식을 확립합니다. 두 번째 IVM 주기에서 환자 맞춤형 접근법은 난포기 관리의 수정으로 구성될 수 있습니다.