Amphiregulin versus Non-Amphiregulin Supplement til modningsdyrkningsmedium i IVM.

Der er to typer patienter, der kan skelnes i denne undersøgelse:

• Polycystisk ovariemorfologi + normal cykluslængde (op til 35 dage). Størstedelen af ​​forsøgspersoner i denne gruppe har ikke-syndromiske polycystiske ovarier og har ikke PCOS. Hos disse patienter er AMH kun moderat forhøjet, og cyklisk follikeludvikling sker under påvirkning af FSH.
• PCOS - Polycystisk ovariemorfologi + oligomenoré (menstruationsperioder forekommer med intervaller på mere end 35 dage, med kun fire til ni perioder på et år) eller amenoré. Hos disse patienter, med ofte stærkt forhøjede AMH-niveauer og samtidig hyperandrogenæmi, resulterer relativ FSH-resistens i standsning af follikulær vækst ved den lille antrale follikulær tilstand. Spontan selektion af en dominant follikel forekommer ikke eller forekommer sjældent. En stor del af folliklerne er atretiske. En vigtig del af disse patienter har et BMI højere end 25. Disse patienter får generelt det samme standard gonadotropinstimuleringsregime som patienterne i den tidligere gruppe, men hvis de største follikler har en diameter på mindre end 8 mm på den tredje dag af stimulering, får patienterne en eller to supplerende dage med gonadotropinstimulering. Desuden tager disse patienter generelt to-tre uger med OCP før starten af ​​IVM-cyklussen og starter stimulering cirka på dag fem efter OCP-seponering. Men da disse patienter ikke har endogen FSH-drevet rekruttering af follikler, er starten af ​​stimulering ret fleksibel.
• Brug af OCP (oral p-pille) før IVM-cyklussen er obligatorisk. OCP (for eksempel Microgynon 30 mikrogram) vil blive administreret dagligt for at fjerne atretiske follikler i æggestokken. OCP vil blive givet i mellem 14 og 21 dage (denne metode giver mulighed for bedre programmering af cyklusser og arbejdsbyrden i embryologisk laboratorium).

Før den første IVM-cyklus (screeningsbesøg): Alle forsøgspersoner vil gennemgå en bækken-ultralydsscanning for at vurdere egnetheden til at gennemgå IVM-behandling. Patienterne vil gennemgå en blodprøve for serologi (hepatitis B, HIV, syfilis) og baseline hormonprofilering (LH, FSH, E2, progesteron, AMH, SHBG, Testosteron). Yderligere analyse af TSH, thyroperoxidase antistoffer, prolaktin. Enhver samtidig medicin, der er taget inden for de sidste 3 måneder forud for IVM-forsøget, skal underrettes.

Første IVM-behandlingscyklus:

• Første klinikbesøg:

  • Alle forsøgspersoner vil kontakte undersøgelsessygeplejersken på cyklusdagen (cd1) for at påbegynde den første Kapacitationskulturcyklus. Hvis cd1 er i weekenden, vil forsøgspersoner kontakte studiesygeplejersken på mandag. Forsøgspersonen vil møde i klinikken på dag 1, 2 eller 3 af menstruationsblødninger. En ultralydsscanning udføres for at udelukke eksistensen af ​​ovariecyster, og der tages en blodprøve til hormonvurdering (HCG, FSH, LH, E2, progesteron). Om aftenen på cyklusdag 3 i det første klinikbesøg vil fleksibel gonadotropin-stimulering blive startet for at forbedre follikulær udvikling. Den første dosis af HP-hMG 150 IE kl. 14.00. Anden dosis næste dag af HP-hMG 150 IE kl. 14.00. Forsøgspersonen vil vende tilbage til en bækken-ultralydsskanning og en blodprøve (FSH, LH, E2, progesteron) efter de to dage med HP-hMG 150 IE-stimulering (dvs. om morgenen dag 6).
  • Til patienter med OCP-blødning: På dag et, to, tre eller fire af abstinensblødningen, der opstår efter seponering af OCP, vil forsøgspersonen komme til klinikken for at gennemgå en bækken-ultralydsskanning, og der tages en blodprøve til hormonvurdering (FSH) , LH, E2, progesteron, AMH, total serum testosteron, SHBG). På dagen for det første klinikbesøg vil fleksibel HP-hMG-stimulering blive startet for at øge follikulær udvikling ved en første daglige dosis af HP-hMG kl. 20.00. Forsøgspersonen vil vende tilbage til en bækken-ultralydsscanning og en blodprøve (FSH, LH, E2, progesteron) efter to dages HP hMG-stimulering.

• Andet klinikbesøg på dag 6 (efter 2 dages HP-hMG-behandling):

  • Hvis ultralydsscanningen viser tilstedeværelsen af ​​en enkelt dominerende follikel større end 12 mm med de andre follikler alle mindre end 10 mm, og oocytudtagningen (OR) vil blive planlagt to dage senere, mellem 8:00 og 9:00. Det er vigtigt at holde OR 42 - 46 timer efter den sidste HP-hMG-injektion som et fast tidspunkt. Hvis ultralydsscanningen viser en maksimal follikeldiameter på mindre end 8 mm, vil en sidste injektion af HP-hMG blive administreret kl. 14.00. og oocytudhentningen (OR) vil blive planlagt to dage senere, mellem 8:00 og 9:00. Det er vigtigt at holde OR 42 - 46 timer efter den sidste HP-hMG-injektion som et fast tidspunkt.
  • Til patienter med OCP-blødning: Hvis ultralydsskanningen viser en maksimal follikulær diameter på ca. 9 mm, vil en sidste injektion af HP-hMG blive administreret kl. 14.00. og oocytudtagningen (OR) vil blive planlagt to dage senere, mellem kl. 8.00 og 9.00 (under generel anæstesi - det nøjagtige tidspunkt for operation bør drøftes med operationssygeplejersker og anæstesilæge). Det er vigtigt at holde OR-tiden konstant på 42-46 timer efter den sidste HP-hMG-injektion.

• Tredje besøg - Oocytudhentning: Oocytudhentning (OR) vil blive planlagt mellem 8:00 og 10:00 h (under generel bedøvelse). På dagen for OR:

  • Der optages en ultralydsscanning af både æggestokke og af endometrieslimhinden.
  • En blodprøve vil blive udtaget til hormonprofilering (LH, FSH, E2, progesteron).
• Alle cumulus-oocytkomplekser (COC) hentet fra patienten dyrkes i CAPA-medium i 24 timer.

• Efter CAPA-dyrkning vil halvdelen af ​​oocytterne blive delt tilfældigt (50/50) til de to modningsudløsende medium.

  • Gruppe 1: Medicult IVM media + AREG+FSH+HSA+Insulin+estradiol (AREG-TRIGGER gruppe)
  • Gruppe 2: Medicult IVM-medier + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER-gruppe) uden AREG tilføjet

• In vitro oocytmodning:

  • Evaluer og registrer COC'er for cumulusmasse (CM) og cumuluskontakt mellem oocyt- og cumulusceller. Tag billeder hver gang. Kassér helt blottede, degenererede oocytter.
  • Overfør halvdelen af ​​COC'erne (5-10 ad gangen) fra Capacitation-kulturskålen til "vaskeskålen" indeholdende "Modningsmedium 1 (AREG-TRIGGER medium)" ved at bruge en Eppendorf-mikropipette og vask dem grundigt (fyld pipettespidserne med 5 µl, maks. 10 µl). Overfør derefter COC'er til "IVM-skålen" med "Modningsmedium 1 (AREG-TRIGGER medium)".
  • Overfør den anden halvdel af COC'erne fra Capacitation-kulturskålen til "vaskeskålen" indeholdende "Modningsmedium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)" og vask dem grundigt (fyld pipettespidser med 5 µl, max. 10 µl). Overfør derefter COC'er til "IVM-skålen" med "Modningsmedium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)".
  • Opbevar COC'er i puljer på ~10.
  • Mærk skålen passende og dyrk COC'er 30-32 timer i en inkubator.
• Evaluering af modning (MII, GVBD, GV) vil blive udført efter 30 timer. Oocytter, der har gennemgået GVBD, men uden klar PB, vil blive vurderet efter 32 timer. Insemination vil blive udført ved hjælp af intra-cytoplasmatisk spermainjektion (3-4 timer efter oocytudtagning eller modningskontrol); kun modne oocytter vil blive insemineret.
• Befrugtningskontrol vil blive udført under et omvendt mikroskop 16-18 timer efter insemination. Embryoevaluering vil blive udført 68 ±1 time efter befrugtning ved hjælp af Istanbul-konsensus. Standard embryovitrifikationsprotokol brugt. Embryoer vil blive forglasset i henhold til opnået stimuleringsprotokol (gruppe 1 AREG-TRIGGER eller gruppe 2 - KONTROL-TRIGGER).
• Frosset embryooverførsel: Patienten vil blive randomiseret til at modtage embryo tilfældigt fra AREG-TRIGGER eller CONTROL-TRIGGER. Hvor ingen embryo(er) fra den randomiserede gruppe var tilgængelige, blev embryo(r) fra den anden gruppe overført.
• Den første graviditetstest blev udført 14 dage efter embryooverførsel; en positiv graviditetstest blev defineret som serum beta hCG >5 mIU/ml
• Klinisk graviditet blev defineret som mindst én svangerskabssæk på ultralyd ved 7 ugers graviditet med påvisning af hjerteslagsaktivitet.
• Igangværende graviditet blev defineret som graviditet med en påviselig hjertefrekvens ved ≥12 ugers graviditet efter afslutningen af ​​den første overførsel.
• Levende fødsel blev defineret som fødslen af ​​mindst én nyfødt efter 24 ugers svangerskab, der udviste ethvert tegn på liv (tvillinger var et enkelt antal).
• Efter en første mislykket IVM-cyklus: De kliniske og embryologiske data og resultater relateret til den første IVM-cyklus (kumulative friske og frosne embryocyklusser) vil blive diskuteret for at etablere en mere patienttilpasset tilgang til en eventuel anden IVM-cyklus. Den patienttilpassede tilgang i den anden IVM-cyklus kan bestå af modifikation af håndteringen af ​​den follikulære fase.