Amfiregulin versus nem amfiregulin kiegészítés az érési tenyésztápközeghez IVM-ben.

Ebben a vizsgálatban két betegtípust lehet megkülönböztetni:

• Policisztás petefészek morfológia + normál ciklushossz (legfeljebb 35 nap). Az ebbe a csoportba tartozó alanyok többsége nem szindrómás policisztás petefészekben szenved, és nem szenved PCOS-ban. Ezeknél a betegeknél az AMH csak mérsékelten emelkedett, és az FSH hatására ciklikus tüszőfejlődés következik be.
• PCOS - Policisztás petefészek morfológia + oligomenorrhoea (35 napnál hosszabb menstruációs periódusok, évente csak négy-kilenc időszakkal) vagy amenorrhoea. Ezeknél a betegeknél, akiknél gyakran erősen megemelkedett AMH-szint és egyidejű hiperandrogenémia, a relatív FSH-rezisztencia a tüszőnövekedés leállását eredményezi a kis antralis follikuláris állapotban. A domináns tüsző spontán szelekciója nem, vagy ritkán fordul elő. A tüszők nagy része atretikus. Ezen betegek jelentős részének BMI-je 25-nél magasabb. Ezek a betegek általában ugyanazt a standard gonadotropin stimulációt kapják, mint az előző csoport betegei, de ha a legnagyobb tüszők átmérője kisebb, mint 8 mm a stimuláció harmadik napján, akkor a betegek egy vagy két napos kiegészítő gonadotropin stimulációt kapnak. Ezen túlmenően ezek a betegek általában két-három hetes OCP-t vesznek az IVM-ciklus kezdete előtt, és körülbelül az OCP megvonása utáni ötödik napon kezdik meg a stimulációt. Mivel azonban ezeknél a betegeknél nincs endogén FSH-vezérelt tüszők toborzása, a stimuláció kezdete meglehetősen rugalmas.
• Az OCP (orális fogamzásgátló tabletta) alkalmazása az IVM ciklus előtt kötelező. Az OCP-t (például Microgynon 30 mikrogramm) naponta kell beadni a petefészek atretikus tüszőinek tisztítására. Az OCP-t 14 és 21 napig adják (ez a módszer lehetővé teszi a ciklusok és a munkaterhelés jobb programozását az embriológiai laborban).

Az első IVM-ciklus (szűrési vizit) előtt: Minden alany kismedencei ultrahangvizsgálaton esik át, hogy értékelje, alkalmas-e az IVM-kezelésre. A betegeket vérvizsgálatnak vetik alá szerológiai (hepatitis B, HIV, szifilisz) és kiindulási hormonprofil (LH, FSH, E2, progeszteron, AMH, SHBG, tesztoszteron) céljából. A TSH, a tiroperoxidáz antitestek, a prolaktin további elemzése. Az IVM-kísérletet megelőző utolsó 3 hónapban minden egyidejűleg szedett gyógyszert értesíteni kell.

Első IVM kezelési ciklus:

• Első klinikai látogatás:

  • Minden alany kapcsolatba lép a vizsgálati nővérrel a ciklus napján (cd1), hogy elindítsa az első Kapacitációs tenyésztési ciklust. Ha a cd1 a hétvégén van, az alanyok hétfőn felveszik a kapcsolatot a vizsgálati nővérrel. Az alany a menstruációs vérzés 1., 2. vagy 3. napján fog megjelenni a klinikán. A petefészek-ciszták fennállásának kizárására ultrahangos vizsgálatot végeznek, és vérmintát vesznek hormonális (HCG, FSH, LH, E2, progeszteron) vizsgálat céljából. Az első klinikai látogatás 3. ciklusnapjának estéjén rugalmas gonadotropin stimuláció indul a tüszőfejlődés fokozása érdekében. Az első adag HP-hMG 150 NE délután 2 órakor. Második adag HP-hMG 150 NE, 14 órakor. Az alany a kétnapos HP-hMG 150 NE stimuláció után (azaz a 6. nap reggelén) visszatér kismedencei ultrahangvizsgálatra és vérvizsgálatra (FSH, LH, E2, progeszteron).
  • OCP-vérzésben szenvedő betegeknél: Az OCP leállítása után fellépő megvonásos vérzés első, második, harmadik vagy negyedik napján az alany a klinikára megy, ahol kismedencei ultrahangvizsgálatot végeznek, és vérmintát vesznek a hormonális értékeléshez (FSH). , LH, E2, progeszteron, AMH, teljes szérum tesztoszteron, SHBG). Az első klinikai látogatás napján rugalmas HP-hMG stimuláció indul a tüszőfejlődés fokozása érdekében, a HP-hMG első napi adagjával este 8 órakor. Az alany két nap HP hMG stimuláció után tér vissza kismedencei ultrahangvizsgálatra és vérvizsgálatra (FSH, LH, E2, progeszteron).

• Második klinikai látogatás a 6. napon (2 napos HP-hMG kezelés után):

  • Ha az ultrahangos vizsgálat egyetlen domináns tüsző jelenlétét mutatja, amely meghaladja a 12 mm-t, és a többi tüsző 10 mm-nél kisebb, és a petesejt-levételt (OR) két nappal később, 8:00 és 9:00 óra között ütemezzük. Fontos, hogy az utolsó HP-hMG injekció beadása után 42-46 óra legyen az OR-t rögzített időzítésként. Ha az ultrahangos vizsgálat 8 mm-nél kisebb maximális tüszőátmérőt mutat, a HP-hMG utolsó injekcióját délután 2 órakor kell beadni. a petesejtek lekérését (OR) pedig két nappal később, 8:00 és 9:00 óra között ütemezzük. Fontos, hogy az utolsó HP-hMG injekció beadása után 42-46 óra legyen az OR-t rögzített időzítésként.
  • OCP-vérzéses betegeknek: Ha az ultrahangos vizsgálat a maximális tüszőátmérőt kb. 9 mm-nél a végső HP-hMG injekciót délután 2 órakor adjuk be. a petesejtek levételét (OR) pedig két nappal később, 8:00 és 9:00 óra között ütemezzük (általános érzéstelenítésben – az OR pontos idejét a műtőnővérrel és az aneszteziológussal kell megbeszélni). Fontos, hogy az OR időpontját az utolsó HP-hMG injekció után 42-46 órában állandóan tartsuk.

• Harmadik látogatás – Petesejtek levétele: A petesejt leválasztás (OR) 8:00 és 10:00 óra között lesz ütemezve (általános érzéstelenítés alatt). A VAGY napján:

  • A petefészkek és az endometrium bélésének ultrahangos vizsgálatát rögzítik.
  • Vérmintát vesznek a hormonális profilalkotáshoz (LH, FSH, E2, progeszteron).
• A páciensből kinyert összes kumulusz-oocita komplexet (COC) CAPA tápközegben tenyésztjük 24 órán át.

• A CAPA-tenyésztést követően a petesejtek felét véletlenszerűen (50/50) osztják a két érési trigger táptalajra.

  • 1. csoport: Medicult IVM táptalaj + AREG+FSH+HSA+inzulin+ösztradiol (AREG-TRIGGER csoport)
  • 2. csoport: Medicult IVM táptalaj + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER csoport) AREG hozzáadása nélkül

• Petesejtek in vitro érése:

  • Értékelje és regisztrálja a COC-kat a kumulusz tömegére (CM) és a kumulusz-kontaktusra a petesejtek és a kumuluszsejtek között. Minden alkalommal készítsen fényképeket. Dobja el a teljesen denudált, degenerált petesejteket.
  • Eppendorf mikropipettával vigye át a COC-k felét (egyszerre 5-10) a Capacitation tenyésztőedényből az "1. érlelési táptalajt (AREG-TRIGGER táptalaj)" tartalmazó "mosóedénybe" és alaposan mossa meg (töltse meg a pipetta hegyét 5µl, max. 10 µl). Ezután vigye át a COC-okat az „IVM-edénybe” „1. érlelési közeggel (AREG-TRIGGER táptalaj)”.
  • Tegye át a COC-ok második felét a Capacitation tenyésztőedényből a "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER táptalaj)"-t tartalmazó "mosótálba", és alaposan mossa le (töltse meg a pipettahegyeket 5 µl-rel, max. 10 µl). Ezután vigye át a COC-okat az „IVM edénybe” a „Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER táptalaj)” segítségével.
  • Tartsa a COC-okat ~10-es készletekben.
  • Az edényt megfelelően címkézze fel, és tenyésztse a COC-okat 30-32 órán át inkubátorban.
• Az érlelés (MII, GVBD, GV) értékelése 30 óránál történik. A GVBD-n átesett, de egyértelmű PB-vel nem rendelkező petesejteket 32 ​​óra elteltével értékeljük. A megtermékenyítést intracitoplazmás spermiuminjekcióval végezzük (3-4 órával a petesejtek kinyerése vagy érési ellenőrzése után); csak az érett petesejteket termékenyítik meg.
• A megtermékenyítést a megtermékenyítés után 16-18 órával fordított mikroszkóp alatt végezzük el. Az embrióértékelést a megtermékenyítés után 68 ± 1 órával végezzük az isztambuli konszenzus alapján. Használt szabványos embrióvitrifikációs protokoll. Az embriókat a kapott stimulációs protokoll szerint üvegesítik (1. csoport AREG-TRIGGER vagy 2. csoport - CONTROL-TRIGGER).
• Fagyasztott embriótranszfer: A páciens véletlenszerűen kerül beadásra az AREG-TRIGGER vagy a CONTROL-TRIGGER segítségével. Ahol a randomizált csoportból nem állt rendelkezésre embrió(k), a másik csoport embriója(i) kerültek átadásra.
• Az első terhességi tesztet 14 nappal az embrióátültetés után végezték el; pozitív terhességi tesztet 5 mIU/ml feletti szérum béta-hCG-ként határoztak meg
• Klinikai terhességet úgy határoztunk meg, hogy legalább egy terhességi zsák ultrahanggal a 7 hetes terhességnél a szívverés aktivitásának kimutatásával.
• Folyamatos terhesség alatt azt a terhességet értjük, amelynek pulzusszáma a ≥12 hetes terhességnél az első transzfer befejezése után kimutatható volt.
• Az élve születést úgy határozták meg, hogy legalább egy újszülött 24 hetes terhesség után megszületett, és bármilyen életjelet mutatott (az ikrek száma egyetlen szám volt).
• Az első sikertelen IVM-ciklus után: Az első IVM-ciklushoz (halmozott friss és fagyasztott embrióciklusok) kapcsolódó klinikai és embriológiai adatok és eredmények megvitatásra kerülnek, hogy egy betegre szabottabb megközelítést alakítsanak ki egy esetleges második IVM-ciklushoz. A betegre szabott megközelítés a második IVM ciklusban a follikuláris fázis kezelésének módosításából állhat.